蛋白酶專一性酶切位點(diǎn)的影響因素分析-文庫吧資料
2025-07-05 17:01本頁面
【正文】 質(zhì)更易被水解?！?，八個肽鍵在最初的15s內(nèi)被水解 ，而最多肽鍵的斷裂出現(xiàn)在50℃，一共有10個。可通過β乳球蛋白的結(jié)構(gòu)解釋，因?yàn)樵诜磻?yīng)起點(diǎn)，所有這些肽鍵位于暴露的氨基端和羧基端，容易被酶水解。Seronei Chelulei Cheison等（2011）使用MALDITOFMS（基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜）分析了溫度變化（25℃、℃和50℃）結(jié)合不同的堿性pH值（、）對胰蛋白酶水解β乳球蛋白模式的影響[9]。肽鍵裂解的時間也有所差異，從而釋放出相應(yīng)的肽段。這些是κ酪蛋白每個pH值主要的TCA可溶二次水解產(chǎn)物，其相關(guān)的肽鍵為Phe17Phe1Leu32Ser3Tyr42Tyr43和Gln75Trp76。Julian R. Reid等（1997）研究了pH值（~）對凝乳酶水解κ酪蛋白及其巨肽的影響[11]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶的酶切位點(diǎn)由羧基端變?yōu)榘被说默F(xiàn)象。. 對非專一性酶切位點(diǎn)的影響研究發(fā)現(xiàn)，在蛋白酶最適pH值和偏離最適pH值下均檢測到了蛋白酶的非專一性酶切，在后者條件下發(fā)生的范圍更廣泛。這些結(jié)果證實(shí)了水解條件變化對酶解模式的影響。首先，結(jié)合較高溫度（50℃）和較高pH值（、）引起β乳球蛋白結(jié)構(gòu)改變進(jìn)而導(dǎo)致變性。Lys101tyr102在50℃、。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Lys60, 。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在pH 。Julian R. Reid等（1997）研究了pH值（~）對凝乳酶水解κ酪蛋白及其巨肽的影響[11]。. 對專一性酶切位點(diǎn)的影響研究發(fā)現(xiàn)，在最適pH值專一性酶切位點(diǎn)水解速率最大，偏離最適pH值時出現(xiàn)了非專一性酶切位點(diǎn)。. pH對酶切位點(diǎn)的影響酶蛋白分子上帶有很多酸性、堿性氨基酸殘基，pH值的變化直接影響到這些殘基側(cè)鏈基團(tuán)的解離狀態(tài)。此外，胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶約40％的氨基酸序列是相同的。只有一個肽（f（1828））在25℃℃能酶切生成，而大部分片段只能在50℃下才能生成。新出現(xiàn)的酶切位點(diǎn)為Leu10Asp1Gly17Thr1Ser21Leu2Ser30Leu3Tyr42Val4Thr49Pro50、Val118Cys11 Leu133Glu13Tyr20Ser21。此外，它也能水解亮氨酸的羧基端。胰凝乳蛋白酶，和胰蛋白酶一樣是消化道的絲氨酸蛋白酶。Seronei Chelulei Cheison等（2011）使用MALDITOFMS（基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜）分析了溫度變化（25℃，℃，和50℃）結(jié)合不同的堿性pH值（，）對胰蛋白酶水解β乳球蛋白模式的影響[9]。提高酶解溫度到60℃以上，可在更短保溫時間內(nèi)釋放出肽段LQKW。其中的LQKW據(jù)報(bào)道是一種高效ACE抑制劑。在60℃和80之間的范圍內(nèi)水解30分鐘后所得產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了三個新的肽段：LDA、LKPTPEGD、LQKW，相關(guān)的位點(diǎn)為Leu122Val12Glu127Val12Ala132Leu133。在37℃反應(yīng)5分鐘后，總共確定了水解產(chǎn)物中的25個肽段，這些肽段一直到更高的保溫溫度時才進(jìn)一步水解。andezLedesma（2006）將牛的β乳球蛋白A（βLg A）在非變性和變性加熱條件下用嗜熱菌蛋白酶水解，用HPLCMS/MS確定水解過程中釋放的肽段[10]。在25℃，只有β乳球蛋白的末端區(qū)域被酶解，然而，隨著溫度升高，β乳球蛋白中心區(qū)域也開始被水解?！娴臈l件下水解10分鐘之后，所有可能的專一性酶切位點(diǎn)都被水解。一般情況下，胰蛋白酶為肽鏈內(nèi)切酶，水解賴氨酸或精氨酸的羧基與其它氨基酸（脯氨酸除外）形成的肽鍵。研究發(fā)現(xiàn)，隨著溫度升高，蛋白質(zhì)中更多的專一性酶切位點(diǎn)被水解，水解范圍更廣泛。溫度變化影響蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，從而影響了其對蛋白酶的親和力。蛋白質(zhì)的合理選擇，對提高目標(biāo)肽的產(chǎn)率至關(guān)重要。植物蛋白質(zhì)常用的包括大豆、豆類（扁豆、鷹嘴豆、豌豆和豆類）、燕麥、小麥、火麻仁、油菜和亞麻籽。部分活性肽來自乳蛋白、酪蛋白、乳清、雞蛋和肌肉蛋白質(zhì)等動物蛋白質(zhì)。常見的一些蛋白酶及其作用位點(diǎn)見表1。（2）外切酶：作用于蛋白質(zhì)或多肽分子氨基或羧基末端的肽鍵，生成游離氨基酸，其中作用于氨基末端的稱為氨肽酶，作用于羧基末端的稱為羧肽酶。根據(jù)水解方式不同可將目前常用蛋白酶分為以下2類[7]：（1）內(nèi)切酶：作用于蛋白質(zhì)分子內(nèi)部肽鍵。3. 蛋白酶和蛋白質(zhì)的選擇蛋白酶的選擇是酶法制備活性肽的關(guān)鍵步驟。對于常用的酶解來說，局部構(gòu)象、三維結(jié)構(gòu)、實(shí)驗(yàn)條件、酶切位點(diǎn)附近的其它氨基酸以及其它偶然因素都會影響蛋白水解酶的酶切效果[5]。但酶法制備活性肽過程中一
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