【正文】 ol/min （ 25 176。C下使用、處理及保存 ，除了一些冷變性的酶；液氮可作為酶學(xué)測定時血清標(biāo)本及質(zhì)控長期保存的方法。 抗凝劑：利用草酸鹽、枸櫞酸鹽、 EDTA抗凝的血漿一般不用作酶活性測定；肝素對 ALT、 AST、 CK、 LD、 ACP檢測均無影響，可用于急診；臨床多用 血清 為首選測定標(biāo)本。 如：葡萄糖、尿素、 β羥丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、 ALT、 AST、 LD、 GLD、 CK、 ALD、 G6PD、 ICD等。 33 2. NAD(P)+或 NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應(yīng) 許多氧化還原反應(yīng)，尤其是作為工具酶如 LD、 GLD、G6PD等參與時，常將底物的 H去除后傳遞給 NAD (P)+形成NAD(P)H。紅色醌類化合物的量與 Glu含量成正比。 （一）工具酶 （二）常用工具酶 常用工具酶多為氧化還原酶類 工具酶純度不必要求過高 工具酶中雜質(zhì)的含量有一定的限制 P152 31 （三）工具酶參與的指示反應(yīng) 臨床生化檢驗中，很多項目的測定往往使用有工具酶參與的類似的反應(yīng)原理－－共通（通用）反應(yīng)途徑。 P151 30 四、工具酶 工具酶：酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶。 (4)適當(dāng)?shù)闹甘久傅挠昧?，反?fù)實驗法確定，即做到酶偶聯(lián)速率不隨酶量的增加而升高，并在所選的最適條件下，指示酶偶聯(lián)反應(yīng)速率和酶活性濃度成正比。只有使用大量的 Ei及其 Km值很小時才能做到。 P150 28 2. 酶偶聯(lián)反應(yīng)注意事項 (1)延滯期應(yīng)越短越好，測定時間要避開此期。此階段 340nm處 A出現(xiàn)明顯的線性變化。 加入試劑 2（即 α酮戊二酸）啟動反應(yīng)，在初始階段，產(chǎn)物 α丙酮酸開始出現(xiàn)，并逐漸增多，但處于較低水平，指示酶反應(yīng)速度也較低，不能代表待測酶的 Vx。然后再加入 α酮戊二酸啟動 ALT催化的反應(yīng)。 P150 ALT雙試劑法測定中，首先使血清與缺少 α酮戊二酸的底物溶液混合， 37176。 P149 25 （二）酶偶聯(lián)反應(yīng) 反應(yīng)模式 A B P Ex Ei 被測酶 被測酶 始發(fā)反應(yīng) 始發(fā)反應(yīng) 指示反應(yīng) 指示酶 指示反應(yīng) 指示酶 A B C P Ex Ea Ei 輔助酶 輔助反應(yīng) 酶偶聯(lián)體系 輔助酶 輔助反應(yīng) P149 26 1. 酶偶聯(lián)反應(yīng)時相 酶偶聯(lián)反應(yīng)一開始不能反映酶活性，在反應(yīng)中存在幾個時相。 P149 24 （ 1）在原反應(yīng)體系中加入一些試劑，其只和酶反應(yīng)物迅速作用，產(chǎn)生可被檢出的物質(zhì)，但該試劑不和酶反應(yīng)，也不影響酶的活性。 NAD(P)++H+ NAD(P)H 僅在 260nm處有吸收峰 在 260、 340nm處有吸收峰 340nm處 A的變化可以反映反應(yīng)體系中 NAD(P)H量的增減，進(jìn)而反映酶活性濃度。 評價 方法簡單，但只有底物與產(chǎn)物之間，在理化性質(zhì)方面有顯著性差異時，才能使用直接法，只有很少一部分酶能用直接法測定。 P149 平衡法 目前臨床應(yīng)用較少，通過測定酶促反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求出酶活性濃度的方法。 21 連續(xù)監(jiān)測法 （動力學(xué)法、速率法） 優(yōu)點： 容易找到直線區(qū)域，選擇線性反應(yīng)期來計算酶活性， 不需終止反應(yīng)。 連續(xù)監(jiān)測法， 即指連續(xù)測定酶促反應(yīng)過程中某一產(chǎn)物或底物濃度隨時間變化的多點數(shù)據(jù)，求出酶促反應(yīng)初速度，間接計算出酶活性濃度的方法。 注意： 應(yīng)先做預(yù)實驗找出酶促反應(yīng)速率恒定的時期，確定線性時間；保證酶和底物在所選定的溫度下作用時間要精確。 P148 18 二、酶活性濃度測定方法 （一）按檢測方法分類 量氣法 其原理是通過測量一封閉反應(yīng)系統(tǒng)中氣體變化后的氣體體積或壓力，從而計算出氣體的變化量 適用于測定在反應(yīng)中產(chǎn)生 或 消耗氣體的酶 分光光度法 酶促反應(yīng)的底物與產(chǎn)物結(jié)構(gòu)不同，光吸收譜也有差異，不僅能在可見光范圍測定有色溶液的濃度，還能在紫外光波長范圍測定特異的帶有雙鍵或環(huán)狀結(jié)構(gòu)的無色物質(zhì) 熒光法和放射性核素法 通過熒光光度計測定酶促反應(yīng)生成熒光物質(zhì)的速率，此速率與酶濃度成正比 其它方法 P146 19 （二）按反應(yīng)時間分類 定時法 （取樣法、終點法、兩點法） 優(yōu)點： 簡單，測定時酶促反應(yīng)已被終止，故比色計或分光光度計無需保溫設(shè)備，顯色劑的選擇不考慮對酶活性的影響。 15 零級 一級 [P] [S] V ＝ dp dt 反應(yīng)級數(shù) 時間 4. 酶促反應(yīng)進(jìn)程 延滯期 線性期 非線性期 P147 Lag phase Zero order Linear phase First order 酶促反應(yīng)時間進(jìn)程曲線 16 單試劑測定體系酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線 P148 17 結(jié)論： 為了計算酶活性濃度，必須根據(jù)線性反應(yīng)期（零級反應(yīng)期）的反應(yīng)速率才能準(zhǔn)確計算出酶活性濃度否則將導(dǎo)致誤差。 但僅在上述前提下，只能在反應(yīng)的零級期，即只有在酶促反應(yīng)的最適條件下，才能真實地代表酶含量。 注意 ： 只有當(dāng)酶所催化的反應(yīng)速度僅與 [E] 成正比，而不受其它因素影響時，即在酶促反應(yīng)的 零級期 ， 才能根據(jù)酶所催化的化學(xué)反應(yīng)速率來確切表示酶活性濃度的大小。 （五）妊 娠 （六）其 它 P145 10 第 二 節(jié) 酶活性濃度的測定技術(shù) P146 P 160 11 酶活性濃度的測定技術(shù) 酶活性濃度概念 酶活性濃度測定 連續(xù)監(jiān)測法檢測酶活性濃度 工具酶 血清酶活性濃度測定條件的優(yōu)化 酶活性濃度的單位 12 一、酶活性濃度的概念 1. 酶的特性：微量性 、 高效性 等。 （三）飲 食 血清中大多數(shù)酶不受進(jìn)食影響，故測定酶活性不一定需要空腹采血。 大多數(shù)酶，不存在以上的清除機(jī)制。 P145 8 （三）排出異常 腎功能減退，血清 AMY活性升高可能因酶排泄障礙而在血液中滯留。 酶在細(xì)胞內(nèi)的定位及存在形式 線粒體酶不易從細(xì)胞中釋出，如 ASTm的檢測往往反映肝細(xì)胞的損傷程度，且是 AMI中最后升高的酶，用于判斷預(yù)后；有些酶在細(xì)胞內(nèi)與結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合，較難釋放。 酶的組織分布 含酶量高且血流豐富的組織器官，其細(xì)胞內(nèi)酶進(jìn)入血流的可能性大；除少數(shù)組織專一性酶以外，大多數(shù)血清酶不能特異反映某個特定組織的病變。 酶的相對分子量（影響細(xì)胞內(nèi)釋出的關(guān)鍵） 酶從細(xì)胞內(nèi)釋出的速度與酶的相對分子量成反比。 P143 6 三、血清酶變化的病理機(jī)制 （一）合