【正文】 能。通過測定香豆素6在血和腦中的濃度評價兩種納米粒在血和腦中的分布，結果表明，兩種納米粒在腦內(nèi)的藥時曲線相似，約在1h時達峰（圖6），LfNP腦內(nèi)的AUC(0–t)。這說明LfNP通過不同于NP的機理轉運入腦。m.A/I NP incubation for h；D/L LfNP incubation for h；B/J NP incubation for 1 h；E/M LfNP incubation for 1 h；C/K NP incubation for 2 h；F/N LfNP incubation for 2 h圖4 NP, Lf–NP和Lf 的體外毒性評價，n=3Fig. 4 In vitro cytotoxicity of NP, Lf–NP and Lf on cells at concentrations ranging from to 3 mg/ml. Data represented the mean 177。C. The magnification bar is 100 181。m，其余標尺為100 181。C incubation for 30 min 圖3 37 186。C incubation for different time。C incubation for 1h, respectively。C孵育30 min后的攝取情況Fig. 2 uptake quantitative results, n=3 *p＜ A 160 μg/ml Lf–NP and NP at 37 186。C孵育1h后的攝取情況；B10 μg/ml Lf–NP和NP在37 186。圖2 ， n=3，*p＜A160 μg/ml Lf–NP和NP分別在 37 186。2h后，LfNP廣泛分布在整個細胞且進入細胞核（圖3H）而NP則主要分布于胞漿。由熒光顯微鏡照片可看出，在37 186。LfNP的攝取量高于NP，提示由于Lf的引入LfNP可能存在不同于NP的內(nèi)吞機理。4 ℃時，兩種納米粒的攝取很快達到飽和，未見有顯著差異。37 186。C的攝取量均高于4 186。 E NP stained with antiLf primary antibody and 10nm colloidal gold labeled rabbit antigoat IgG sequentially. LfNP腦內(nèi)遞藥特性和生物相容性的體外評價，各時間點LfNP的攝取量均高于NP。 C Lf–NP stained with antiLf primary antibody and 10nm colloidal gold labeled rabbit antigoat IgG sequentially。圖1納米粒的透射電子顯微鏡照片，標尺均為100 nmANP；BLfNP；C加入抗Lf一抗和連接有10nm膠體金兔抗羊IgG二抗后的LfNP；D僅加入連接有10nm膠體金兔抗羊IgG二抗的LfNP；E加入抗Lf一抗和連接有10nm膠體金兔抗羊IgG二抗后的NPFig. 1 Transmission electron micrograph of different nanoparticles negatively stained with phosphotungstic acid solution. Bar on each photo was 100 nm.A NP。13）個Lf。%；透射電鏡下可以清楚的觀察到，LfNP表面標記有黑色的膠體金顆粒（圖1C），而未加入山羊抗Lf抗體孵育的LfNP（圖1D）和NP表面（圖1E）未見膠體金顆粒，證實該納米粒表面連接有Lf。 ）nm和（ 177。以SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析。將各樣品的峰面積比代入相應的標準曲線求得腦組織及血樣中的藥物濃度。每個時間點重復采集3只小鼠樣品。 LfNP腦內(nèi)遞藥特性的體內(nèi)評價小鼠尾靜脈注射60 mg/kg載香豆素6的NP和LfNP， 1h后乙醚麻醉，心室灌注生理鹽水20 min，斷頭處死，取腦置4%多聚甲醛固定24h，蔗糖梯度脫水后于視交叉后1 cm處冠狀切腦組織，冰凍切片，厚度20 μm，PBS漂洗后用1 μg/ml DAPI染色10 min，PBS漂洗，用熒光封片劑封片，熒光顯微鏡觀察納米粒在腦組織中的分布和熒光強度。用酶標儀在450 nm處讀數(shù)。104個細胞的密度接種于96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)過夜。用 1% TritonX 100 400 μl溶解細胞。加入10 μg/ml LfNP和過量Lf（10 mg/ml）37℃孵育30min進行攝取抑制試驗。將載有香豆素6的LfNP和NP稀釋成含1－60 μg/ml的納米粒供試液，按不同濃度每孔加入1 ml（空白孔加1 ml HBSS），分別放入37℃及4℃孵育1 h，考察細胞在4℃和37℃下對LfNP和NP的攝取情況。棄去納米粒溶液，細胞用PBS沖洗三次，取出玻片放入4%多聚甲醛中于室溫固定20 min，用PBS漂洗3次后，用熒光封片劑封片，用相差及熒光顯微鏡觀察。 LfNP腦內(nèi)遞藥特性和生物相容性的體外評價 ，置于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)1天。ELISA測定LfNP表面Lf個數(shù)。采用透射電鏡技術（TEM）和動態(tài)光散射分析（DLS）對LfNP和NP的形態(tài)，粒徑進行表征。巰基化Lf與NP常溫下反應9h制得LfNP。2. 實驗方法 NP和LfNP的制備及表征馬來酰亞胺基聚乙二醇聚乳酸和甲氧基聚乙二醇聚乳酸1：9混合以復乳溶劑揮發(fā)法制備NP [19]。1. 儀器和材料JY92II超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；R200旋轉蒸發(fā)儀和B490恒溫水?。˙uchi，德國）； NICOMPTM 380 ZLS粒度/zeta電位測定儀（NICOMP，美國）；PHI 5000C X射線光電子能譜儀（ESCA system，美國）；CM 120透射電鏡（Philip，荷蘭）；CO2培養(yǎng)箱（Heraeus，中國香港）；UFXDX倒置相差顯微鏡（Nikon，日本）；UFXII熒光顯微鏡（Nikon，日本）；LC10A RF10AXL高效液相色譜儀（Shimadzu，日本）。此外，聚乙二醇和聚乳酸都是FDA已批準的輔料，將使載藥系統(tǒng)具有較好的生物相容性和安全性[17，18]。本試驗利用Lf的腦靶向能力構建了受體介導的生物可降解腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)并探索了Lf作為腦靶向頭基的能力?，F(xiàn)已證明多種生物BBB表面均存在Lf受體（LfR），能夠介導Lf轉運[1214]。乳鐵蛋白是一種陽離子鐵結合糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族，它由690個氨基酸折疊而成兩個球形裂片，各包含一個鐵結合位點。然而，脂質體的穩(wěn)定性差及單克隆抗體效果的不穩(wěn)定限制了其進一步應用[810]。在各種非侵入給藥方式中，利用在BBB上存在特異受體的靶向頭基連接載藥系統(tǒng)得到的受體介導的腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)在具有腦靶向功能的同時能夠提高藥物包封率，降低副作用和避免多藥耐藥系統(tǒng)的外排，具有很好的前景[5]。局部侵入給藥（腦內(nèi)直接注射/滴注）易引發(fā)感染，手術費用高且有效遞藥面積有限[3]。大約98%的小分子藥物和幾乎100%的大分子藥物，包括酶，基因和siRNAs等均不能