【正文】 陽性52例，兩法都陰性186例，TRFIA陽性而ELISA陰性20例，TRFIA陰性而ELISA陽性2例，采用配對x2檢驗，x2=,P＜，差異有非常顯著性，兩法比較符合率為238/260=%；～，～1NCU/ml1例， 1～5NCU/ml10例，～10NCU/ml36例，10NCU/ml以上14例。 HBeSg ELISA法 結果陽性17例，%；TRFIA法結果陽性18例，%；兩法都陽性17例，兩法都陰性242例，TRFIA陽性而ELISA陰性1例，TRFIA陰性而ELISA陽性無，采用配對x2檢驗，x2=1,P＞，差異無顯著性，兩法比較符合率為259/260=%；～，～，～2NCU/ml11例，～8NCU/ml12例。 2結果 ELISA法 結果陽性36例，%；TRFIA法結果陽性40例，%；兩法都陽性36例，兩法都陰性220例，TRFIA陽性而ELISA陰性4例，TRFIA陰性而ELISA陽性無，采用配對x2檢驗，x2=4,P＜，差異有顯著性，兩法比較符合率為256/260=%；～5ng/ml占4例，6～ 25ng/ml占7例，26～50ng/ml占8例，51～50ng/ml占8例，150ng/ml以上占13例。 方法 ELISA法和TRFIA法測定HBVM，嚴格按照試劑操作規(guī)程操作，同時加入相應質(zhì)控物監(jiān)測。2510變頻振蕩器。泰萊1時間分辨熒光分析儀。TRFIA試劑盒由廣州市豐華生物工程有限公司提供。早晨空腹抽取靜脈血，分離血清后產(chǎn)即檢測。本文采用TRFIA法對260份血清標本進行HBVM檢測，并與ELISA法結果進行比較和分析。 關鍵詞HBVM時間分辨熒光免疫分析技術 酶聯(lián)免疫吸附試驗 【文獻標識碼】A【文章編號】16068106（2004）06048602 The timeresolved fluoroimmunoassay TRFIA used in the HBVM ration test and the analysis on clinical application Cai Yihe Department of Laboratory,Chaozhou Central Hospital,Guangdong521021. 【Abstract】Objective to study the substance of blood immunity HBVM,Applying,the technology of TRFIA to test the result and then pare itwith the result of the ELISA in fixness,sensivity and specificity and to prehd the accuracy,feasibility and the value of clinical application in testing HBVM by to determinate the result and content of260and HBVM by TRFIA and ELISA HBsAg positre is36by ELISA,and40by TRFIA, x2=4,P＜,the fix rate %。方法 分別用TRFIA和ELISA法測定260例隨機血清標本HBVM結果及含量。乙肝時間分辨熒光免疫分析試劑盒共5項，包括表面抗原、表面抗體、e抗原、e抗體和核心抗體，可任選1項或多項，全套需備血3ml（不加抗凝劑），記賬后（每項45元）標本送傳染科實驗室，當天下午出結果。據(jù)我科現(xiàn)場測評，其特異性、敏感性和重復性均極強，幾乎沒有假陰性，%，同一標本連續(xù)20次檢測CV＜1%，同一批（10個）連續(xù)3天檢測CV= %，檢測后反應板連續(xù)3天重復閱讀CV＜1%。反應系統(tǒng)中許多物質(zhì)也可以發(fā)出熒光，但他們的熒光的壽命極短，因此，通過簡單的延時檢測，就可以將特異性熒光與非特異性熒光區(qū)別開來，所以這個方法的名稱冠以“時間分辨”。在免疫復合物中的稀土離子自身可產(chǎn)生微弱的熒光信號，而當加入增強液以后，稀土離子從免疫復合物中釋放出來，受到激發(fā)光照射時，熒光強度可增強100萬倍。時間分辨熒光免疫分析的原理和通常的免疫測定方法基本相同，只是標記物和測定方法不同。但是這兩個方法需要昂貴的設備，試劑成本高，難以普遍應用。據(jù)觀察，不同乙肝感染者表面抗原的濃度相差800倍,e抗原的濃度相差100倍，僅用“陽性”來表示，實在太粗糙，太不科學，難以滿足臨床的需要。酶聯(lián)免疫測定由于操作簡便，成本低廉，敏感性和特異性較好，80年代中期以來就成為乙肝抗原體檢測最主要的方法。因此定量測定對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預防乙肝方面。只有HBsAb的含量達到100mlU/ml以上時才可確定具有抵抗HBV入侵的作用?！?HBsAb的定量測定能夠?qū)σ腋蔚念A防起到監(jiān)督作用嗎？HBsAb的定量測定能夠?qū)贵w是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正確評價，對乙肝的預防起到監(jiān)督作用?！?TRFIA和定量PCR技術可互相補充 血清HBV—DNA熒光定量PCR測定可以直接反映血液中病毒復制狀態(tài)，具有很多臨床應用價值，但不能完全反應病毒復制靜息期細胞內(nèi)HBV病毒狀態(tài)。 4）有利于對慢性肝炎活動性或非活動性的判斷。慢性乙肝呈抗Hbc持續(xù)高濃度。 3）HBsAb濃度的高低可反映病毒感染的狀態(tài)。定量測定能明確檢測HBeAg向HBeAb轉換的時期，那表現(xiàn)為HBeAg濃度下降和HBeAb升高的過程。如HBsAg濃度降低，HBsAb濃度逐漸升高，可說明病情正往恢復期發(fā)展；反之，HBsAg濃度處于較高水平或上升趨勢，而HBsAb一直處于較低水平，則易發(fā)展為慢性乙肝或病毒攜帶者。因此，在急性乙肝早期能及早檢出HBsAg，確證HBV感染，縮短窗口期；其次，可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者；在部分慢性乙肝患者中，由于機體缺乏對HBV包膜蛋白的免疫應答，HBsAg表達較低，酶標檢測可出現(xiàn)HBsAg和HBsAb均陰性的情況，TRF技術則可避免這些情況的發(fā)生,為正確判斷病情提供依據(jù)。作者單位：410011長沙，中南大學湘雅二醫(yī)院肝病研究中心 目前我院已正式開展了乙肝二對半的時間分辨定量分析，其每一項的正常值范圍均是由我國衛(wèi)生部根據(jù)美國雅培的標準而制定，其靈敏度，準確度，及精確度都有遠遠優(yōu)于一般的ELISA法，乙肝兩對半的定量制定將給臨床提供一個關于乙肝診斷及療效，預后判斷的更可靠的實驗結果。目前TRF主要用于激素的檢測。研究發(fā)現(xiàn)，HBsAg、抗HBc濃度顯著高于正常，ELISA及TRF符全率為100%，抗HBs濃度明顯低于正常，兩者符合率為100%。通過TRF檢查發(fā)現(xiàn)，大部分ELISA法檢測為HBsAg、抗HBc陽性模式的患者其實為HBeAg假陰性（15/34，%）及抗HBe假陰性（14/34，%）。將前者與后兩組分別進行成組設計的兩樣本均數(shù)比較的t檢驗，、P值均＞，差異無顯著性。、177。即用ELISA檢查時HBeAg假陰性15例，抗HBe假陰性14例（表1）。 ：取HBV DNA含量的對數(shù)值進行成組設計的兩樣本均數(shù)比較，行t檢驗。 M：試劑為上海新波生物技術有限公司產(chǎn)品，采用Anytest2000時間分辨檢測儀。儀器為美國Perkin Elmer 公司Gene Amp E5700型PCR儀。 M檢測：用ELISA法，試劑為上海科華生物工程股份有限公司產(chǎn)品，按產(chǎn)品說明書操作。每人進行2次抗原抗體檢查，結果一致。（1）HBsAg、抗HBc IgG陽性，乙型肝炎e抗原（HBeAg）、抗HBs、抗HBc IgM陰性；（2）HBV DNA含量＞104拷貝/ml。采靜脈血分離血清，用ELISA進行HBV標志物（HBV M）檢測及HBV DNA定量檢查。為此，采用時間分辨免疫熒光分析法（TRF）對34例此類患者進行乙型肝炎標志物（HBV M）的檢查，現(xiàn)將結果報道如下：一、 資料與方法 ：為2002年2月至9月住院或門診患者，共34例，男21例，女13例，年齡5~58歲，平均（177。在其他指標缺乏的情況下（如HBsAg陰性），AntiHBc定量可能是現(xiàn)存HBV感染的唯一指標。因此，在特殊人群中開展AntiHBc篩選試驗對預防乙肝的傳播有重要參考價值。偶爾也有AntiHBc陰性的HBV感染者，多見于免疫抑制的病人。乙肝核心抗體（AntiHBc）定量l 乙肝病毒由外殼HBsAg和內(nèi)核HBcAg組成。l 由前C基因突就株HBV感染所致異型慢性乙肝，由于患者始終不出現(xiàn)HBeAg。定量監(jiān)測能明確出HBeAg向AntiHBe換的時期，即表現(xiàn)為HBeAgCOI下降（含量降低）和AntiHBeCOI下降（含量升高）的過程。與前者HBeAg陽性慢性乙肝類型中的轉換期比較，兩對半定性均表現(xiàn)為小三陽，但后者主要表現(xiàn)在高HBeAgCOI值，忽高忽低的ALT值和HBVDNA始終陽性。l 由前C基因突變HBV感染所致的急性或慢性乙肝，始終不出HBeAg，但HBVDNA進行性復制。在急性HBV感染時，血清中可出現(xiàn)HB