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2025-05-19 02:43本頁面
【正文】 生原因 質(zhì)粒不穩(wěn)定常見的是分裂不穩(wěn)定 。 ? 質(zhì)粒不穩(wěn)定可分為兩種： – 分裂不穩(wěn)定 ：是指基因工程菌分裂時(shí)，出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒的子代菌。 原核生物基因表達(dá)的調(diào)控 乳糖代謝基因表達(dá)調(diào)控圖解： (沒有乳糖時(shí) ) Ｒ Ｐ Ｏ lacZ lacY lacA 調(diào)節(jié)基因 啟動子 操縱基因 結(jié)構(gòu)基因 RNA聚合酶 信使 RNA 轉(zhuǎn)錄 翻譯 阻抑物與 操縱基因 結(jié)合，結(jié) 構(gòu)基因轉(zhuǎn) 錄受阻． 阻抑物 原核生物基因表達(dá)的調(diào)控 乳糖代謝基因表達(dá)調(diào)控圖解： (有乳糖時(shí) ) Ｒ Ｐ Ｏ lacZ lacY lacA 調(diào)節(jié)基因 啟動子 操縱基因 結(jié)構(gòu)基因 信使 RNA 轉(zhuǎn)錄 翻譯 阻抑物與乳糖結(jié)合后構(gòu)象發(fā)生了改變， 因而不能與操縱基因結(jié)合，使得結(jié)構(gòu) 基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。而大多數(shù)屬 結(jié)構(gòu)基因 ，編碼了一些酶基因，通過在一個(gè)微生物中導(dǎo)入一些特定的外源酶基因，常常能給這個(gè)微生物的生物合成增加新的功能，達(dá)到合成新化合物的目的。 ? 因此，選擇一個(gè)適宜的高效表達(dá)系統(tǒng)，才能保證表達(dá)產(chǎn)物能夠高效表達(dá)。 S底物 P產(chǎn)物 B B2副產(chǎn)物 ? 從育種的角度考慮， 最為重要的是基因的高效表達(dá)。 基因工程菌操作程序 原理和方法 ? 在一個(gè)微生物菌種的初級代謝和次級代謝生物合成途徑中，常常有少則幾個(gè)多至幾十個(gè)基因參與，其中一些編碼了限速步驟的酶，這些所謂的關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的多少直接與生物合成的速率有關(guān)。 ? 人們能在分子水平上對微生物的初級代謝和次級代謝生物合成中所涉及的各種基因進(jìn)行深入的研究并進(jìn)行定向改造 ， 從而大大推動了菌種改良的進(jìn)程 。 基因工程的別名 基因拼接技術(shù)或 DNA重組技術(shù) 操作環(huán)境 生物體外 操作對象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本過程 剪切 → 拼接 → 導(dǎo)入 → 表達(dá) 結(jié)果 人類需要的基因產(chǎn)物 ? 1973年科恩 (Cohen,S.)等人進(jìn)一步將酶切后的外源DNA 片段與質(zhì)粒 DNA鏈接起來 ,構(gòu)成一個(gè)重組質(zhì)粒(rebinant plasmid),并將這個(gè)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌細(xì)胞 。 （二）基因工程育種 基因工程又叫做基因拼接技術(shù)或 DNA重組技術(shù)。 ◆ 方法： 讓變異處理后細(xì)胞在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)幾小時(shí)，以讓細(xì)胞的遺傳物質(zhì)復(fù)制，讓細(xì)胞繁殖幾代，以得到純的變異細(xì)胞。 誘變處理后的后培養(yǎng) 表型遲延現(xiàn)象 生理性 分離性 ? 遺傳物質(zhì)經(jīng)誘變處理后發(fā)生的突變，必須經(jīng)復(fù)制才能表現(xiàn)出來。 而用電離輻射進(jìn)行工作時(shí) ， 設(shè)備費(fèi)用大 ， 并要注意安全性 。 A G T C 轉(zhuǎn)換 顛換 圖 2 1 1 轉(zhuǎn)換與顛換 處 理 方 法 單一誘變劑處理 復(fù)合處理 1）兩種或多種誘變劑先后使用 2）同一誘變劑重復(fù)處理 3）兩種或多種誘變劑同時(shí)使用 菌種 單獨(dú)處理 誘變劑 突變率（ %） 復(fù)合處理 誘變劑 突變率（ %） 土曲霉 紫外線 X射線 紫外線 +X射線 黃曲霉 氮芥（ %） 紫外線 不明顯 氮芥 +紫外線 鏈霉菌 紫外線 ?射線 紫外線 +?射線 金色鏈霉菌 二乙烯三胺 硫酸二乙酯 紫外線 二乙烯三胺 +紫外線 硫酸二乙酯 +紫外線 誘變劑的復(fù)合處理及其協(xié)同效應(yīng) 使用 化學(xué)誘變劑 的優(yōu)缺點(diǎn)： 大多數(shù)情況下 ， 就突變數(shù)量而言 ， 要比電離輻射更有效 。 ? 紫外線誘發(fā) 了各種各樣的突變，但它太弱，對放線菌不太有用。 ? 甲基磺酸乙酯誘發(fā) GC→ AT轉(zhuǎn)換突變。 誘變劑專一性 ? 誘變劑誘導(dǎo)的堿基對取代的專一性已在大腸桿菌中進(jìn)行了廣泛的研究。 ? 劑量似乎也不宜過低，因?yàn)樵谑褂酶邉┝空T變時(shí)，除個(gè)別核被誘發(fā)變異外，還可以使其它的核破壞致死，最終能形成較純的變異菌落；另外，高劑量可能引起遺傳物質(zhì)的巨大損傷，產(chǎn)生回復(fù)突變少，促使變異后菌株的穩(wěn)定。 ? 對一般微生物而言，誘變率往往隨誘變劑劑量的增高而增高，但達(dá)到一定程度后，再提高劑量，反而會使誘變率下降。 但它可能影響鄰近基因的性能 。 4． 紫外線 仍十分有效 。 其中 亞硝基胍和甲基磺酸乙酯 常被稱為“ 超誘變劑 ” ， 甲基磺酸乙酯是毒性最小的誘變劑之一 。 誘變劑的選擇 1． 堿基類似物和羥胺 具有很高的特異性 ， 但很少使用 ， 回復(fù)突變率高
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