【正文】 使 DNARNA雜種雙 鏈解開 轉(zhuǎn)錄終止 ,釋放出 RNA Pol,ρ 子 和 RNA 野生型 突變型 核糖體結(jié)合到 mRNA上 核糖體阻礙 核糖體在突 了 ρ 因子的 變位點解離 附著和移動 ρ 因子附著 ρ 因子和 RNA 核糖體阻礙 聚合酶接觸 ρ 因子移動 轉(zhuǎn)錄繼續(xù) 轉(zhuǎn)錄提前 終止 第三節(jié) 真核生物的轉(zhuǎn)錄 真核生物的轉(zhuǎn)錄和原核轉(zhuǎn)錄的不同點： ? 原核只有一種 RNA聚合酶，而真核細(xì)胞有三種聚合酶； ? 啟動子的結(jié)構(gòu)特點有所不同，原核生物啟動子結(jié)構(gòu)類似，真核有三種不同的啟動子和有關(guān)的元件，分別對應(yīng)不同的 RNA聚合酶； ? 真核的轉(zhuǎn)錄有很多蛋白質(zhì)因子的介入。 ? 含有 IR序列，也能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)； ? C的含量多， G的含量少； ? 缺少 U串； *RNA聚合酶在此處暫停，若加入 ρ 因子， 則使轉(zhuǎn)錄停止在特定的終止位點。 ? ? 因子識別 RNA 上的 rut 位點，與之結(jié)合，然后向轉(zhuǎn)錄酶移動。 終止機(jī)制： * 終止作用發(fā)生在 RNA水平上 ,形成的頸環(huán)空間結(jié)構(gòu)阻止了轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行 ,同時 3′ 端上連續(xù) 6個 U使 RNA易解離 ,脫離 DNA模板 ,于是整個mRNA釋放出來 ,轉(zhuǎn)錄停止 。U … NNNNC G G G G C C 接著由于 UA 間氫鍵較弱，故而 RNA 自行脫離 DNA，從而終止轉(zhuǎn)錄。 自發(fā) 終止 ? 在 RNA 鏈中需要兩種序列元件： ? 位于 RNA 3? 末端的富含 U 的序列，即 U串； ? 靠近 RNA 3? 末端的自互補(bǔ)序列（即回文序列），可形成莖 環(huán)結(jié)構(gòu)。 ? 終止子（ terminator,t）： 在轉(zhuǎn)錄過程中，提供轉(zhuǎn)錄終止信號的序列，按終止方式不同分為 強(qiáng)終止子 和 弱終止子。 酶的后端移 酶的前端動 1 b p 3 5 b p 不移動 RN A 上加 1 N t酶的合端繼續(xù)移動 , 酶的前端每移動 1 b p RN A 就 不移動增加 1 N t , 目前已增 3 4 bp加了 8 N t . 酶的前端把連續(xù)地 向前移動數(shù)個 bp酶的合端繼續(xù)移 2 7 bp動 1 b p , RN A 已增加 9 N t 3 5 bp 圖 1 2 1 1 在延伸時 RN A p o l 的移動特點 三、轉(zhuǎn)錄的終止 ? 在開放復(fù)合體中， RNA 與 DNA 的氫鍵結(jié)合能夠防止轉(zhuǎn)錄酶脫離 DNA。 50 – 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 1 1 0 2 0 3 0 起始復(fù)合體 含 σ 因子 覆蓋 7 5 ~ 8 0 b p 開始的延伸復(fù)合體 丟失 σ 因子 核心酶已離開 – 35 ~ – 55 區(qū)域 普通的延伸復(fù)合體 在 1 5 ~ 2 0 b p 處形成 RN A 酶僅覆蓋 3 0 ~ 4 0 b p 圖 1 2 1 0 RN A 聚合酶起始轉(zhuǎn)錄（三） RNA的合成延伸 ? 在酶分子上有兩個核苷酸結(jié)合位點，一是 起始位點 ，一是 延伸位點 ； ? 當(dāng)兩個位點都與模板互補(bǔ)的核苷酸結(jié)合后， 第一磷酸二酯鍵才能形成； ? 隨著 RNA聚合酶沿著模板鏈的滑動，由 β 亞 基 催化合成 RNA鏈； ? 延伸方向為 5′ 3′ 。 ? 轉(zhuǎn)錄起始點 （ initiation site）： +1位點 44 ? Sextama Box 與 Pribnow Box 間距 17bp, 有利于 RNA Pol啟動 ? Sextama Box or Pribnow Box mut. 間距 趨近 于 17 bp， up mutation 間距 遠(yuǎn)離 于 17 bp， down mutation 17bp的 間距 較 17bp的 序列 對轉(zhuǎn)錄更為重要 Sextama Box and Pribnow Box mut. → 轉(zhuǎn)錄率下降 100X → 轉(zhuǎn)錄率下降 1000X * 35和 10都是大致位點 46 47 ?因子起著識別啟動子的作用； 在菌體細(xì)胞中，只有很少的 RNA聚合酶分子 （核心酶）呈游離狀態(tài)， 大部分與 DNA分子結(jié)合存在 。 ? 前者可能由于 TA的堆集能要小于 AT的堆積能，后者可能是由于堆集能降低和氫鍵的減少 。 10序列的堿基組成對轉(zhuǎn)錄的效率影響很大，發(fā)生此區(qū)域的某些突變會導(dǎo)致如下結(jié)果： ? 減效突變： TATAAT → AATAAT，轉(zhuǎn)錄效率會下降，即稱減效突變（ down mutation）。 ? 其功能是： (1) RNA pol緊密結(jié)合位點 。 ? 保守序列為 TATAAT，每個堿基的出現(xiàn)頻率不同，又可寫為 T80A95T45A60A50T96。 σ亞基識別 35序列 ， 為轉(zhuǎn)錄選擇模板 ， 很大程度上決定了啟動子的強(qiáng)度 ； （ 2） 35和 10序列的距離是穩(wěn)定的 ， 此與 RNA pol的結(jié)構(gòu)有關(guān) 。如 35和 10序列結(jié)構(gòu)； (3)位置和距離都比較恒定； (4)直接和多聚酶相結(jié)合； (5)位于基因的上游； (6)決定轉(zhuǎn)錄的啟動和方向； (7)常和鄰近基因共同組成操縱子 （ operon） ， 這也是原 核生物的特性 。 CAPcAMP 的弱結(jié)合位點（ 50 ~ 40） cooperative effect 提高 siteII 的結(jié)合效率 IR 70 site I 40 site II IR 50 Site II + CAPcAMP 復(fù)合體 促使 Sextama Box 附近 GC島區(qū)的