【正文】 簡(jiǎn)單的問(wèn)題，如果處理不好也可導(dǎo)致不同的結(jié)果，如果應(yīng)用自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色儀，將程序輸入即可，如為手工操作，就必須注意以下的問(wèn)題：，在加入抗體，如一抗，二抗或三抗。，在臨床應(yīng)用的抗體中，還有少部分的抗體為多克隆抗體。這要?dú)w功于生物技術(shù)的不斷提高?？贵w除了分為上述的兩個(gè)類外，從其克隆的高度講，也有單克隆和多克隆之分。，冰凍切片，涂片和細(xì)胞培養(yǎng)片。（2） 抗體的適應(yīng)癥。有人抱怨，剛買的抗體標(biāo)記很好，后來(lái)就漸漸不好了。如果在有效的時(shí)間內(nèi)不能使用完。如果碰上罕見(jiàn)的病例，有時(shí)一年也標(biāo)記不了幾例，這樣就應(yīng)采用濃縮的了。如果用量大的單位，對(duì)于3ml一個(gè)包裝的抗體，一年需要用幾支，這對(duì)抗體來(lái)說(shuō)，不會(huì)造成浪費(fèi)。⑥即用型抗體不可作為常備貯存抗體。基層單位，無(wú)需多大的投資，就能開(kāi)展免疫組化的工作，這對(duì)于提高診斷的準(zhǔn)確率，極有好處。而即用型抗體無(wú)需再行稀釋，即買即用，無(wú)需配備其余器械。③不需要配置多種昂貴的微量加樣器。對(duì)于初學(xué)者來(lái)說(shuō)，它是一種最好的抗體，不管什么樣的病例和切片，只要有抗體，不需要自己摸索稀釋度，拿起試劑瓶一滴即可，極不方便。④需要配置各型號(hào)的微量加樣器，以利于量取精確的抗體量。③需要稀釋抗體，手續(xù)較為復(fù)雜。②成本低，價(jià)格較便宜。實(shí)踐證明：濃縮型抗體，可作為常備檢測(cè)抗體。在各單位的常規(guī)活檢診斷中，有常見(jiàn)的病例，也有罕見(jiàn)的病例，尤其是后者，有時(shí)很長(zhǎng)時(shí)間才遇到一例，這就給抗體的應(yīng)用和備用提出了更高的要求，如除了常用的抗體外，還需備用一些較為罕見(jiàn)病例的抗體。九、選擇合適的抗體至今為止，應(yīng)用于臨床的常用抗體有幾十種，在這當(dāng)中又可分為兩種類型。要用一種不相干的抗體居先處理，可能減少和標(biāo)記的抗體無(wú)特異性結(jié)合。八、須適當(dāng)合理地使用封閉試劑為了減少背景產(chǎn)生的非特異性染色，在免疫組化染色的過(guò)程中，在加入一抗孵育前，常常加入非免疫動(dòng)物血清，以減少背景的染色，陳尚季等認(rèn)為：抗體是高度的電荷分子，可能與帶有相應(yīng)電荷的組織成分無(wú)特異性地結(jié)合（如膠原）。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為H2O2甲醇較適合于大多數(shù)的情況，因?yàn)槌薍2O2外，甲醇對(duì)各種酶，都有鈍化的作用，因此H2O2甲醇的雙重作用效果較好。%的H2O2，也可將其稱為1%H2O2，因?yàn)槭惺鄣腍2O2的濃度為30%，%，如果按其溶液的用量則為1%。當(dāng)然，對(duì)它們進(jìn)行徹底的消除是不行的，因?yàn)橐种铺珔柡?，?duì)抗原也會(huì)有相同的抑制作用。含有這種酶的各細(xì)胞和組織如果在染色前不對(duì)其進(jìn)行處理和抑制，它們將會(huì)在DAB底物的顯色時(shí)，與HRP一樣催化底樣，使之顯色，使之生成與陽(yáng)性物一樣的黃棕色，造成混亂。七、必須徹底抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，才能降低背景的染色。為了做到這一步，切片在脫蠟前的加溫將有助于完成上述的要求。如果在冬天，室溫較低，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時(shí)間需要延長(zhǎng)，1020分鐘或更長(zhǎng)。脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。為了解決上述的問(wèn)題，切片在染色前必須徹底脫蠟，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強(qiáng)，脫蠟時(shí)間較短。它只能靠特用的試劑，處理足夠的時(shí)間，才能將其除去。六、切片脫蠟必須干凈，否則將會(huì)影響免疫組化染色的最后結(jié)果。如果切片切完后，遲遲不進(jìn)行染色，存放于室溫中或工作冰箱中，切片中的抗原將會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸消失，甚至出現(xiàn)假陰性。另外，經(jīng)上述時(shí)間烘烤出來(lái)的切片，附貼牢固，抗原保存好，染色成功率達(dá)100%，保證了病理診斷的及時(shí)性和準(zhǔn)確性。這是因?yàn)椋嚎乖赡褪苋绱说臏囟龋±砜埔话闶褂玫氖?，其熔點(diǎn)在60℃左右，組織浸蠟時(shí)，浸蠟箱中的溫度，一般都調(diào)在65℃左右，組織在這樣溫度中要浸泡2小時(shí)以上，才能達(dá)到徹底地浸蠟。切片究竟烘烤多長(zhǎng)時(shí)間才合適，既不脫片和適合各項(xiàng)要求，又不至于破壞抗原。因此，對(duì)切片的質(zhì)量要求很高，尤其是切片的附貼程度。應(yīng)用于免