細胞培養(yǎng)常見問題及其解決-文庫吧資料
2025-06-13 21:41本頁面
【正文】 ， 應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。 26. 各種細胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同？ 不同，可以參考文獻選擇。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果， 將造成細胞生長停滯或死亡。C 冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。 176。 23. 偵測出細胞株有支原體污染時， 該如何處理？ 可以選用MP Biomedicals公司的MRA, 181。 ？ 支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數(shù)， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。 推薦使用MP公司的雙抗或三抗：SKUPack SizeNameDescription091674049100 mL100X PenStrepAmphotericin 三抗：青霉素鏈霉素兩性霉素B 091670249100 mL100X PenicillinStreptomycin雙抗：青霉素鏈霉素(mycoplasma) 污染的細胞， 是否能以肉眼觀察出異狀？ 不能。 。 ，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2～3代。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，, mg/ml。 ，或幾個小培養(yǎng)瓶中。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。 當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之最好方法。 ？ 細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。 17. 細胞欲冷凍保存時， 細胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細胞濃度？ 冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial， 融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。C 不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入80176。C 以下， 再放入液氮槽長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降13 176。C 30分鐘) → 80 176。 ？ 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 176。C， 避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì)， 并可減少污染之機會。注意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能， 故不可將DMSO 直接加入細胞液中， 必須使用前先行配制完成。 ，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？ 欲回收動物細胞， 其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 10 分鐘， 過高之轉(zhuǎn)速， 將造成細胞死亡。第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中， 保存于–20 176。 11. 細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時， 是否應(yīng)馬上去除DMSO？ 除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應(yīng)直接放入含有1015ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。C 水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否
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