胰腺干細(xì)胞與胰島混合培養(yǎng)對其轉(zhuǎn)化率的影響(已修改)
2025-05-14 05:25 本頁面
【正文】 胰腺干細(xì)胞與胰島混合養(yǎng) 對其轉(zhuǎn)化率的影響 研究背景： 糖尿?。?diabets mellitus,ＤＭ）是危害人類健康的重要疾病之一，胰島移植已成為治愈 Ⅰ 型和部分 Ⅱ 型糖尿病的有效途徑。但胰島移植使胰島供體短缺的矛盾日漸突出，制約了其在糖尿病治療領(lǐng)域的臨床應(yīng)用。因此，尋找可替代的其它來源的胰島 β 細(xì)胞成為近年研究的熱點(diǎn)，而干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島細(xì)胞是最重要的研究方向之一如何誘導(dǎo)胰腺 導(dǎo)管 干細(xì)胞分化為可自身合成胰島素的 β 前體細(xì)胞，目前尚無穩(wěn)定的誘導(dǎo)方案目前，成體胰腺 導(dǎo)管 干細(xì)胞特性已得到證實(shí)，并已經(jīng)通過誘導(dǎo)獲得胰島樣結(jié)構(gòu) 假說：胰腺導(dǎo)管干細(xì)胞與胰島混合培養(yǎng)可提高胰腺導(dǎo)管干細(xì)胞向 β前體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，其作用與細(xì)胞角蛋白 19（ CK19）的表達(dá)密切相關(guān)。 目標(biāo)：研究胰腺導(dǎo)管干細(xì)胞與胰島混合培養(yǎng)對增加胎鼠胰腺干細(xì)胞向 β前體細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的作用及機(jī)制 研究內(nèi)容：分為胰腺導(dǎo)管干細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組（ Ⅰ 組），胰島單獨(dú)培養(yǎng)組（ Ⅱ 組）及干細(xì)胞－胰島混合培養(yǎng)組（ Ⅲ 組）。Ｖ型膠原酶消化大鼠胰腺獲得胰島后，使用 FICOLL400梯度離心法純化胰島；采用膠原酶消化法獲得胎鼠胰腺導(dǎo)管干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過 RTPCR及免疫組織化學(xué)染色的方法，檢測 CK1巢蛋白、胰高血糖素和胰島素等干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物。干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入純化的胰島進(jìn)行混合培養(yǎng)，通過觀察干細(xì)胞表達(dá)胰島素的陽性率評價(jià)其誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化率。 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑 25mL 細(xì)胞培養(yǎng)瓶、 24孔板 ,ficoll400。β 巰基乙醇、Ｖ型膠原酶、 HEPES、丫啶橙／碘化丙錠（ AO/PI）、 %胰酶 EDTA（ sigma）；RPMI1640培養(yǎng)基、低糖和高糖 DMEM 培養(yǎng)基、
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