血清蛋白的醋酸薄膜電泳-展示頁
2025-01-15 09:06本頁面
【正文】 600mL， 稍加熱溶解 ， 冷卻后用蒸餾水定容至1000mL。 ? 【 實(shí)驗(yàn)材料 】 ? 1．電泳儀 包括直流電源整流器和電泳槽兩個(gè)部分。 ? 此法由于操作簡單 ， 快速 ， 分辨率高及重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn) 。 清蛋白泳動(dòng)最快 ， 其余依次為 α α β 及 γ 球蛋白 （ 如圖 35） 。 分子量小 、 等電點(diǎn)低 、 在相同堿性PH值緩沖體系中 ， 帶負(fù)荷電荷多的蛋白質(zhì)顆粒在電場中遷移速度快 。 ? 血清中含有清蛋白 ， α 球蛋白 、 β 球蛋白 、 γ 球蛋白和各種脂蛋白等 。醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? ? 了解電泳的一般原理、掌握醋酸纖維素薄膜電泳操作技術(shù)； ? 掌握醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白的方法。 實(shí)驗(yàn)六 ? 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 ? 由于各種血清蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，因此在 pH ，各種血清蛋白質(zhì)所帶電荷量不同，同時(shí)由于它們的相對(duì)分子質(zhì)量也不同，造成電泳遷移率不同，所以在醋酸纖維薄膜上電泳后，可將各種血清蛋白質(zhì)分離開。 各種蛋白質(zhì)由于氨基酸組分 、立體構(gòu)象 、 分子量 、 等電點(diǎn)及形狀不同 ， 在電場中遷移速度不同 。 ? 例如 ， 以醋酸纖維素薄膜為支持物 ， 正常人血清在 1h左右 ， 染色后可顯示 5條區(qū)帶 。 圖 35正常人血清醋酸纖維素薄膜電泳示意圖 1為清蛋白， 2， 3， 4， 5分別 α 1， α 2， β 及 γ 球蛋白， 6為點(diǎn)樣原點(diǎn) ? 這些區(qū)帶經(jīng)洗脫后可用分光光度法定量 ，也可直接進(jìn)行光吸收掃描自動(dòng)繪出區(qū)帶吸收峰及相對(duì)百分比 。 它不僅可用于分離血清蛋白 ， 還可用于分離脂蛋白 、 血紅蛋白及同工酶的分離測定 。 ? 2．醋酸纖維素薄膜。 置 40C保存 ， 備用 。 ? 漂洗液：取 95%乙醇 （ AR） 45mL， 冰乙酸 （ AR）5mL和蒸餾水 50mL， 混勻置具塞試劑瓶中貯存 。 ? 甲液：取冰乙酸 （ AR） 15mL， 無水乙醇 （ AR） 85mL，混勻置試劑瓶內(nèi) ， 塞緊瓶塞 ， 備用 。 ④ 保存液：液體石蠟 。 【 實(shí)驗(yàn)方法與步驟】 4 實(shí)驗(yàn)方法與步驟 ⑴ 儀器與薄膜的準(zhǔn)備 儀器與薄膜的準(zhǔn)備 ① 醋酸纖維素薄膜的潤濕與選擇 ? 用竹夾子取一片薄膜 ， 小心地平放在盛有緩沖液的平皿中 ， 若漂浮于液面的薄膜在 1530s內(nèi)迅速潤濕 ， 整條薄膜色澤深淺一致 ， 則此膜均勻可用于電泳；若薄膜潤濕緩慢 ， 色澤深淺不一或有條紋及斑點(diǎn)等 ， 則表示薄膜厚薄不均勻應(yīng)棄去 ， 以免影響電泳結(jié)果 。 ② 電泳槽的準(zhǔn)備 根據(jù)電泳槽膜支架的寬度，剪裁尺寸合適的濾紙條。當(dāng)濾紙條全部潤濕后，用玻璃棒輕輕擠壓在膜支架上的濾紙 ? 以驅(qū)趕氣泡 ， 使濾紙的一端能緊貼在膜支架上 。 ③ 電極槽的平衡 ? 用平衡裝置（或自制平衡管）連接兩個(gè)電泳槽，使兩個(gè)電極槽內(nèi)的緩沖液彼此處于同一水平狀態(tài)，一
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