金銀花內生真菌分離及其次生代謝產物相關性研究分析畢業(yè)論文(文件)
【正文】 方法Solution處理時間(秒)Time treated無菌水（sterilized water）30s（2 times)75%乙醇（ethanol）30s（1 times)無菌水（sterilized water）30s (3 times)8%次氯酸鈉（NaClO） 60s（5 times）無菌水（sterilized water） 60s（5 times）將金銀花不同組織部位（根、莖、葉、花）先在自來水下沖洗干凈，去除表面的泥土與灰塵，無菌濾紙吸干表面水分，然后按照以上程序進行表面消毒： 金銀花內生菌分離表3 金銀花內生菌不同組織部位分布部位類型根莖葉花細菌（株）2421真菌（株）9173120比率%%%%通過對金銀花內生真菌的分離，共得到內生菌86株，其中從金銀花根部分離得到10株，%；從莖部分離得到21株，%；從葉片中分離得到33株，%；花蕾中分離得到21株，%。薄層層析圖譜如下：圖1 三株菌株發(fā)酵液薄層色譜圖A:A324，B:B415，C:B431,D:綠原酸對照品，E：金銀花提取液Rf值：A:, B:, C:, D:, E:(HPLC)檢測采用高效液相色譜法進一步確認：三株內生真菌A324，B415，B431與綠原酸對照品保留時間相近。 A324 B415 B431 A222圖13 四株菌株試管斜面形態(tài)圖表4四株菌株生理形態(tài)描述菌株顏色菌絲培養(yǎng)基邊緣分泌物A324黃色輻射狀生長結合牢固不整齊無B415黃色干燥結合牢固整齊紅色液滴B431淡綠色干燥，皺縮結合不牢固不整齊無色液滴A222淺綠色干燥結合牢固不整齊無 顯微形態(tài)鑒定通過對三株內生真菌的菌落形態(tài)及顯微形態(tài)觀察，觀察其孢子形態(tài)，產孢方式，孢子囊及孢子柄等顯微形態(tài)來初步推測菌株的分類學地位。5 結論與討論 為確保從金銀花植株上分離到的菌是其內生菌，本實驗對實驗材料做了嚴格消毒。參考文獻[1]項勇，崔京霞，呂安國．東北紅豆杉內生真菌的分離和篩選[J]．東北林業(yè)大學學報，2002，30(3)：3034．[2]馬天有，董兆麟．植物分離產紫杉醇的內生真菌的研究[J]．西北大學學報，1999．29(1)：4749．[3] 項勇，[J],東北林業(yè)大學學報 ，2002,30（2）：3034[4]李海燕．一種桃兒七內生真菌的分離初報．云南大學學報，1999，21(3):243[5]一株產鬼臼毒素內生真菌發(fā)酵條件的研究[J].西北大學學報[6][M].上海:上海科學技術出版社,1979.[7]郭良棟，菌物系統(tǒng)，2001,20（1）：148152.。通過對金銀花內生菌的分離得知葉片中內生真菌含量豐富，其次為花和莖，根部內生真菌數量最少。菌絲有分支，無隔絲胞綱曲霉屬B431孢子單生，顏色淡綠色分生孢子梗細長，有分支菌絲體細長，有分支，向空中呈放射狀生長青霉屬A222單生，基部疤痕明顯直，彎或屈曲，叢生在子座上，產孢細胞有明顯疤痕多埋生，表面菌絲不發(fā)達尾孢屬 二次發(fā)酵條件的優(yōu)化結果發(fā)酵條件的單因素優(yōu)化結果編號因素結果1碳源蔗糖2氮源蛋白胨3溫度28℃通過對發(fā)酵條件的摸索，得到基本發(fā)酵培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，考慮到蔗糖價格便宜，且在實驗過程中與葡萄糖起到相同的實驗作用，故選擇主要碳源為蔗糖，主要氮源為蛋白胨，溫
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