dna重組技術(shù)的基本步驟(ppt61頁)-文庫吧資料
2025-01-12 02:16本頁面
【正文】 cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄； （ 3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標記； （ 4） 為了增強目的基因的表達水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強子等； （ 5） 有時需要確定目的基因表達的產(chǎn)物存在于細胞的什么部位，往往要加上可以標識存在部位的基因（或做成目的基因與標識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。 思考： 作為基因工程表達載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？ 不可以。 基因表達載體的構(gòu)建目的： ，并且可以遺傳給下一代。 標記基因作用： 是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基 因，從而將有目的基因的細胞篩選出來，如青霉素基因。 位于基因的尾端。 位于基因的首端。 （ 2）用 _________ _切斷目的基因，使其產(chǎn)生 _____ ____________。 （ ） 37攝氏度 PCR技術(shù)與 DNA復(fù)制過程的區(qū)別 解旋酶 C 脫氧核苷酸 堿基互補配對原則 DNA復(fù)制 PCR技術(shù) 場所 原理 條件 解旋方式 酶 特點 結(jié)果 PCR技術(shù)擴增與 DNA復(fù)制的比較 堿基互補配對原則 堿基互補配對原則 四種脫氧核苷酸、模板、酶、 ATP 四種脫氧核苷酸、模板、酶、 引物 DNA在高溫下變性解旋 解旋酶催化解旋 半保留復(fù)制、邊解旋變復(fù)制 半保留復(fù)制、全解旋再復(fù)制 體外復(fù)制 主要在細胞核內(nèi) 大量的 DNA片段 形成整個 DNA分子 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細胞內(nèi)的 DNA聚合酶、解旋酶、 DNA連接酶等 用化學(xué)方法直接 人工合成 條件： 基因 較小 ，核苷酸序列 已知 。 氫鍵 單鏈 DNA 雙鏈 DNA鏈 ：每重復(fù)一次，目的基因增加 ___倍 一 95攝氏度的目的是使 DNA中的 斷裂，這一過程在細胞內(nèi)是通過 的作用來完成的。 選修 P58 模板 原料 引物 酶 控制溫度 利用 PCR技術(shù) 擴增目的基因 —— 目的基因 DNA —— 四種脫氧核苷酸 —— 如單鏈 DNA分子片段，使 DNA聚合酶能夠從引物的 3’ 端開始連接脫氧核苷酸 —— 耐熱的 DNA聚合酶 —— PCR儀自動調(diào)控 PCR的條件： 過程： a、 DNA變性 （ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成 ________ b、退火 （ 復(fù)性 55℃ 65℃ ）：系統(tǒng)溫度降低， 引物 與 DNA模板結(jié)合，形成局部________。 如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色體上的位置 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。 基因組文庫 cDNA文庫的構(gòu)建 反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使 RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因。也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。 外顯子 : 內(nèi)含子 : 真核細胞的 基因結(jié)構(gòu) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列 內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列 ：有調(diào)控作用的核苷酸序列， 包括位于編碼區(qū)上游的 RNA 聚合酶結(jié)合位點（啟動子）。 ：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使 RNA，能 編碼蛋白質(zhì) 編碼區(qū) 非
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