醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)實驗-文庫吧資料
2025-04-10 23:15本頁面
【正文】 分為幾類？細(xì)菌在各種培養(yǎng)基上有什么生長現(xiàn)象？如何正確理解消毒、滅菌和無菌與防腐概念？常用的物理滅菌方法有哪些，哪種效果最好，為什么？ 實驗三 腸道致病性細(xì)菌的分離與鑒定一、實驗?zāi)康恼莆漳c道致病菌的分離鑒定程序；SS培養(yǎng)基及雙糖管的原理、接種方法和結(jié)果判定。停止加熱后，等壓力逐漸自行下降到零時，慢慢開放排氣閥，消除余氣，開蓋取物。凡能耐熱和耐潮濕的物品如培養(yǎng)基、生理鹽水、紗布、玻璃器材等都可以用此法滅菌。鍋蓋密閉旋緊后由鍋底加熱，因蒸氣不能外溢，可使鍋內(nèi)壓力逐漸增高，從而提高了鍋內(nèi)水的沸點和蒸氣的溫度。（五）示教細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)油鏡下觀察：肺炎鏈球菌莢膜染色片、變形桿菌鞭毛染色片、破傷風(fēng)梭菌芽胞染色片。觀察并測量抑菌圈的大小，比較各種藥物對試驗菌的抗菌作用（或菌株對藥物的敏感性）。（2）、方法：將大腸桿菌培養(yǎng)物用接種環(huán)均勻涂布于普通平板表面，稍干，以無菌鑷子吸取有定量抗生素的無菌濾紙片（直徑6mm），平鋪于上述已種細(xì)菌的平板表面，一個平板可以放3～4塊含不同藥物的濾紙片，然后，置37℃培養(yǎng)。蓋上蓋，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，觀察平板表面細(xì)菌生長的情況。紫外線殺菌試驗用接種環(huán)沾取大腸桿菌在瓊脂平板培養(yǎng)基表面來回密密涂滿整個平板。咽喉部細(xì)菌檢查 用無菌棉拭子在咽喉部涂抹后，涂在血平板上，37℃培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。（四）微生物的分布檢測（講解并指導(dǎo)學(xué)生操作）空氣中細(xì)菌的檢查（采用沉降法） 取無菌普通平板1只，置一處，啟蓋約15分，再蓋上，37℃培養(yǎng)24h，取出觀察有無細(xì)菌生長。在半固體培養(yǎng)基上的生長情況 有鞭毛的細(xì)菌，由于能運動，在半固體培養(yǎng)基內(nèi)沿穿刺線彌漫性長，使穿刺線變的模糊不清，出現(xiàn)試管刷現(xiàn)象。在固體培養(yǎng)基上的生長情況（1）菌落：將細(xì)菌劃線接種在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)18~24小時培養(yǎng)，由單個細(xì)菌繁殖成的肉眼可見的細(xì)菌集團。（3）沉淀生長：液體清晰，細(xì)菌生長在管底，形成沉淀。（2）混濁生長：液體均勻混濁，或有少量沉淀。在液體培養(yǎng)基上生長情況（1）表面生長：液體清晰，細(xì)菌生長在液面形成菌膜。比較大腸埃希菌和痢疾桿菌固體培養(yǎng)基中的生長情況。塞上硅膠塞，接種針重新滅菌。比較金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌等的菌落特點。重復(fù)上述操作，劃完整個平板。接種環(huán)經(jīng)滅菌、冷卻后，通過第一次劃線區(qū)2～3次。②分區(qū)劃線法：右手將接種環(huán)按無菌操作法沾取少許培養(yǎng)物（金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌等），左手拿平板略打開，將標(biāo)本涂于平板表面的一側(cè)邊緣，運用腕力連續(xù)劃線（要密但不要重疊，不要劃破培養(yǎng)基），劃線范圍約占平板面積的1／4。角，從平板的另一端開始平行密集劃線，直至劃滿平板的剩余部分。接種環(huán)在火焰上滅菌，冷卻后，沾取菌種，先在平板的一端涂開，然后由此開始向下平行密集劃線，約占平板的一半。（2）平板劃線接種法：本法要求通過劃線將混雜的細(xì)菌在平板上分散開來，并在平板上長成菌落，以達到分離培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)物的目的。② 按無菌操作法將沾有細(xì)菌的接種環(huán)在傾斜的接近液面的管壁上輕輕涂抹研勻，試管直立使沾附在管壁上的細(xì)菌混人液體即可。操作步驟：細(xì)菌的接種方法因各種培養(yǎng)基的不同而異。將預(yù)先制備好的普通固體培養(yǎng)基100ml加熱融化，待冷卻到50℃左右時，用無菌操作法加入8～10ml的脫纖維兔血或羊血，混勻后倒入無菌平皿或試管中，冷卻后即為血平板或血瓊脂斜面培養(yǎng)基。②半固體培養(yǎng)基：％～％，如上炮制，滅菌后取出直立冷卻，即為半固體培養(yǎng)基。再加人蛋白胨、氯化鈉，加熱使之完全溶解，～，煮沸10分鐘，過濾，分裝，高壓滅菌后備用。②方法：取新鮮牛肉50g去脂肪、筋膜，絞碎。培養(yǎng)基按其物理性狀可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基三種。 了解常用人工培養(yǎng)基的制備方法、細(xì)菌在自然界和人體的分布特點。四、思考題試比較革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的特征？實驗二 理化因素對微生物的影響一、實驗?zāi)康恼莆占?xì)菌常用的接種方法和在不同培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象，細(xì)菌的三種特殊結(jié)構(gòu)。 革蘭氏染色結(jié)果（1）、用紅藍(lán)鉛繪制出鏡下所見兩種細(xì)菌的形態(tài)（注意大小、形態(tài)、排列和染色性）。（三）細(xì)菌的基本形態(tài)（示教）油鏡下觀察：球菌（葡萄球菌）革蘭染色片、桿菌（大腸桿菌）革蘭染色片、弧菌（霍亂弧菌）革蘭染色片，注意觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列和染色。染色完畢，用吸水紙將標(biāo)本片吸干，玻片上滴加香柏油，油鏡觀察。③脫色：在玻片上加95％乙醇2～3滴，并輕輕轉(zhuǎn)動玻片數(shù)秒鐘，使玻片傾斜讓乙醇流去，如此重復(fù)數(shù)次，直至流下的乙醇幾乎無色或稍呈淡紫色，流
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