【正文】 BioScience Atherton, CA 25 Fetal neural stem cells NeuralSTEM Bethesda, MD 14 Fetal neural stem cells Biopharmaceuticals Neuronyx Inc. Malvern, PA 10 Neural stem cells Nexell Irvine, CA 120 Hematopoietic stem cells Therapeutics Inc. Osiris Therapeutics Baltimore, MD 75 Mesenchymal stem cells ReNeuron London 17 Neural stem cells Stem Cell Sciences Melbourne, Australia Embryonic stem cells StemCells Inc. Sunnyvale, CA 16 Adult neural stem cells 57 第五十七頁，共七十四頁。 May 14, 1999. 55 第五十五頁，共七十四頁。 Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells。 Derivation of hepatocytes from bone marrow cells in mice after radiationinduced myeloablation。 Washington Post, June 27, 2024. 4, Dr. David Whitehouse, Stem cells promise liver repair。 Nature 406, 257, July 20, 2024. 3, Susan Okie, Bone Marrow Stem Cells Offer Hope for Liver Therapies。 Hepatology 32, 1116, July, 2024. 2, Malcolm Alison et al.。 Previous work with mice and human had shown that adult bone marrow stem cells could form liver, as well as bone, cartilage, tendon, nerve and other tissues. 1, Neil Theise et al.。 53 第五十三頁，共七十四頁。myeloid39。 CMP, mon myeloid progenitor. The myeloid partment includes the cell types indicated。 Schematic view of adult haematopoiesis. HSC, haematopoietic stem cell。 4. 造血細(xì)胞發(fā)揮功能可相對(duì)游離，不需“生物支架〞、 神經(jīng)、血管、外科移植等復(fù)雜的“下游〞工藝，因 此便于直接應(yīng)用于臨床。 2. 造血干／祖細(xì)胞及各系血細(xì)胞的外表標(biāo)志較為清 楚，細(xì)胞表型特征可進(jìn)行定量分析，且可分選。 造血干細(xì)胞 Hematopoietic Stem Cells， HSC， 50 第五十頁，共七十四頁。 四、成體干細(xì)胞 48 第四十八頁，共七十四頁。無論從根底研究角度來講還是從臨床應(yīng)用方面來看，人類 ES細(xì)胞帶給人類的益處遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于在倫理方面可能造成的負(fù)面影響，但隨著觀念的改變，人們會(huì)逐漸認(rèn)識(shí)到 ES細(xì)胞對(duì)臨床醫(yī)學(xué)及生物學(xué)理論研究的重要作用。 46 第四十六頁，共七十四頁。 〔 3〕 ES細(xì)胞真正用于器官克隆與移植仍需要技術(shù)上的突破，因?yàn)槠鞴俚男纬墒且粋€(gè)非常復(fù)雜的三維過程 , 很多器官是兩個(gè)不同胚層的組織相互作用而形成的。因此，必須尋找各種細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的條件和方法，以及不同干細(xì)胞的外表標(biāo)志和分選技術(shù)，從而得到所需要的細(xì)胞或組織。 〔 2〕 ES 細(xì)胞高度未分化 , 具有形成畸胎瘤的可能性 , 因此在使用 ES 細(xì)胞進(jìn)行治療前必須首先體外誘導(dǎo) ES 細(xì)胞分化產(chǎn)生某種特異的組織細(xì)胞或設(shè)計(jì)自殺基因 , 當(dāng)移植的細(xì)胞向腫瘤開展時(shí) , 自殺基因能啟動(dòng)自毀機(jī)制使其凋亡。目前在 ES細(xì)胞研究中存在著建系成功率也不高等問題 , 只在小鼠中建立了穩(wěn)定的 ES細(xì)胞系，家畜、人類細(xì)胞系建立的最佳答案條件仍無定論。 2． ES研究面臨的難題 〔 1〕體外培養(yǎng) ES 細(xì)胞應(yīng)當(dāng)是既能快速無限增殖，又呈未分化狀態(tài)。其可以定向誘導(dǎo)分化為幾乎所有種類的細(xì)胞，甚至形成復(fù)雜的組織和器官，其建系、體外擴(kuò)增、定向誘導(dǎo)分化、調(diào)控機(jī)制、細(xì)胞性能、組織重構(gòu)等方面的研究將在未來的人體發(fā)育、基因功能、藥物開發(fā)、細(xì)胞治療和組織器官替代治療中發(fā)揮重要作用，并成為組織器官移植的新資源 胚胎 干細(xì)胞的研究 42 第四十二頁，共七十四頁。 ES細(xì)胞的別離 早期胚胎的獲取及處理方法 原始生殖細(xì)胞的獲取 分化抑制物的選擇 , 包括：飼養(yǎng)層〔 feeder lopr〕， 條件培養(yǎng)基〔 conditioned medium， CM〕 和分化抑制因子〔 differentiation inhibitory activity， DIA〕 根底培養(yǎng)基的選擇 添加物的選用 41 第四十一頁，共七十四頁。 目前已證明，小鼠、兔、羊。 39 第三十九頁，共七十四頁。 2. 卵細(xì)胞去核培養(yǎng)、轉(zhuǎn)入體細(xì)胞核，體外培養(yǎng)，獲得高質(zhì)量的去透明帶囊胚，由此囊胚進(jìn)一步別離得到胚胎干細(xì)胞。 分化能力檢測(cè) 體外分化試驗(yàn) 體內(nèi)分化試驗(yàn) 嵌合體形成 核移植 37 第三十七頁，共七十四頁。 樣本在激光共聚焦圖像系統(tǒng)下觀察 , 結(jié)果依細(xì)胞是否出現(xiàn)熒光作出判斷。封閉液，羊抗兔 lgG。 35 第三十五頁，共七十四頁。 *結(jié)果判定陽性對(duì)照 ES細(xì)胞染成棕色，陰性對(duì) 照無色。 核型分析 ES細(xì)胞具有正常二倍體核型， 可用核型分析進(jìn)行檢驗(yàn) 34 第三十四頁，共七十四頁。 ES細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定 依 ES細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)〔胞體體積小，核大、有一個(gè)或幾個(gè)核仁〕和生長(zhǎng)特性〔呈克隆狀生長(zhǎng)，細(xì)胞緊密聚集，形似鳥巢，界限不清〕對(duì) ES細(xì)胞進(jìn)行