現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題講義-文庫(kù)吧資料
2025-01-09 02:10本頁(yè)面
【正文】 位點(diǎn)? 能與目的基因結(jié)合? 能進(jìn)入受體生物細(xì)胞并在受體生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)；? 有遺傳標(biāo)記基因? 對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害? 比較容易得到小飛守角制作? 1）載體 DNA 必需有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)，以便目的基因可以插入到載體上。如果載體對(duì)受體細(xì)胞有害將怎樣？ 不能分離會(huì)怎樣？ 載體對(duì)受體細(xì)胞有害，將影響受體細(xì)胞新陳代謝，進(jìn)而使轉(zhuǎn)入的目的基因也無(wú)立足之地。目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，你如何察覺(jué)？如果載體上有遺傳標(biāo)記基因，這樣，在載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，就可通過(guò)標(biāo)記基因的表達(dá)來(lái)檢測(cè)。作為載體沒(méi)有切割位點(diǎn)將怎樣？載體沒(méi)有切割位點(diǎn)，外源的目的基因不可能插入。假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣？思考：導(dǎo)入受體細(xì)胞的目的基因不能復(fù)制，將在細(xì)胞增殖中丟失。目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，你如何察覺(jué)？216。假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣？216。小飛守角制作三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 ——“ 分子運(yùn)輸車(chē) ”：⑴ 作為運(yùn)載工具，將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì) 胞中；⑵ 利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行大量的復(fù)制。被同一種限制切斷的幾個(gè) DNA具有相同的黏性末端。還有一種連接平末端的連接酶是 。切割結(jié)果產(chǎn)生的 DNA片段末端形式為 。coli DNA 連接酶? 只能將雙鏈 DNA片段互補(bǔ)的粘性末端之間連接起來(lái)，不能將雙鏈 DNA片段平末端之間進(jìn)行連接? T4 DNA 連接酶? 既可 “縫合 ”雙鏈 DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以 “縫合 ”雙鏈 DNA片段的平末端，但連接平末端之間的效率比較低小飛守角制作③③ 類(lèi)型：類(lèi)型：類(lèi)型類(lèi)型EcoliDNA連接酶： 連接黏性末端T4DNA連接酶： 連接黏性末端和平末端小飛守角制作種類(lèi)： E小飛守角制作DNA連接酶 DNA聚合酶連接 DNA鏈 雙 鏈 單 鏈連接部位在兩 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個(gè)核苷酸加到已存在的核酸片段的 3’末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵小飛守角制作DNA聚合酶 DNA連接酶區(qū)別 1區(qū)別 2相同點(diǎn)尋根問(wèn)底尋根問(wèn)底? DNA連接酶與連接酶與 DNA聚合酶是一回事嗎聚合酶是一回事嗎 ?為什么為什么 ?1)只能將 單個(gè)核苷酸 連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵都形成 磷酸二酯鍵 本質(zhì)都是蛋白質(zhì)1)在 兩個(gè) DNA片段之間 形成磷酸二酯鍵2)以 一條 DNA鏈為模板， 將將 單個(gè)核苷酸單個(gè)核苷酸 通過(guò)磷通過(guò)磷酸二酯鍵酸二酯鍵 連接成一條互補(bǔ)的 DNA鏈2)將 DNA雙鏈上的 兩個(gè)缺口同時(shí)連接 起來(lái)， 不需要模板小飛守角制作 限制酶切割后有兩種不同的結(jié)果，一種產(chǎn)生黏性末端，一種產(chǎn)生平末端。? DNA聚合酶是以一條 DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵形成子鏈；而連接酶是將 DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來(lái)，因此連接酶不需要模板。連接酶和聚合酶的作用都是形成磷酸二酯鍵。coli連接酶、從 T4噬菌體中分離得到的 T4連接酶。此外，二者雖然都是由蛋白質(zhì)構(gòu)成的酶，但組成和性質(zhì)各不相同。⑵ DNA聚合酶是以一條 DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸 通過(guò)磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補(bǔ)的 DNA鏈； 而 DNA連接酶是將 DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接 起來(lái)。這樣，盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會(huì)使自身的 DNA被切斷，并且可以防止外源 DNA的入侵。? 如果把兩種來(lái)源不同的 DNA用同一種限制酶來(lái)切割，會(huì)怎樣呢？? （被同一種限制酶切斷的幾個(gè)來(lái)源不同的 DNA是否具有相同的黏性末端？） 會(huì)產(chǎn)生 相同的黏性末端 ，然后讓兩者的黏性末端 黏合 起來(lái)，就似
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1