華中農(nóng)業(yè)大學(xué)病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)第六章病毒純化(xxxx)-文庫(kù)吧資料
2025-01-05 06:44本頁(yè)面
【正文】 in， 去上清 ， 沉淀用適量的滅菌ddH2O懸浮 。 建立靈敏的病毒鑒定和測(cè)定方法 六、偽狂犬病毒的濃縮提純 病毒材料 將偽狂犬病病毒接種于 PK15細(xì)胞，病變后收集細(xì)胞培養(yǎng)物，反復(fù)凍融 3次，即為樣品材料。 速度梯度離心法 密度梯度離心法 原理 沉降與顆粒質(zhì)量成正比 ，以物質(zhì)沉降速度的不同進(jìn)行分離 沉降與顆粒密度成正比 ，以物質(zhì)浮密度的不同進(jìn)行分離 介質(zhì) 密度小 ， ， 預(yù)制梯度 ， 不連續(xù) 密度大 ， ， 連續(xù)梯度 離心力場(chǎng) 強(qiáng) ， 離心速度高 ， 使被分離物質(zhì)易沉降 稍強(qiáng) ， 速度相對(duì)低 ， 使CsCl形成梯度 ， 建立沉降擴(kuò)散平衡 離心過(guò)程 樣品向離心管底沉降 樣品停留于介質(zhì)的等密度部位 離心時(shí)間 較短 ， 幾小時(shí)到幾十小時(shí) 較長(zhǎng) ， 十幾小時(shí)到數(shù)天 2. 速度梯度離心法與密度梯度離心法 A. 速度梯度離心 B. 密度梯度離心 … … … … A B 五、病毒純化應(yīng)注意的問(wèn)題 保持病毒的感染性 嚴(yán)格控制溫度、 pH及試劑的選擇。 優(yōu)點(diǎn)： 可快速處理大量樣品 步驟： 低速 （ 20233000r/min, 2030min)、 中速（ 10000min, 2030min)去除較大的宿主細(xì)胞碎片 、污染的細(xì)菌及其它較大的雜質(zhì) 。 優(yōu)點(diǎn)： ?可用于大容量樣品的濃縮 ?可以在室溫或低溫下操作 ?對(duì)被濃縮產(chǎn)物的損害小 ?濃縮的同時(shí)可達(dá)到部分純化 ?回收率高 ?可防止外來(lái)污染 （五）電泳法 （七）離心法 ?差速離心 ?速度區(qū)帶離心法 ?密度梯度離心 原理： 不同大小和比重的粒子沉降速度不同 。 常用的溶劑： 葡聚糖硫酸鹽（ dextran sulphate, Ds)
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