胰腺干細胞與胰島混合培養(yǎng)對其轉(zhuǎn)化率的影響-文庫吧資料
2025-05-08 05:25本頁面
【正文】 4℃ 預變性 3min， 93℃ 30s ， 56℃30 ｓ，72℃ 1min ，循環(huán) 30次， 72℃ 再延長 %瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。 6 胰腺導管干細胞的鑒定及其誘導分化率的比較 （ 1）ＲＴ ＰＣＲ檢測胰腺導管干細胞標志物基因的表達 Trizol提取誘導分化前的第２代胰腺導管干細胞總ＲＮＡ，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明將ＲＮＡ逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA。 相關檢測證實細胞胰腺導管干細胞相關標志物陽性后，改用含 10% FBS 、 bFGF(20ug/L）、EGF(20ug/L）以及 1%尼克酰胺的高糖 DMEM 培養(yǎng)基進行誘導。 3. 胰島細胞產(chǎn)量、純度和存活率計算以及生物學活性鑒定 ① DTZ染色法計算產(chǎn)量及純度；② AO/PI熒光染色計算存活率；③ 在培養(yǎng)的第 1～ 13天，測定培養(yǎng)液中的胰島素水平；④ 在胰島培養(yǎng)的第 5和 10天，分別測定低糖及高糖刺激下的培養(yǎng)物胰島素釋放水平，同時計算胰島刺激指數(shù)。收集23% ～ 20%界面和 20% ～ 11%界面的細胞懸液，并加入含10%FBS的４ ℃ Hank’s 液，４ ℃ 、 1000rpm離心，洗滌３遍。 2. 成年大鼠胰島的分離、純化與培養(yǎng) 取成年 wistar大鼠，麻醉后取上腹部肋緣下橫切口，絲線結(jié)扎膽總管入十二指腸處，膽總管內(nèi)插管，逆行向膽總管內(nèi)灌注 ，分離胰腺置于１０ｍＬ膠原酶 Ｖ溶液中（ ）， 38℃ 水浴靜止消化 17min取出后震蕩 15s， 60目篩網(wǎng)篩過后加入含 10%FBS的４ ℃ Hank’s液終止消化，４ ℃ ， 1000r/min離心 2min，洗滌３遍。 方法： 本實驗共分為胰腺導管干細胞單獨培養(yǎng)組（ Ⅰ 組），胰島單獨培
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