【正文】 CHINA 64 ?S為背景吸收 切光器 吸收池 光源 檢測器 單色器 單色器 2. 雙波長分光度計 特點：可測多組份試樣 、 混濁試樣 、 而且可作成導數(shù)光譜 、不需參比液 、 克服了電源不穩(wěn)而產生的誤差 ， 靈敏度高 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 62 1. 單波長分光光度計 5 光源 單色器 吸收池 檢測器 顯示 優(yōu)點：結構簡單，操作方便；缺點：光源不穩(wěn)定會影響測定。 光電池（硒光電池）、光電管 和光電倍增管 ★信號處理與顯示裝置 放大信號并以適當?shù)姆绞街甘净蛴涗洝? 2）吸收池的光學面應垂直于光束方向?，F(xiàn)代儀器多用光柵作色散元件。 棱鏡 不同波長的光具有不同的折射率 光柵 光的衍射和干涉。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 59 ★ 單色器 單色器的用途就是把混合光變成單色光，由入射狹縫、準直鏡、色散元件、聚焦元件和出口狹縫組成。 ★對光源的要求 足夠光強、穩(wěn)定、連續(xù)輻射且強度隨波長變化小 ： 340～ 2500nm，多用在可見光區(qū)。 消除措施：試液濃縮富集 。 如酸度控制。 d. 非平行光 通過吸收池的非平行光影響光程 L，不同儀器測定 A值不同的主要原因。 c．散射光和反射光 渾濁溶液產生散射和反射，不能用空白消除影響 (被認為成吸光）， I變小，但 I0不變。 當 E1≠E 2時 A～ C 非線性，偏離比爾定律。 設 ?1是需要的光：當 E1＞ E2時，測得的 A值低，負誤差；反之，產生正誤差。 消除措施：濃度控制在上限以下 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 54 三、 偏離比耳定律的原因 (濃度過大不適合 ) 當 c mol （ 6） ε max越大表明該物質吸光能力越強，用光度法測定該物質靈敏度越高。 （ 2）溶劑不同，同一物質的 ?不同，所以應注明溶劑。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 50 LambertBeer 定律是均勻、非散射介質對光吸收的基本定律，只有對入射光是單色光才完全適用 。 λ 不變，則只與 b、 c有關。 ta III ??00IIT t?（ T為透光度） rta IIII ???0I a I t 參比 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 47 溶液對光透光度： b、 c及入射光 λ(波長 與 a有關） 等因素有關。 常將 M與某 L（ 顯色劑）生成具有電荷遷移的配合物，然后進行含量測定 。 SCN比Cl易給電子， FeSCN2+， 吸收波長長，在可見區(qū)， FeCl2+在紫外區(qū) 。 M(H2O)6M+(Cr3+、 Co2+) 型水合離子分別為藍色和桃紅色。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 41 （三） 無機化合物的吸收光譜 1. d— d躍遷和 f－ f 躍遷 過渡金屬離子未充滿的 d軌道，由于受配位場（或晶體場）的影響而發(fā)生分裂，當吸收光時可發(fā)生 d— d躍遷，吸收波長取決于分裂能的大小， L越強，分裂能越大，吸收波長越短。隨共軛增長吸收帶紅移 。 α ,β 不飽和醛酮會使 n→π ＊ 與 π→π ＊ 發(fā)生紅移 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 39 ③醛酮：有＞ C＝ O基因，產生 n→π ＊； n→σ ＊ ； π→π ＊ 三種躍遷。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 38 c．各類有機化合物的紫外吸收光譜 ①飽和化合物： σ→σ ＊ 躍遷， λmax 一般在 150nm； 當含有 n電子的原子取代時產生n→σ ＊ 躍遷，可使 λmax 增大，達到近紫外區(qū) (200~270nm)。 影響藍移因素： 1）溶劑效應 極性溶劑使 nπ* 躍遷發(fā)生藍移 2） pH值 pH值減小，苯胺的 π π* 吸收帶藍移 n— π 共軛參與少，使分子整體 π 共軛效應減少。 Note: 測 UVVis應注明溶劑 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 35 5)取代基 苯環(huán)或烯烴（吸電子基）上的 H被各種取代基取代，多發(fā)生紅移。 4） pH值 pH增大，苯酚 π π* 吸收帶發(fā)生紅移。 C=O雙鍵同 C=C雙鍵的共軛作用使 n→ ?*和 ?→ ?*躍遷的吸收峰都發(fā)生紅移 。 ?→ ?*躍遷吸收峰 發(fā)生紅移。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 32 紅移：使化合物的吸收波長向長波方向移動效應。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 30 生色團 （發(fā)色團）：能吸收外來輻射并引起 n→ ?*和 ?→ ?* 躍遷結構單元。 ε 不大，為100～ 300 能量 成鍵 成鍵 未成鍵 反鍵 反鍵 ? ? n ?* ?* ?→?* ?→ ? * n→?* n→ ? * 特點： n→ ?*所需能量在 200nm 接近。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 26 2. ?→ ?*躍遷 鍵類型：碳碳雙鍵、三鍵、共軛雙鍵等 特點：吸收強度大 單個飽和鍵吸收波長200nm，如乙烯為165nm。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 24 四 .有機化合物的吸收光譜 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 25 能量 成鍵 成鍵 未成鍵 反鍵 反鍵 ? ? n ?* ?* ?→?* ?→ ? * n→?* n→ ? * 1. ?→ ?*躍遷 鍵類型：飽和鍵。 ??在 λ max處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以 測定最靈敏 。 吸收曲線的討論： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 23 ?③吸收曲線可以提供物質的結構信息，并作為物質 定性分析的依據(jù)之一 (分子內部能級分布狀況 )。吸光度最大處對應的波長稱為 最大吸收波長 λ max ?②不同濃度的同一種物質，其吸收曲線形狀相似 λ max不變。 它反映物質對各種不同波長光的吸收情況。 因此，人眼可以通過比較溶液顏色的深淺來確定溶液中吸光物質的濃度大小。 例： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 19 溶液顏色的深淺，決定于溶液吸收光的量，即取決于吸光物質濃度的高低。 ?人眼可以比作是定性分析可見光區(qū)分光光度計。 M＋ hν M* 。 ?若反射所有顏色的光則呈現(xiàn)白色 ?若透過所以顏色的光，則為無色 。 白光 紅 650～ 750 紫 400～ 450 藍 450～ 480 綠藍 480～ 500 綠 500～ 560 黃綠 560～ 580 黃 580～ 600 橙 600～ 650 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 16 ?物質呈現(xiàn)的顏色與吸收光顏色是互補色關系。反之，這些不同顏色的光按一定的強度比混合后便又形成白光。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 13 電子能級躍遷伴隨分子振動和轉動能級的躍遷，因此得到光譜是帶狀光譜。s 頻率， Hz