華中農(nóng)業(yè)大學(xué)病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)第六章病毒純化(xxxx)-閱讀頁
2025-01-11 06:44本頁面
【正文】 個(gè)互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而選擇性地分配于其中的一方。 作為吸附劑必須具備的特點(diǎn)： ?有較大的表面積和吸附能力 ?較高的吸附選擇性 ?便于洗脫 ?性質(zhì)穩(wěn)定 常用吸附劑： ?白土 ?磷酸鈣 ?硅藻土 ?紅細(xì)胞 ?離子交換樹脂 ?羧甲基纖維素 （六）超濾法 利用超濾膜將水、鹽及小分子濾過，將一定大小的大分子或病毒等顆粒截住從而使后者得到濃縮。 用途： 從組織培養(yǎng)液 、 雞胚尿囊液或經(jīng)過紅細(xì)胞吸附釋放的病毒懸液中提純病毒 。 再選擇較高速度離心 12h使病毒沉淀 。 選用適宜的純化實(shí)驗(yàn)起始材料 ?無其它病毒或毒株的污染 ?病毒體的含量高 ?雜質(zhì)含量少并易于處理 根據(jù)具體情況選擇提純方法 根據(jù)需要純化的病毒的性質(zhì)、起始材料的特點(diǎn)、研究的目的以及實(shí)驗(yàn)室的條件等，選擇適宜的純化方法。 2． 病毒提純濃縮 ?去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)： 將細(xì)胞培養(yǎng)物 4℃ 3000r/min離心 30min， 收集上清液 。 ?透析： 將懸浮的病毒液裝于透析袋中 ， 于 ddH2O或 PBS中攪拌透析 ， 每半個(gè)小時(shí)換一次液 ， 共換 5次 ， 第 5次透析過夜 。 ?超離純化： ? 在離心管中加入不同濃度的甘油墊層 ， 即先加入45%甘油 ， 再加入 5%甘油 。 ? 2023025000r/min離心 2h。 ?速度區(qū)帶離心 ?密度梯度離心 ?在離心管中加入不同濃度的 CsCl或蔗糖墊層 ， 再加入病毒懸液 ， 超高速離心 。 PrV鄂 A株電鏡觀察 ? 左圖：上帶中的 PrV粒子 ? 右圖：下帶中的 PrV粒子 ?濃縮（方法二） ?將經(jīng)低速離心去掉細(xì)胞碎片及雜質(zhì)的病毒懸液直接 2023025000r/min離心 2h。 ?將重懸的病毒液再經(jīng)梯度離心純化
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