【正文】 ..................................................................................... 19 . 所用儀器和物料 ........................................................................................................................ 19 . 測試工作菌種 ............................................................................................................................ 20 . 實驗程序 .................................................................................................................................... 20 6. 接受標(biāo)準(zhǔn) .................................................................................................................................... 22 . 消毒效力接受標(biāo)準(zhǔn)： ................................................................................................................ 22 . 中和效力控制及其接受標(biāo)準(zhǔn)： ................................................................................................ 22 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 19 / 23 目的 PURPOSE 驗證惠氏蘇州工廠目前使用的幾種消毒劑 Process LpHse: 酸性、 Process VespheneⅡ se:堿性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液， 在不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面等不同材質(zhì)上的消毒效力，同時驗證消毒 劑的使用有效期。 ? 75%乙醇試驗操作同 表面試驗。 . 在消毒劑儲存的第 0 天、第 6 天、第 7 天、第 8 天、第 28 天、第 30 天、第 32 天取樣試驗。操作與儲存執(zhí)行《清潔劑和消毒劑管理》。 . 可接受標(biāo)準(zhǔn) 消毒后： A 級： ?1CFU/25cm2 C 級： ?25CFU/25cm2 D 級： ?50CFU/25cm2 . 現(xiàn)場考察試驗記錄見附錄 5 5. 消毒劑有效期確認(rèn)試驗 . 試驗 目的 通過該試驗，確定消毒劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，并且消毒效力不會變化，符合要求。取樣操作及檢驗執(zhí)行《表面微生物檢驗》。 . 清潔消毒完畢 15 分鐘后，現(xiàn)場 QA 對清潔消毒后的潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。取樣操作及檢驗執(zhí)行《表面微生物檢驗》。 . 表面試驗法記錄見附錄 5 . 現(xiàn)場考察試驗 . 消毒前對潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。 . 培養(yǎng) 將取樣 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的接觸碟倒置于 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計數(shù)； 取樣 白色念珠菌的接觸碟倒置于 23～ 28℃ 培養(yǎng) 5 天計數(shù)計數(shù)。 . ? 陰性對照： 用接觸碟在 已滅菌的載片上（未染菌片的載） 按壓 取樣，操作同上。 接觸碟取樣方法：打開接觸碟蓋，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸 10 秒左右，在蓋上跌蓋。作用結(jié)束后，用接觸碟取樣（接觸碟規(guī)格： ?55mm，取樣面積為 25m2） 。 菌液滴染 操作同 染菌不銹鋼載片制備 。 （ 2） 染菌 玻璃 載片制備 因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻 璃 載片 進(jìn)行 染菌 試驗。滴染菌液后，載片置超凈工作臺晾干后備用。 . 工作菌液制備 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 12 / 23 工作菌液的制備方法、濃度及驗證同步計數(shù)操作同 。 . 菌種選擇 由于 75%乙醇、 %新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。 . 結(jié)果計算 計算試驗組和對照組的活菌濃度 （ CFU/ml），并換算為對數(shù)值（ N），并按下式計算殺滅對數(shù)值 : 殺滅對數(shù)值 (KL)＝對照組平均活菌濃度的對數(shù)值（ NO）－試驗組活菌濃度對數(shù)值（ NX） . 可接受標(biāo)準(zhǔn) 殺滅對數(shù)值 (KL)應(yīng)不低于 3~5 個對數(shù)單位。每管平行制備 2 皿。 . 中和作用 10min 后，吸取 加入標(biāo)明 101 的試管中，混勻后吸取 加入標(biāo)明 102 試管中（對照組以此類推，對照組直至 104）。 . 吸取工作菌液 加入標(biāo)明消毒劑的試管中，對照組加入標(biāo)明稀釋液的試管中，迅速混勻，并開始計時。 . 向個試管加入 相應(yīng)的試劑，標(biāo)明 10 10 10 104。對照組分 1 組，并由左向右逐管標(biāo)明 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 11 / 23 稀釋液、中和劑、 10 10 10 104。 . 將菌液制備成 1108~5108CFU/ml 的工作菌液，菌液的制備及計數(shù)同 。 . 由于 %的新潔爾滅溶液 、 %新潔爾 滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。將配置好的消毒劑置 20℃ 177。 . 定量懸浮試驗 . 試驗?zāi)康? 由于 %的新潔爾滅溶液、 %新潔爾滅溶液、 60mg/L 二氧化氯溶液、 %醋酸洗必泰溶液、 %醋酸洗必泰溶液是通過浸泡或液封消毒， 通過定量懸浮試驗，確定 其 消毒效力是否符合要求。否則，說明試劑有污染，應(yīng)重新進(jìn)行試驗。 ? 第 2 組菌落數(shù)比第 1 組菌落數(shù)多，但比第 5 組菌落數(shù)少，且符合下表要求 第 1 組平板平均菌落數(shù) 第 2 組平板平均菌落數(shù) 0 〉 5 x 〉 (x+5) Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 10 / 23 ? 第 5 組有相似菌落數(shù)生長，其每組間菌落數(shù)誤差率不超過 15%。 . 結(jié)果判斷 試驗結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計數(shù)。 ? 第 5 組 目的：作菌落數(shù)對照用 操作： 取稀釋液 +工作菌液 ， 混勻作用 10min，取混合液 l+稀釋液 ，混勻作用 10min后，用稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 10 103。取相應(yīng)稀釋級 注皿，各稀釋級平行制備 2 皿。 ? 第 4 組 目的：觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和殘留消毒劑對 試驗菌的生長繁殖是否有影響。取相應(yīng)稀釋級 注皿，各稀釋級平行制備 2 皿。 ? 第 3 組 目的：觀察中和劑是否有抑菌性 操作： 取中和劑 +工作菌液 ，混勻作用 10min，取混合液 l+稀釋液 ，混勻作用 10min取 工作 菌液加入下列溶液中 10min 取混合液 A 加入下列溶液 10min B的稀釋級溶液 平板計數(shù)（ 2 皿 /組 ） 1 消毒劑 稀釋液 混合液 B、 101 2 消毒劑 中和劑 混合液 B、 101 3 中和劑 稀釋液 10 103 4