基因芯片技術(shù)在耐藥檢測中的研究概況-全文預(yù)覽
【正文】 r of mantle cell lymphoma[J]. Blood,1994,84:27262732．[22]顧春紅,陳芳源,滕曄,[J].上海醫(yī)學(xué),2001,24(5):263265. 7 / 7。隨著現(xiàn)代微加工技術(shù)的進(jìn)步和納米技術(shù)的發(fā)展，生物芯片在容納更多信息的同時日趨微型化和價格普及化，其在疾病診斷和藥物篩選等方面的應(yīng)用前景將更加廣闊。5. 總結(jié)與展望目前，基因芯片技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域主要有基因表達(dá)譜分析、新基因發(fā)現(xiàn)、基因突變及多態(tài)性分析、基因組文庫作圖、疾病診斷和預(yù)測、藥物篩選、基因測序等。顧春紅等[22]應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片，研究硫化砷作用前后K562細(xì)胞基因的表達(dá)變化，CML細(xì)胞株K562經(jīng)硫化砷作用前后，mRNA分別用CyeCye5來標(biāo)記，與芯片雜交的結(jié)果，紅色表示高表達(dá)，綠色表示低表達(dá)，黃色表示表達(dá)水平無改變。利用基因芯片技術(shù)同時檢測這些相關(guān)基因的表達(dá)變化，對于疾病的控制、更有效的治療、改善預(yù)后具有重大意義。利用寡核苷酸芯片在MCL患者的淋巴結(jié)和良性高原始細(xì)胞淋巴結(jié)(nonmalignant hyperplastic lymphnodes，HLs)標(biāo)本中作基因表達(dá)的比較，共研究5例MCL及4例HLs的標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)在MCL中有42條基因下調(diào)，其中有關(guān)凋亡途徑基因的改變尤其引人注意。Kapp等[19]利用芯片技術(shù)研究了霍奇金病(Hodgkin Sdisease，HD)的發(fā)病機(jī)制，在制作的芯片中包含涉及炎癥和腫瘤的950條基因，從二種HD細(xì)胞株L428和KMH2中抽提并純化mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA用熒光素標(biāo)記后分別與芯片雜交，同時以EB病毒永生化的B原始淋巴細(xì)胞樣細(xì)胞株(LCL—GK)作對照，芯片結(jié)果顯示，L428和KMH2細(xì)胞株中IL—l3IL—l5高表達(dá)，而對照組LCL及EBV陰性的非霍奇金病細(xì)胞株并不表達(dá)IL—l3，其結(jié)果由Northern blot及酶聯(lián)免疫吸附分析所證實，并揭示另一HD細(xì)胞株HDLM2中IL—l3亦高表達(dá)。在正常人和急性非淋巴細(xì)胞白血病(M0M2)亞型中均有表達(dá)，但是在表達(dá)PML—RARa融合基因的APL中表達(dá)明顯較低，但在經(jīng)過ATRA作用后，抽提mRNA與芯片雜交，發(fā)現(xiàn)其B94表達(dá)明顯升高。他們將基因芯片技術(shù)引入到腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥研究領(lǐng)域，從更深層次上揭示烏頭堿逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的機(jī)制，甚至尋找到了藥物作用的靶基因。用藥前后細(xì)胞凋亡相關(guān)基因、CDKS家族、SMADS家族、MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)等的基因發(fā)生變化。 利用基因芯片技術(shù)研究烏頭堿抗KBv200細(xì)胞耐藥機(jī)制 腫瘤多藥耐藥性是導(dǎo)致化療失敗的主要原因之一[13]，也是急性白血病、惡性腫瘤緩解后復(fù)發(fā)的重要根源。目前將基因芯片技術(shù)用于檢測分子突變，不僅可準(zhǔn)確地確定突變位點(diǎn)和突變類型，更主要的是它的快速高效是目前其它方法無法比擬的，并且它可以同時檢測多個基因乃至整個基因組的突變。前者不同程度的耐藥性是一個基因的不同突變的結(jié)果,一次突變就可使結(jié)核桿菌產(chǎn)生高水平的耐藥；多基因型不同程度的耐藥性則是不同基因突變累積的結(jié)果，系由多基因突變所致。4. 基因芯片技術(shù)在耐藥性檢測中的應(yīng)用和研究現(xiàn)狀 利用基因芯片技術(shù)快速檢測結(jié)核桿菌的耐藥性 結(jié)核病在全球的回升及耐藥結(jié)核桿菌的出現(xiàn)，再次喚醒了人們的警覺，又重新將注意力集中到結(jié)核病和耐藥結(jié)核桿菌，并進(jìn)行廣泛的研究。對病原體耐藥性的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究表明，細(xì)菌可通過不同機(jī)制產(chǎn)生遺傳變異和對抗菌藥物的改變。針對不同的亞型在臨床上使用相應(yīng)的抗生素．達(dá)到改善治療效果的目的：檢測耐藥菌基因的改變．提供了新藥物作用的靶目標(biāo)，并指導(dǎo)抑制這些靶目標(biāo)試劑和藥物的合成。 病原體耐藥性檢測多重耐藥菌(MDR)感染在全球的狀況十分嚴(yán)重。檢測多藥耐藥基因表達(dá)的變化不但可以研究惡性腫瘤的不同耐藥機(jī)制，還可以用于指導(dǎo)制定治療方案。3. 基因芯片技術(shù)在疾病耐藥性檢測中的作用基因芯片技術(shù)對于疾病耐藥性檢測應(yīng)用主要有以下幾個方面?；蛐酒槍σ餣MDD變異的眾多基因突變位點(diǎn)設(shè)計探針，將之結(jié)合于同一張芯片或與上述分型基因芯片合并，從血清樣本中抽取病毒DNA，經(jīng)體外擴(kuò)增后與芯片探針雜交，依據(jù)雜交信號判定HBV的YMDD變異，得出是否產(chǎn)生耐藥性的結(jié)論。只要在病人身上取血、尿或痰等標(biāo)本進(jìn)行檢測，就可知道三代頭孢類抗生素對治療能否起作用。目前已制備的耐藥性基因探針如TMD耐藥性基因、氨基糖苷類抗生素耐藥性基因以в內(nèi)酰胺酶基因等均已使用于臨床[7]。美國Stanford大學(xué)的E．A．Winzeler等[6]，以兩種不同菌株的酵母(S96和YJM789)作為實驗材料，對控制酵母對放線菌酮的抗藥發(fā)揮的基因進(jìn)行分析。 DNA序列分析：芯片測序原理不同于傳統(tǒng)的Maxam和Gibert的化學(xué)測序法及Sanger的末端終止法[4]，其原理為任何線狀的單鏈DNA或RNA序列均可被分解為一系列堿基數(shù)固定，交叉重疊的寡核苷酸，依靠靶DNA片段與短的寡核苷酸探針雜交，通過重組交叉，重疊的寡核苷酸雜交譜，重建DNA序列。比如，許多形態(tài)學(xué)相似的白血病亞型和淋巴瘤，有相似的臨床表現(xiàn)，造成了診斷困難，并因此可能引起治療不當(dāng)。 作者簡介：馬小林(1980 ),男,四川瀘州人,在讀碩士,主要從事新獸藥研究與開發(fā)。其優(yōu)勢體現(xiàn)在快速、高效、高通量處理生物學(xué)信息的能力。
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