基因芯片技術(shù)在耐藥檢測中的研究概況doc-文庫吧資料
2025-08-07 05:39本頁面
【正文】 用機理可能是蛋白質(zhì)的氨基酸末端與P27或相應(yīng)的CDKIS作用，激活CDKIS活性，或促使其他Cyclin／CDKS復(fù)合物解體，使細(xì)胞周期受到阻滯。顧春紅等[22]應(yīng)用基因表達譜芯片，研究硫化砷作用前后K562細(xì)胞基因的表達變化，CML細(xì)胞株K562經(jīng)硫化砷作用前后，mRNA分別用CyeCye5來標(biāo)記，與芯片雜交的結(jié)果，紅色表示高表達，綠色表示低表達，黃色表示表達水平無改變。耐藥機制相當(dāng)復(fù)雜，由腫瘤的綜合特征決定，如存活細(xì)胞的比例，多藥耐藥表型，MDRMRP、LRP等基因的過度表達，拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ和谷胱甘肽代謝的改變等，另外促進DNA修復(fù)和抑制細(xì)胞凋亡的基因表達改變也可導(dǎo)致多藥耐藥。利用基因芯片技術(shù)同時檢測這些相關(guān)基因的表達變化，對于疾病的控制、更有效的治療、改善預(yù)后具有重大意義。在生理和病理狀態(tài)下，每一個基因都不是單獨起作用的，各基因在細(xì)胞分化、個體發(fā)育的復(fù)雜過程中，在時空及表達量上都作為統(tǒng)一的整體進行調(diào)節(jié)。利用寡核苷酸芯片在MCL患者的淋巴結(jié)和良性高原始細(xì)胞淋巴結(jié)(nonmalignant hyperplastic lymphnodes，HLs)標(biāo)本中作基因表達的比較，共研究5例MCL及4例HLs的標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)在MCL中有42條基因下調(diào)，其中有關(guān)凋亡途徑基因的改變尤其引人注意。將IL—l3中和抗體作用于HD細(xì)胞株，顯示H／RS細(xì)胞增生受劑量依賴性抑制，說明H／RS細(xì)胞通過自分泌機制分泌IL一13，同時IL—l3反過來刺激了H／RS細(xì)胞生長，為今后通過對IL—l3信號傳導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)控治療HD指明了方向。Kapp等[19]利用芯片技術(shù)研究了霍奇金病(Hodgkin Sdisease，HD)的發(fā)病機制，在制作的芯片中包含涉及炎癥和腫瘤的950條基因，從二種HD細(xì)胞株L428和KMH2中抽提并純化mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA用熒光素標(biāo)記后分別與芯片雜交，同時以EB病毒永生化的B原始淋巴細(xì)胞樣細(xì)胞株(LCL—GK)作對照，芯片結(jié)果顯示，L428和KMH2細(xì)胞株中IL—l3IL—l5高表達，而對照組LCL及EBV陰性的非霍奇金病細(xì)胞株并不表達IL—l3，其結(jié)果由Northern blot及酶聯(lián)免疫吸附分析所證實，并揭示另一HD細(xì)胞株HDLM2中IL—l3亦高表達。白血病患者中常有因染色體易位而形成融合蛋白。在正常人和急性非淋巴細(xì)胞白血病(M0M2)亞型中均有表達，但是在表達PML—RARa融合基因的APL中表達明顯較低，但在經(jīng)過ATRA作用后，抽提mRNA與芯片雜交，發(fā)現(xiàn)其B94表達明顯升高。Rusiniak等[17]在對急性早幼粒細(xì)胞白血病(acute pro．myelocytic leukemia，APL)的研究中，利用芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)B94是全反式維甲酸(ATRA)治療的潛在的靶基因。他們將基因芯片技術(shù)引入到腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥研究領(lǐng)域，從更深層次上揭示烏頭堿逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的機制，甚至尋找到了藥物作用的靶基因。由此表明，基因芯片技術(shù)在腫瘤耐藥研究中的應(yīng)用將對腫瘤耐藥機制研究、新的耐藥基因發(fā)現(xiàn)以及耐藥個體化診斷具有極大的推動作用[13]。用藥前后細(xì)胞凋亡相關(guān)基因、CDKS家族、SMADS家族、MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)等的基因發(fā)生變化。為深入探索其可能的作用機制，他們采用基因芯片技術(shù)研究了烏頭堿對相關(guān)基因的影響。 利用基因芯片技術(shù)研究烏頭堿抗KBv200細(xì)胞耐藥機制 腫瘤多藥耐藥性是導(dǎo)致化療失敗的主要原因之一[13]，也是急性白血病、惡性腫瘤緩解后復(fù)發(fā)的重要根源。探討了利用基因芯片技術(shù)檢測結(jié)核桿菌的耐藥性。目前將基因芯片技術(shù)用于檢測分子突變，不僅可準(zhǔn)確地確定突變位點和突變類型，更主要的是它的快速高效是目前其它方法無法比擬的，并且它可以同時檢測多個基因乃至整個基因組的突變。近年來，學(xué)者們采用分子生物學(xué)技術(shù)對結(jié)核桿菌耐藥基因的位置和基因突變位點的定位，促進了快速鑒定耐藥突變株結(jié)核桿菌方法的建立[9]，例如：Gingeras、Tresch等[10]用分枝桿菌DNA雜交圖像進行基因分型與菌種鑒定，對利福平抗藥性基因進行了篩選檢測等。前者不同程度的耐藥性是一個基因的不同突變的結(jié)果,一次突變就可使結(jié)核桿菌產(chǎn)生高水平的耐藥；多基因型不同程度的耐藥性則是不同基因突變累積的結(jié)果，系由多基因突變所致。結(jié)核桿菌耐藥性的出現(xiàn)是基因突變的一種表達方式，結(jié)核桿菌內(nèi)耐藥的位點在染色體上，不同藥物的耐藥突變株存在的突變頻率各不相同。4. 基因芯片技術(shù)在耐藥性檢測中的應(yīng)用和研究現(xiàn)狀 利用基因芯片技術(shù)快速檢測結(jié)核桿菌的耐藥性 結(jié)核病在全球的回升及耐藥結(jié)核桿菌的出現(xiàn)，再次喚醒了人們的警覺，又重新將注意力集中到結(jié)核病和耐藥結(jié)核桿菌，并進行廣泛的研究。一般檢測耐藥性的方法有：藥物敏感試驗、質(zhì)粒消除試驗、質(zhì)粒指紋圖譜技術(shù)、基因探針、Southern blot，PCR，RT．PCR 等方法，但是這些方法只能對少量樣品進行分析，而基因芯片卻可以克服此缺點，提高檢測效率。對病原體耐藥性的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究表明，細(xì)菌可通過不同機制產(chǎn)生遺傳變異和對抗菌藥物的改變。 細(xì)菌耐藥性檢測耐藥性又稱抗藥性，一般是指病原體的藥物反應(yīng)性降低的一種狀態(tài)。針對不同的亞型在臨床上使用相應(yīng)的抗生素．達到改善治療效果的目的：檢測耐藥菌基因的改變．提供了新藥物作用的靶目標(biāo)，并指導(dǎo)抑制這些靶目標(biāo)試劑和藥物的合成。采用基因芯片技術(shù)找到耐藥菌的耐藥基因。 病原體耐藥性檢測多重耐藥菌(MDR)感染在全球的狀況十分嚴(yán)重。基因表
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