華中農(nóng)業(yè)大學(xué)病毒學(xué)實驗技術(shù)第六章病毒純化(xxxx)-在線瀏覽
2025-02-02 06:44本頁面
【正文】 鏡觀察： 大小、形態(tài)均一 ?超速離心： 沉降速率和密度一致，只出現(xiàn)一條沉降帶 ?電泳： 顆粒大小及表面電荷均一，只形成一條電泳帶 ?免疫學(xué)方法： 只與特異性抗體發(fā)生反應(yīng) 大小、形態(tài)、密度、化學(xué)組成、分子量、抗原性 二、病毒純化的理論依據(jù) ?病毒體外表面的主要化學(xué)組成是蛋白質(zhì) ，可利用蛋白質(zhì)提純的方法純化病毒 ?病毒體具有一定大小 、 形狀和密度 ， 可利用超速離心技術(shù)提純病毒 三、病毒純化前的預(yù)處理 病毒感染的組織、臟器或細(xì)胞 ?研磨勻漿 ?超聲波處理 ?反復(fù)凍融 ?低速離心去掉細(xì)胞碎片 細(xì)胞培養(yǎng)液、雞胚尿囊液 低速離心去掉可能含有的雜質(zhì)或直接用于病毒的分離純化 ?沉淀法 ?超速離心法 ?超濾法 ?層析法 ?兩相溶劑間分配系數(shù)法 ?吸附法 ?電泳法 四、病毒純化的方法 （一）沉淀法 主要從稀的病毒懸浮液中濃縮病毒。 病毒一般在 45%以上飽和度的硫酸銨溶液中沉淀，且保持感染性。 有機(jī)溶劑沉淀法 乙醚、甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物 原理： A、降低溶液的介電常數(shù)，從而增加病毒顆粒表面不同電荷之間的引力，導(dǎo)致其溶解度降低。 優(yōu)點(diǎn)： 分辨力高，易除去 缺點(diǎn)： 易使表面蛋白質(zhì)變性，溶解脂質(zhì) 等電點(diǎn)沉淀法（分辨力不高） 原理： 病毒粒子在等電點(diǎn)時，所攜帶的正電荷與負(fù)電荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而發(fā)生沉淀（分辨力不高）。 皂土法 輪狀病毒 皂土在酸性條件下（ pH4~)可吸附輪狀病毒，在堿性條件下 ()，又使其洗脫下來。 （二）層析法 ?葡聚糖柱層析法 ?凝膠層析法 ?離子交換柱層析法 ?親和層析法 （三）兩相溶劑間分配系數(shù)法 原理： 溶質(zhì)在兩
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