化驗(yàn)技術(shù)協(xié)會(huì)第八期企業(yè)知識(shí)管理培訓(xùn)資料-文庫(kù)吧資料
2025-07-03 23:42本頁(yè)面
【正文】 薄膜濾器操作的，培養(yǎng)基裝量50ml。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中，應(yīng)在三周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，可在一年內(nèi)使用。 未開(kāi)封脫水培養(yǎng)基應(yīng)避光儲(chǔ)存于25℃以下陰涼干燥處，已開(kāi)封的脫水培養(yǎng)基應(yīng)蓋緊，避光儲(chǔ)存于25℃以下陰涼干燥處。培養(yǎng)基應(yīng)只能進(jìn)行一次蒸汽滅菌處理。培養(yǎng)基只限加熱一次，并防止被污染。 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基I，分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基的氧化層(粉紅色)不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1／2，滅菌。 加入葡萄糖和指示液，搖勻，補(bǔ)足水量，調(diào)節(jié)pH值(～)，177。 除葡萄糖和指示液外，將處方中各成分加水后置有石棉網(wǎng)的電爐、可調(diào)電磁爐或其它適宜的加熱設(shè)備中，微溫溶解。分裝好的培養(yǎng)基及時(shí)密封后必須在配制當(dāng)天(2小時(shí)內(nèi)最佳)進(jìn)行滅菌處理。調(diào)節(jié)pH值：測(cè)定pH值的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25℃177。4 培養(yǎng)基 一般采用商品脫水培養(yǎng)基，臨用時(shí)按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，配制培養(yǎng)基時(shí)稱量要迅速以免吸潮而影響稱量的準(zhǔn)確性，同時(shí)為避免增加培養(yǎng)基中的金屬離子及其他微量化學(xué)元素而影響微生物的生長(zhǎng)、鑒別、所用器具應(yīng)為潔凈玻璃器皿，所用溶解用水為純水。然后，用管口帶有能過(guò)濾菌絲的裝置(如薄層無(wú)菌棉花或紗布的無(wú)菌毛細(xì)吸管)的吸管吸出胞子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，％無(wú)菌氯化鈉溶液將其稀釋至每毫升含小于100cfu的孢子懸液(可采用比濁法)?！媾囵B(yǎng)5～7天，使大量的孢子成熟?！媾囵B(yǎng)24～48小時(shí)，％無(wú)菌氯化鈉溶液制成每毫升含菌小于100菌落形成單位(cfu)的菌懸液。取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，177。銅綠假單胞菌不宜用本法保存。甘油冷凍管保藏法 將待保藏菌接種平板或瓊脂斜面，適宜溫度下培養(yǎng)適宜時(shí)間后(細(xì)菌24～48小時(shí)的培養(yǎng)物，白色念珠菌72小時(shí)的培養(yǎng)物)，用無(wú)菌接種環(huán)輕輕刮取菌苔，并通過(guò)接種環(huán)與試管壁之間的輕輕摩擦使細(xì)菌充分?jǐn)U散到預(yù)先裝于試管中的無(wú)菌蒸餾水中，調(diào)整菌液濃度，向已制備好的菌懸液中加入等體積、濃度為20％的無(wú)菌甘油，輕輕振搖小管，使內(nèi)容物充分混和，分裝于無(wú)菌小管，制好的甘油冷凍管最好在30℃貯存。菌種傳代保藏方法很多，各單位可根據(jù)情況采用，但無(wú)論應(yīng)用何種方法，都應(yīng)對(duì)采用的方法進(jìn)行驗(yàn)證，確保在相應(yīng)保存條件下的菌種不會(huì)變異且性能穩(wěn)定，同時(shí)也應(yīng)兼顧到方法的經(jīng)濟(jì)和簡(jiǎn)便。并作生化實(shí)驗(yàn)或使用菌種鑒定系統(tǒng)進(jìn)一步鑒定該菌種。菌種確認(rèn) 用無(wú)菌接種環(huán)取上述培養(yǎng)物，在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板上劃線分離單個(gè)菌落，適宜條件下培養(yǎng)?！?，3～5天)下培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基是否渾濁，(如不渾濁，細(xì)菌應(yīng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至7天以上，真菌應(yīng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至14天以上，仍未渾濁，按相關(guān)規(guī)定滅菌處理。將安瓿存于20℃，使用時(shí)首先需要復(fù)活凍干菌種(按菌種保藏中心提供相關(guān)資料操作)，一般包括以下步驟：冷凍菌種的復(fù)活 清潔安瓿(可用75％的酒精或碘伏)后，用砂輪在安瓿上部三分之一處劃痕，用干燥的無(wú)菌紗布包裹安瓿，將安瓿掰開(kāi)，～(生孢梭菌用液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基；金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌用營(yíng)養(yǎng)肉湯；白色念珠菌、黑曲霉菌用液體真菌培養(yǎng)基)滴加到安瓿中，輕輕旋轉(zhuǎn)安瓿并吹打，使凍干菌種和液體培養(yǎng)基充分混和并完全溶解，再將安瓿內(nèi)的菌懸液全部吸出，轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的培養(yǎng)基試管中，根據(jù)菌種類型采用適宜的培養(yǎng)條件(℃177。原始菌種購(gòu)到后，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，接收菌種時(shí)應(yīng)檢查安瓿的數(shù)量和菌種的名稱及每一支安瓿的完整性。不符合規(guī)定的濾膜不得使用?！?，培養(yǎng)18—20小時(shí)，％無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至103 (約相當(dāng)于7105cfu／m1)，取此菌液1ml加至50ml ％無(wú)菌氯化鈉溶液中，按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，取該濾液5ml接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基40ml中，177。2005年版中國(guó)藥典對(duì)濾膜的濾速未明確規(guī)定，而USP規(guī)定在700mmHg(93kPa)壓力下，濾膜直徑47mm；流速55～75ml／min。 氣泡法 先將濾膜浸入水中，使完全濕潤(rùn)，然后用鑷子夾住一片濾膜放于氣泡點(diǎn)測(cè)定裝置或?yàn)V膜孔徑測(cè)定儀上，膜上放一塊與濾膜大小相同的尼龍篩網(wǎng)，再加上多孔板，將螺旋固定圈旋緊，在多扎板上加3～5mm深的水(注意排除氣泡)關(guān)閉放氣閥，啟動(dòng)空壓機(jī)或氮?dú)馄块y，使壓力緩緩上升，注意觀察水面上產(chǎn)生第一個(gè)氣泡時(shí)，記錄壓力表的壓力，()。微孔濾膜直徑50mm、。 無(wú)菌衣、褲、帽、口罩等洗凈晾干，配套，用牛皮紙包嚴(yán)，滅菌待用或用一次性的無(wú)菌物品代替。用雙層紗布將1把剪刀與1把鑷子間隔包扎在一起，放于帶蓋的容器（瓷盒或鋁制飯盒)內(nèi)，蓋嚴(yán)，用牛皮紙包扎，滅菌(參照附錄XV滅菌法)待用。長(zhǎng)柄取樣匙，放于不銹鋼長(zhǎng)筒內(nèi)，蓋嚴(yán)，干熱滅菌待用。凡無(wú)菌操作過(guò)程中所用的器皿，都應(yīng)用牛皮紙包扎嚴(yán)密，滅菌。 玻璃器皿 試管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管(10ml)、注射器(lOml)、雙碟等，用玻璃洗滌劑或清潔液浸泡，水洗3次。 恒溫培養(yǎng)箱及生化培養(yǎng)箱。 無(wú)菌操作臺(tái)面或超凈工作臺(tái)還應(yīng)定期請(qǐng)有關(guān)部門(mén)檢測(cè)其懸浮粒子，應(yīng)達(dá)到lOO級(jí)(一般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀)檢測(cè)塵埃粒徑≥／升，≥5μm的粒數(shù)為0,空氣流速應(yīng)≥／s，可根據(jù)無(wú)菌狀況必要時(shí)置換過(guò)濾器?！媾囵B(yǎng)48小時(shí)，
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