【正文】 和生物素偶聯(lián)的過氧化物酶或堿性磷酸酶按一定比例組成卵白素生物素酶復合物(ABC復合物)，卵白素作為橋梁，與生物素標記抗體和生物素酶復合物連接，從而形成一種較大類似晶格的復合體，大大提高了免疫酶染色的靈敏度。*親和免疫組織化學的優(yōu)點：提高免疫組織化學定位的專一性 加強免疫組織化學染色的靈敏度，減少非特異性反應常用的親和物質：生物素(Biotin)與卵白素(Avidin) 葡萄球菌A蛋白(SPA)與免疫球蛋白IgG 植物凝集素(Lectin)與糖結合物常用親和物質的作用原理：生物素與親和素：生物素和親和素分子具有高度親和力，生物素能通過單一的生化反應結合大分子成分；親和素可以和不同的標記物結合，親和素也可作為橋，同時連接不同的生物素化的分子如抗體、酶等。親和細胞化學：利用兩種物質間的高度親和特性及其可標記性，將酶等標記物連接到親和物上，以對體內待檢物進行檢測的方法。熒光壽命：是指熒光物質被一瞬時光脈沖激發(fā)后產生的熒光隨時間而衰減到一定程度時所用的時間。熒光效率：是指吸收光能轉變?yōu)闊晒獾陌俜謹?shù)，即發(fā)射熒光的光量子數(shù)（熒光強度）/吸收光的光量子數(shù)（激發(fā)光強度）X 100%。自發(fā)熒光：是指組織（細胞）內少數(shù)成分未經熒光素染色，經短波照射便可發(fā)出熒光。熒光：是指一個分子或原子吸收并儲存給予的能量后進入激發(fā)態(tài)，當其從激發(fā)態(tài)再回復到基態(tài)時，過剩的能量以熒光形式釋放出來。影響抗體稀釋度的因素：抗體的濃度、質量、有效期 抗體中非特異性蛋白質的含量 孵育時間長短 染色方法靈敏度差異*免疫組化染色的注意事項：抗體保存、配制 顯示劑合理使用 對照設計 結果判斷等免疫熒光組織化學技術的基本原理：是根據(jù)抗原抗體反應的原理，將已知的抗體與熒光素結合，以此標記的抗體與細胞或組織中的抗原結合，形成抗原抗體復合物，通過熒光顯微鏡激發(fā)光的照射，可使結合在抗原抗體復合物上的熒光素散發(fā)出熒光，從而可以對組織或細胞中的抗原進行檢測。抗原修復的方法：酶消化法 微波輻射法 酸水解法 高壓加熱法 去垢劑處理法石蠟切片中抗原降低的主要原因：甲醛固定液中醛基與抗原蛋白中的氨基交聯(lián)，封閉了抗原決定簇 甲醛使組織中蛋白與蛋白之間發(fā)生交聯(lián)，形成網(wǎng)絡結構而掩蓋抗原決定簇 組織從脫水、透明、浸蠟、烘片過程，溫度過高及其他理化因子使抗原性破壞、丟失*微波輻射法的原理：熱效應：輻射場內極性分子運動加速，使被封閉抗原決定簇重新暴露或修復 化學反應：化學物質與部分決定簇結合起化學反應，增加通透性，抗原－抗體結合更多 微波直接作用：高頻電磁波作用，使打開蛋白質之間的交聯(lián)，使抗原決定簇中化學鏈獲得修復抗原修復方法的評價：酶消化法：使部分抗原決定簇暴露，染色性增強同時破壞部分抗原；對某些膜抗原、激素受體、癌基因及部分淋巴細胞抗原無增強作用甚至有破壞作用，使結構受損，增加彌散，不利定位觀察； 微波修復法：廣泛應用，不同型號微波功率不同，價格貴； 酸水解法：能增強特異性染色，降低背景著色，但水解過度對抗原有破壞； 高壓加熱法：對部分抗原經高壓加熱，染色強度和效果比微波好；時間不易掌握，會發(fā)生非特異性抗原暴露，增加背景染色； 單純加熱、高壓加熱、微波等方法：溫度在95 ℃以上，必須使用修復緩沖液；單純加熱法對封閉牢固的抗原決定簇暴露不太理想。它是應用細胞融合雜交瘤技術制備的。多克隆抗體（Polyclone antibody，pcAb)：即由抗原免疫動物產生的抗體，因抗原有多個抗原決定簇，由多個B細胞克隆同時受刺激產生的抗體?？乖哂袃煞矫娴奶匦裕阂皇悄艽碳C體產生抗體或致敏淋巴細胞，稱為免疫原性；另一種是能與相對應的抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性結合，稱為反應原性。免疫組織化學：是應用免疫學和組織化學原理，對組織切片或細胞標本中的某些化學成分進行原位的定性、定位或定量研究的技術，主要是利用抗原與抗體之間具有高度特異性結合的特性，先從組織或細胞中提取某種化學物質作為抗原或半抗原，通過免疫后獲得特異性的抗體，再以此抗體去檢測組織或細胞中存在的相應抗原，之后借助組織化學的方法顯示出抗原抗體的結合部位并進行半定量測定。鈣鈷法和偶氮偶聯(lián)法比較：鈣鈷法：有非特異性染色，易出現(xiàn)假陽性；反應產物易擴散，定位欠佳；需設置對照組。酶組織化學的一般原則：組織或細胞的預處理和切片的制作過程應不影響待檢酶的活性及分布 底物和其它輔助物必須同時迅速穿透組織和細胞中 所選底物只能被一種酶所催化分解 所選的輔助物不影響細胞膜內酶的活性和其它反應試劑的穿透性 酶—底物反應的產物能迅速與輔助劑起反應，形成的終反應產物為不溶于水的有色而穩(wěn)定的物質，能長時間保存 所有參與反應的試劑除與被檢測酶發(fā)生反應外，均不能與組織或細胞其它成分結合或吸附。該反應產物沉積在原位，以顯示酶的存在。酶的組織化學：是用組織化學的方法證明酶的存在，即利用細胞內的酶具有催化底物的特性，并用顯色反應使反應產物具有可見性，從而在切片或涂片上顯示組織或細胞中內源性酶的活性及其部位。*AgNOR形態(tài)分型：單一型、彌散型、聚集型、核仁內型、混合型。它與核糖體的形成及細胞內蛋白質的合成關系密切，可用來反映核仁結構和功能改變。即以TdT酶和核苷酸混合形成標記一抗，以羊Fab片斷偶聯(lián)抗熒光素抗體和堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記形成二抗，再用底物顯色。其染色的機制可能為電離和聚合作用。甲基綠派洛寧法：甲基綠—派洛寧為堿性染料，它分別能與細胞內的DNA、RNA結合呈現(xiàn)不同顏色。Feulgen法與PAS法比較：PAS法用過碘酸使六碳糖中的1,2乙二醇基（—CHOHCHOH—）變成二醛基（—CHO），然后與Schiff試劑反應，形成紫紅色的化合物，在有多糖的部位，就會呈現(xiàn)紫紅色陽性反應。主要用于胃粘膜腸上皮化生的分型。 分型原理：小腸型黏液：涎酸粘多糖為主（AB+/）；結腸型黏液：硫酸粘多糖為主（HID+）。結果：硫酸黏液呈棕黑色，非硫酸黏液（包括涎酸黏液）呈青藍色。注意事項：1；先作AB染色（因高碘酸氧化后形成的羧基可與AB非特異性結合產生假陽性）高鐵雙胺—奧藍染色（HIDAB染色法）原理：、三氯化鐵為促染劑時，（高鐵雙胺法）。結果：中性黏液呈紅色，酸性黏液呈藍綠色應用：胃粘膜腸上皮化生的分類（不完全型腸化生和完全型腸化生）； 消化道腺上皮腫瘤的黏液分型（胃型和腸型）。當pH=1時，僅能與硫酸根結合；當pH=，能同時與涎酸根和硫酸根結合。結果：陽性物質成紫紅色，顆?；蚓|團塊狀，紅色深淺反應含糖原多少，胞核呈綠色。組織或細胞內存在的糖原或多糖類物質中的乙二醇基（CHOHCHOH）由于過碘酸的氧化，斷裂為兩個醛基（CHO），然后與雪夫(Schiff)試劑中的無色品紅結合，形成紫紅色染料而沉積于組織或細胞內。PAS染色(Periodic