金銀花內(nèi)生真菌分離及其次生代謝產(chǎn)物相關(guān)性研究分析畢業(yè)論文-文庫吧資料
2025-06-26 12:46本頁面
【正文】 sterilized water）30s (3 times)8%次氯酸鈉（NaClO） 60s（5 times）無菌水（sterilized water） 60s（5 times）將金銀花不同組織部位（根、莖、葉、花）先在自來水下沖洗干凈，去除表面的泥土與灰塵，無菌濾紙吸干表面水分，然后按照以上程序進行表面消毒： 金銀花內(nèi)生菌分離表3 金銀花內(nèi)生菌不同組織部位分布部位類型根莖葉花細菌（株）2421真菌（株）9173120比率%%%%通過對金銀花內(nèi)生真菌的分離，共得到內(nèi)生菌86株，其中從金銀花根部分離得到10株，%；從莖部分離得到21株，%；從葉片中分離得到33株，%；花蕾中分離得到21株，%。培養(yǎng)條件及測定同液體培養(yǎng)基的選擇。培養(yǎng)條件及測定同液體培養(yǎng)基的選擇。參照《真菌鑒定手冊》[4]進行鑒定，可將內(nèi)生菌初步將其鑒定到屬水平。L，注入液相色譜儀，測定，即得。(HPLC)檢測木犀草苷：參照《2010版藥典》進行測定，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SBphenyl 250mm,5181。(HPLC)檢測綠原酸：參照《2010版藥典》進行測定，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：%磷酸溶液（13：87）為流動相；流速1ml/min；柱溫25℃；檢測波長327nm；進樣量10181。l,對照品溶液10181。(TLC)檢測木犀草苷將處理后的發(fā)酵提取液適當(dāng)濃縮作為供試品溶液。l,對照品溶液10181。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。將發(fā)酵好的內(nèi)生菌液體發(fā)酵液離心(10000r/min)10min，過濾，濃縮，加甲醇溶解，定容至5ml，置進樣小瓶中備用。L置入培養(yǎng)基內(nèi)表面，作為對照，以確定分離得到的是植株組織內(nèi)生菌而不是組織表面未消毒徹底的菌。E5：75%乙醇5min,無菌水沖洗3次。E3：5%次氯酸鈉5min，無菌水沖洗3次。E1：75%乙醇30s，%升汞2min，無菌水沖洗3次。金銀花組織表面消毒方法的考察。采集健康金銀花植株的不同組織部位（新鮮根、莖、葉、花）作為實驗材料，采摘時盡量選擇老的組織，此外，采集莖、葉和花時盡量選擇離地面較遠的部位，減少表面雜菌污染。以上各種培養(yǎng)基配制好分裝完成后于121℃,20min滅菌。3 材料與方法可溶性淀粉 天津市化學(xué)試劑三廠葡萄糖 上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站試劑廠蛋白胨 上海東海制藥廠牛肉膏 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司瓊脂 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司KNO3 ，K2HPO4 ，MgSO4? 7H2O ，NaCl ，F(xiàn)eSO4? 7H2O等均為天津市化學(xué)試劑三廠硅膠G 青島海洋化工廠甲醇 天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司乙酸丁酯 天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限責(zé)任公司羧甲基纖維素鈉 天津市福辰化學(xué)試劑廠氯仿 淄博廣然化工有限公司甲苯 天津市富宇精細化工有限公司甲酸 上海三浦化工有限公司乙腈 天津市四友精細化學(xué)品有限公司以上試劑除乙腈，甲醇外均為分析純?；谀壳敖疸y花的生產(chǎn)和需求現(xiàn)狀，利用其內(nèi)生菌次生代謝產(chǎn)物來生產(chǎn)其主要活性成分，為人類突破植物資源周期長、產(chǎn)量低、不可再生等限制。植物內(nèi)生菌[7]次生代謝產(chǎn)物是多樣性的，內(nèi)生菌不但自身能夠產(chǎn)生特殊的生物活性物質(zhì)，還能誘導(dǎo)和促進藥材有效成分的合成或積累，甚至產(chǎn)生與藥材相同或相似的活性成分。通過比較發(fā)現(xiàn)， 以上產(chǎn)生與宿主相同或相似生理活性成分
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