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2025-05-18 05:51本頁面
【正文】 lDNA： LE39 ED8654 酵母菌 哺乳動物細胞 CHO 畢赤酵母 啤酒酵母 。 將細菌接合因子或酵母菌染色體上的復制區(qū)、分配區(qū)、穩(wěn) 定區(qū)與質粒組裝在一起，即可構成染色體載體。按照基因組的結構，可將動植物病毒分成四大類： 單鏈 DNA病毒 雙鏈 DNA病毒 單鏈 RNA病毒 雙鏈 RNA病毒 RNA病毒在自我復制時大多存在相應的 DNA中間反應物， 這些中間體可作為載體進行常規(guī)的 DNA重組。而且重組分子越大，混濁 斑的混濁度亦越大 噬菌體或病毒 DNA 與動植物受體細胞相適應的載體一般選擇相應動植物的病 毒基因組 DNA。 這些包裝蛋白通常分為相互互補的兩部分：一部分缺少 E組份 ， 另一部分則缺少 D組份 。 當這種 lDNA進入 一般的 大腸桿菌菌株后 ， 不能合成有活性的頭部蛋白 ， 也就不能被包裝和裂解細菌 ， 這樣就可以阻止有害重組體的生物污染及擴散 。當外源基 因插入到 lacZ基因中，基因滅活，不能 合成藍色化合物；而空載體 lDNA則產 生藍色透明斑 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA lDNA載體的構建： 構建琥珀密碼子的突變體（無義突變） 琥珀型突變 （ sup)是指由 CAG（ Gln） 向 UAG（ stop） 的突變 。 根據切除的多少 ， 可將 lDNA分成兩大類載體： 插入型載體 取代型載體 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA lDNA載體的構建： 刪除重復的酶切位點 野生型的 lDNA鏈上有 5個 EcoRI位點和 7個 HindIII位點，不 利于重組操作，必須刪除至 1 2個 同時，為了便于各種來源的 DNA片段的克隆，還需要增加一 些單一的酶切位點 除了簡單的切割外，還需要采用定點突變技術去除或增添酶 位點 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA lDNA載體的構建： 加裝選擇標記 與質粒不同，野生型 lDNA上缺少合適的選擇標記，因此 加裝 選擇標記是 lDNA克隆載體構建的重要內容 lDNA克隆載體上的選擇標記主要有下列兩類： 免疫功能類標記 顏色反應類標記 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA lDNA載體的構建： 加裝選擇標記 imm434 imm434基因編碼一種阻止 l噬菌體 進入溶菌循環(huán)的阻遏物。 因此縮短野生型 lDNA的長度 ， 可以提高裝載量 。 人們可以根據需要改變 lDNA或宿主細胞的性質 ， 使噬菌體處于 溶菌狀態(tài) 。oriGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTT396 452E co RI S st I K p n I S m a I X b a I S a lI P st I S p h I Hi n d III質粒 重要的大腸桿菌質粒載體 pUC18 / 19： 正選擇標記 lacZ’ 的顯色原理 pUC18/19 Plac lacZ’ MCS b半乳糖苷酶的 a肽段 a b OHHHOHHO HH O HCH 2 OHONClBrClBrClBrONN5溴 4氯 3吲哚基 bD半乳糖苷 Xgal 質粒 重要的大腸桿菌質粒載體 pGEM3Z： 多拷貝 裝有兩個噬菌體的強啟動子 裝有多克隆位點（ MCS） 正選擇顏色標記 lacZ’ 用于外源基因
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