【正文】 米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。要適時轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導(dǎo)致實驗前功盡棄，因此要進行嚴格的無菌操作。 (二)練習(xí) :植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求較高。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。 二、答案和提示 (一)旁欄思考題 ,同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？ 答:微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽。新移栽的組培苗要在溫室過渡幾天，等壯苗后再定植大田或進行盆栽。培養(yǎng)基質(zhì)要提前消毒，可以向培養(yǎng)基質(zhì)噴灑質(zhì)量分數(shù)為5%的高錳酸鉀，并用塑料薄膜覆蓋12h。 (四)生根苗的移栽是否合格 生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基，又不能傷及根系。(三)是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄 做好統(tǒng)計和對照，填好結(jié)果記錄表，培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W(xué)態(tài)度。 (二)是否完成了對植物組織的脫分化和再分化 觀察實驗結(jié)果，看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織，記錄多長時間長出愈傷組織。 土壤取樣→選擇培養(yǎng)(此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定)→梯度稀釋→將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上→挑選單菌落→發(fā)酵培養(yǎng) 專題3 課題1 菊花的組織培養(yǎng) 一、結(jié)果分析與評價 (一)對接種操作中污染情況的分析 接種3～4d后，在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。 “濃縮”所需的微生物？ 答:在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。 ，這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足,你打算選用哪一種方法,兩種剛果紅染色法的比較。 ,你認為濾紙應(yīng)該埋進土壤多深？答:將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。其他步驟基本一致。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設(shè)計。因此為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應(yīng)當(dāng)有針對性的提供選擇培養(yǎng)的條件。 三、答案和提示 （一）旁欄思考題,如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)?答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計三個平板，計算出平板上菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進行計算。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。通過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。實驗方案有兩種。一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。為了保證結(jié)果準確，通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。 (二)統(tǒng)計菌落數(shù)目 統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。在本課題提供的選擇培養(yǎng)基的配方中，尿素是培養(yǎng)基中的惟一氮源，因此，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。例如，這三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng)，但無土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無菌的條件，而其他兩種技術(shù)都要求嚴格的無菌條件。例如，微生物的生長需要水、空氣、適宜的溫度，食品保存可以通過保持干燥、真空的條件，以及冷藏等方法來阻止微生物的生長。等等。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進行無菌操作, 提示:應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答:劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。 (三)平板劃線操作的討論 ,在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎,為什么？答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物。 ，為什么要將平板倒置？答:平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地揮發(fā)。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。(3)需要消毒。如果需要，請選擇合適的方法。 二、答案和提示 (一)旁欄思考題 ，還有什么目的?答:無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。 (三)是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。 (二)接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的。 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)都巧妙地利用了天然菌種，都為特定的菌種提供了良好的生存條件，最終的發(fā)酵產(chǎn)物不是單一的組分，而是成分復(fù)雜的混合物。酵母菌是兼性厭氧微生物，泡菜發(fā)酵液營養(yǎng)豐富，其表面氧氣含量也很豐富，適合酵母菌繁殖。當(dāng)這些蔬菜放置過久發(fā)