醫(yī)院抗生素分離與純化docxdocx-文庫吧資料
2025-07-23 22:20本頁面
【正文】 樣品。一方面適用于小量樣品(幾到幾十Lg,甚至0101Lg)的分離。(Thin LayerChromatography) 薄層色譜常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固液吸附色譜。其基本原理是由于混合物中的各個(gè)單一組分對兩相不同的親和力和向兩相不均勻擴(kuò)散的可能性而導(dǎo)致在固定相和移動(dòng)相之間的不均勻分配,從而得到分離。加一種物質(zhì)于溶液中,以便溶質(zhì)的溶解度降低形成過飽和溶液而結(jié)晶。使溶液冷卻降溫以維持一定過飽和度,不用除去溶劑,優(yōu)點(diǎn)是能耗小設(shè)各構(gòu)造及操作較簡單,但生產(chǎn)速率和產(chǎn)率相應(yīng)較低,難以自動(dòng)控制。加入反應(yīng)劑或調(diào)節(jié)pH產(chǎn)生新物質(zhì),當(dāng)該新物質(zhì)的濃度超過它的溶解度時(shí)就有結(jié)晶析出。使溶液在加壓、常壓或減壓下加熱蒸發(fā)除去一部分溶劑,以達(dá)到或維持溶液過飽和度,使晶體長大。 結(jié)晶 抗生素工業(yè)中常用的結(jié)晶方法有以下4種[11]。5)加入聚電解質(zhì):如聚丙烯酸,其機(jī)理與鹽析作用相似。3)調(diào)pH至等電點(diǎn):此法沉淀能力不強(qiáng),常加入有機(jī)溶劑,使沉淀完全。2)加入有機(jī)溶劑:其機(jī)理為加入有機(jī)溶劑會(huì)使溶液的介電常數(shù)降低,從而使水分子的溶解能力降低,在蛋白質(zhì)分子周圍,不易形成水化層。它主要起濃縮作用,純化的效果較差,通常作為初步分離的一種方法。由于抗生素分子體積較大,一般選擇大孔網(wǎng)狀樹脂。春雷霉素,肉瘤霉素,夾竹桃霉素用強(qiáng)酸性樹脂。如金霉素,丁胺卡那霉素,萬古霉素,先鋒霉素用弱酸性樹脂。如果為酸性,則要選擇堿性樹脂。經(jīng)過質(zhì)譜分析,得知其為一種小分子量的抗生素,分子量為66 離子交換法 離子交換法是[9]利用離子交換樹脂與目的物質(zhì)之間的化學(xué)親合力,有選擇地將目的物質(zhì)吸附上去,再用適當(dāng)?shù)南疵搫┫疵撓聛?。姬生寶等[8]藤黃灰鏈霉菌發(fā)酵液中的抗真菌活性成分SL103采用X5型吸附樹脂對活性物質(zhì)進(jìn)行分離純化,對吸附飽和的X5樹脂柱用去離子水沖洗,然后用50%的甲醇洗去雜質(zhì)和色素,再用50%的乙醇4mL/min的流速下進(jìn)行洗脫,合并活性高的洗脫液,濃縮后靜置48h得到SL103的粗結(jié)晶。大孔吸附樹脂適合于吸附各種抗生素,它不僅可吸附脂溶性化合物,而且可以吸附水溶性化合物。常用的吸附劑有活性炭、氧化鋁、大孔吸附樹脂等。這些都使得萃取技術(shù)更加全面,適用于各種生物產(chǎn)品的分離純化。另外,近年來,溶媒萃取法在傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑萃取技術(shù)的基礎(chǔ)上,萃取機(jī)制和方法也在不斷發(fā)展完善,相繼出現(xiàn)了各種新的現(xiàn)代萃取技術(shù),其中的超臨界CO2萃取技術(shù)[3]以其在天然產(chǎn)物分離方面的獨(dú)特優(yōu)勢備受青睞, 20世紀(jì)80年代以來,已經(jīng)在許多領(lǐng)域中實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化。作為一種傳統(tǒng)的分離技術(shù),溶媒萃取法目前仍然在廣泛應(yīng)用于在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中,如螺旋霉素、林可霉素、青霉素等都采用溶媒萃取法提取。在提取時(shí),可根據(jù)抗生素分離的難易,單獨(dú)或同時(shí)使用上述方法。都得到了具有活性的粗提物。解翠華、夏煥章等報(bào)道[2]用草酸調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH值至3,然后離心,可以使發(fā)酵液和菌絲體很好的分離,分別用乙酸乙酯對上清液進(jìn)行萃取。另外通過調(diào)節(jié)發(fā)酵液的酸堿度或加入合適的溶劑也可以除去部分相應(yīng)的雜
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