【正文】 工作中起重要作用。質(zhì)控血清檢驗(yàn)的結(jié)果如能控制其誤差在一定范圍內(nèi)，就說明該檢驗(yàn)沒有發(fā)生不允許的誤差。一步法和二步法均存在HDHOOK效應(yīng)，只是前者出現(xiàn)的更早些，大多數(shù)是高值低吸光度，很少陰性結(jié)果。【高值鉤鐮效應(yīng)（HDHOOK）】在二位點(diǎn)夾心ELISA中，其劑量反應(yīng)曲線的高劑量（HIGH DOSE，HD）區(qū)段，線性走向不是呈平臺狀無限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子或一把鐮刀（HOOK），MILES（1974）根據(jù)此現(xiàn)象寫實(shí)性地稱之為HDHOOK效應(yīng)。CV）， CV為該試劑的批內(nèi)CV (一般在1520%間)；177。灰區(qū)概念對血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要。免疫測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此QC手段不能照搬生化模式?？勺纺嫘缘恼`差原因，是指除去隨機(jī)誤差以外的其他原因。質(zhì)控圖是把某一檢驗(yàn)的性能數(shù)據(jù)與所計(jì)算出來的預(yù)期的控制限進(jìn)行比較的圖?；謴?fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。超出預(yù)定誤差范圍，報警系發(fā)出信號，反饋通道中斷。【基本概念】【質(zhì)量控制】是監(jiān)視ELISA操作全過程，排除誤差，維持標(biāo)準(zhǔn)化操作的一個管理過程。操作人員 部門主管 質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名 ****** ****** ****** 日期 **年**月**日Ⅵ 免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)量評價的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（EQA）實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號制定日期******ELISA方法********年**月**日【目的】采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評價各實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性。方法：1. 先將測定值從小到大排列，X1最小，Xn最大；；。 【即刻性質(zhì)控】在開始進(jìn)行質(zhì)控時，只需要有3個質(zhì)控血清測定值即可進(jìn)行質(zhì)控?！径吭囼?yàn)】ELISA定量試驗(yàn)常見于腫瘤因子（如AFP，CEA，CA系列），激素類，免疫球蛋白類，這些物質(zhì)在體內(nèi)有一定的量（正常范圍），超出這個量才呈病理情況，故需定量測定。陽性質(zhì)控血清失控（臨界值為靈敏度，高值為HOOK效應(yīng)監(jiān)控）應(yīng)重做陰性標(biāo)本；陰性對照失控應(yīng)重做陽性標(biāo)本。生化的質(zhì)控圖方法僅能觀察靈敏度而無法監(jiān)控特異性。【記錄】 [1] 所有實(shí)驗(yàn)的原始資料均應(yīng)存檔；所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊；原始登記表應(yīng)記錄試劑來源、批號；質(zhì)控血清的來源及測定值并注明是否在控；簽上實(shí)驗(yàn)者姓名及審核者姓名。ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測標(biāo)本做在同一塊板上。：嚴(yán)禁用定性試劑盒做定量分析。D) COV=CP+N（C為常數(shù)），用于間接法。B） COV=N，從抑止率公式換算而來，常用于競爭，中和法。同時要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色，否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片。OPD終止后顯棕色，測定波長為490nm；TMB終止后顯黃色，測定波長為450nm，二種底物的校正波長均用630nm。C，1015分鐘）恒定反應(yīng)后終止[3] .5. 酶標(biāo)儀判讀結(jié)果（30分鐘內(nèi)）。關(guān)機(jī)前要用蒸溜水沖洗管道，避免堵孔。[2] 洗板機(jī)洗板一定要預(yù)先把板架放平，使洗板機(jī)上的每個放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底，將孔內(nèi)液體全部吸干，同時要設(shè)置一定的浸泡時間。重復(fù)以上操作至少5次。[3] 反應(yīng)板不宜疊放，注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定控制，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定。所以溫育一般采用能使反應(yīng)液溫度迅速達(dá)到平衡的水浴法。2. 溫育[1] 抗原抗體反應(yīng)需要在一定溫度下（37176。如后面操作步驟中加二種以上試劑時均需振蕩混勻。干吸頭預(yù)先在血清中抽吸三次。1. 加樣[1] 加樣應(yīng)用微量移液器（加樣槍）按規(guī)定的量加入微孔板底部，避免加在孔壁上部，不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 【分析中質(zhì)控】ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果受操作影響很大，每個步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標(biāo)儀讀數(shù)均應(yīng)認(rèn)真負(fù)責(zé)才能充分發(fā)揮ELISA的高靈敏，強(qiáng)特異的優(yōu)點(diǎn)。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。如需保存一周以上則要20℃冰凍保存，凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，融解時應(yīng)上下顛倒充分混勻，同時避免氣泡。，建議盡量不用抗凝血尤其是不使用用肝素抗凝劑?！緲?biāo)本的采集和保存】，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本會增加非特異性顯色造成假陽性。計(jì)算其回歸方程，相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差s，并用177。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度，日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。3. 零點(diǎn)飄移（穩(wěn)定性觀察）：取8只小孔杯分別置于8個通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，于490nm處每隔30分鐘測一次，觀察各個通道4小時內(nèi)吸光度的變化。：通道差檢測是取一只酶標(biāo)板小孔杯（杯底須光滑，透明，無污染以酶標(biāo)板架作載體， 將其（）置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸溜水調(diào)零，于490nm處連續(xù)測三次,觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示。一般酶標(biāo)儀無585nm濾光片，可選用550nm或630nm濾光片?！久笜?biāo)儀校正程序】：將不同波長的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下，用UV2201型紫外可見分光光度計(jì)（波長精度177。超出可測上限的A值常以*或over或其它符號表示。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。準(zhǔn)確性為177。1℃的誤差；：每個廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul ，人工扣板時，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；：經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。：ELISA加樣量?。?100ｕl），其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確，一般應(yīng)在177。，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣。【試劑盒評價】試劑評價需要有權(quán)威的血清考核盤（Panel）進(jìn)行檢測，價格昂貴，操作繁瑣，一般實(shí)驗(yàn)室不易開展，可以通過以下信息，了解試劑質(zhì)量。[6] 某些特殊項(xiàng)目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗?！驹揝OP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 7．用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。 5．結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。 3．洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用?！咀⒁馐马?xiàng)】 1．試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。7．測定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇唯波長450nm(以空白孔校零)或雙波長450／630nm，讀取各孔OD值。5．加顯色劑：先加顯色劑A，；再加顯色劑B，；充分混勻，放置37℃避光孵育15分鐘。 4．洗 板：1)手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置5—10秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。 2．加待測標(biāo)本：，并設(shè)HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔。標(biāo)本宜新鮮，無污染，避免無溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐?！緲?biāo)本的采取和保存】隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。確定需求后，按EXIT鍵返回此界面，再利用﹤”或“﹥”鍵進(jìn)入如下界面：define test ﹤exict﹥按此鍵退出,編程結(jié)束。確定需求后，按EXIT鍵返回此界面，再利用﹤”或“﹥”鍵進(jìn)入如下界面：define test ﹤eval mode﹥此指令用于選擇被執(zhí)行的報告方式，定性、定量或其他報告方式。確定需求后，按EXIT鍵返回此界面，再利用﹤”或“﹥”鍵進(jìn)入如下界面：define test ﹤layou