色譜技術(shù)及相關(guān)設(shè)備知識培訓課件-文庫吧資料
2025-02-22 02:19本頁面
【正文】 此兩組分具有不同的分配系數(shù)是色譜分離的先決條件。如果兩組分的 K或 k值相等，則 α=1 ，兩個組分的色譜峰必將重合，說明分不開。例如，對填充柱，其 β 值一般為 635；對毛細管柱，其 β 值為 60600。 mm3 滯留因子 Rs 設(shè)流動相在柱內(nèi)的線速度為 u，組分在柱內(nèi)線速度為 us，由于固定相對組分有保留作用，所以 us＜ u．此兩速度之比稱為滯留因子 Rs。 k值也決定于組分及固定相熱力學性質(zhì)。 k值越大，說明組分在固定相中的量越多，相當于柱的容量大，因此又稱 分配容量 或 容量因子 。167。167。即 組分在固定相中的質(zhì)量 組分在流動相中的質(zhì)量167。試樣中的各組分具有不同的 K 值是分離的基礎(chǔ)167。組分一定時， K 主要取決于固定相性質(zhì)167。 (一）分配系數(shù) K和分配比 k組分在固定相中的濃度組分在流動相中的濃度1 分配系數(shù) k 如前所述，分配色譜的分離是基于樣品組分在固定相和流動相之間反復多次地分配過程，而吸附色譜的分離是基于反復多次地吸附一脫附過程。 這些峰的寬或窄是由組分在色譜柱中傳質(zhì)和擴散行為決定的，即與色譜過程的動力學性質(zhì)有關(guān) 。1 色譜法的發(fā)展2 色譜法的分類3 色譜法流出曲線及相關(guān)術(shù)語4 色譜法的原理內(nèi)容提要色譜分析的基本原理?組分保留時間為何不同？?色譜峰為何變寬？ 色譜法分析的基本原理 色譜分析的目的是將樣品中各組分彼此分離，組分要達到完全分離，兩峰間的距離必須足夠遠，兩峰間的距離是由組分在兩相間的分配系數(shù)決定的，即與色譜過程的熱力學性質(zhì)有關(guān)。2 根據(jù)色譜峰的保留值，可以進行定性分析。8 分離因子 在定性分析中，通常固定一個色譜峰作為標準（ s），然后再求其它峰（ i）對這個峰的相對保留值．此時， ri/s可能大于 1，也可能小于 1．在多元混合物分析中，通常選擇一對最難分離的物質(zhì)對，將它們的相對保留值作為重要參數(shù)．在這種特殊情況下，可用符號 α 表示： 式中 tR2′ 為后出峰的調(diào)整保留時間，所以這時 α總是大于 1的 。保留體積與保留時間t的關(guān)系如下： VR = tR流動相平均線速度柱長2 保留時間 tr試樣從進樣開始到柱后出現(xiàn)峰極大點時所經(jīng)歷的時間，稱為保留時間，如圖 4－ 1 O′B ．它相應(yīng)于樣品到達柱末端的檢測器所需的時間． 3 校正 (調(diào)整 )保留時間 某組份的保留時間扣除死時間后稱為該組份的某組份的保留時間扣除死時間后稱為該組份的 調(diào)整保留時間調(diào)整保留時間 ，即，即保留時間是色譜法定性的基本依據(jù)，但同一組份的保留時間常受到流動相流速的影響，因此色譜工作者有時用保留體積等參數(shù)進行定性檢定． 4．死體積 V0 指色譜柱在填充后，柱管內(nèi)固定相顆粒間所剩留的空間、色譜儀中管路和連接頭間的空間以及檢測器的空間的總和．當后兩項很小而可忽略不計時，死體積可由死時間與流動相體積流速 F0（ L／ min）計算： V0= t0即峰高一半處對應(yīng)的峰寬，如圖 4－ 1中 GH間的距離．它與標準偏差 σ的關(guān)系是： W1/2 = （ 3） . 基線寬度 W 即色譜峰兩側(cè)拐點上的切線在基線上的截距，如圖 4－ 1中 IJ的距離．它與標準偏差 σ的關(guān)系是： W = 4σ 保留值 － 定性1 死時間 t0死時間 (dead time)不保留組分的保留時間 不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)進入色譜柱時，從進樣到出現(xiàn)峰極大值所需的時間稱為死時間，如圖 4－ 1中 O′A′ 。 （ 2） .（ 1） . 1 色譜法的發(fā)展2 色譜法的分類3 色譜法流出曲線及相關(guān)術(shù)語4 色譜法的原理內(nèi)容提要色譜流出曲線及有關(guān)術(shù)語圖 41基線鋒高 ht 0 如果進樣量很小，濃度很低，在吸附等溫線的線性范圍內(nèi)，色譜峰如果對稱，可用 Gauss正態(tài)分布函數(shù)表示： 式中： C— 不同時間 t時某物質(zhì)的濃度， C0— 進樣濃度， tr— 保留時間， σ — 標準偏差。排阻色譜： 用化學惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對樣品中各組分分子體積阻滯作用的差別來實現(xiàn)分離 。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質(zhì)量作用定律，這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進行交換。分配色譜： 利用不同的組分在兩相間的分配系數(shù)的差別而進行分離， 常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等包括氣 — 液分配色譜和液 液分配色譜。1 色譜法的發(fā)展2 色譜法的分類3 色譜法流出曲線及相關(guān)術(shù)語4 色譜法的原理內(nèi)容提要? 色譜法的分類1 根據(jù)流動相的物態(tài)可分為氣相色譜 (GC)液相色譜 (LC)超臨界流體色譜(SFC){2 根據(jù)固定相的外形分柱色譜平板色譜{平 板 色 譜吸附色譜： 利用吸附劑對不同組分的吸附性能的差別而進行分離， 常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì)。高效液相色譜使用粒徑更細的固定相填充 色譜柱 ，提高色譜柱的塔板數(shù)，以高壓驅(qū)動流動相，使得經(jīng)典液相色譜需要數(shù)日乃至數(shù)月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內(nèi)完成。1960年代，為了分離蛋白質(zhì)、 核酸 等不易汽化的大分子物質(zhì)，氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。相比于早期的液相色譜，以氣體為流動相的色譜對設(shè)備的要求更高，這促進了色譜技術(shù)的機械化、標準化和自動化；氣相色譜需要特殊和更靈敏的檢測裝置，這促進了檢測器的開發(fā)；而氣相色譜的標準化又使得色譜學理論得以形成色譜學理論中有著重要地位的 塔板理論 和Van Deemter方程，以及保留時間、保留指數(shù)、峰寬等概念都是在研究氣相色譜行為的過程中形成的。1952年馬丁和 詹姆斯 提出用氣體作為流動相進行色譜分離的想法，他們用硅藻土吸附的硅酮油作為固定相，用氮氣作為流動相分離了若干種小分子量揮發(fā)性有機酸。茨
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