[工學]細胞工程實驗總結-文庫吧資料
2025-03-29 01:34本頁面
【正文】 不到有空泡，細胞邊緣清楚，培養(yǎng)基內(nèi)看不到懸浮的細胞和碎片，培養(yǎng)液清澈透明，而當細胞內(nèi)顆粒較多，透明差，空泡多時，表明生長較差。實際上，一種細胞在培養(yǎng)中的形態(tài)并不是永恒不變的，它隨營養(yǎng)、pH、生長周期而改變，但在比較穩(wěn)定的條件下形態(tài)基本是一致的。臺盼蘭染色原理：由于培養(yǎng)基內(nèi)有pH指示劑的存在，因此它的顏色往往可以間接地表明細胞的生長狀態(tài)。以確定死、活細胞的比例。C．如細胞已生長，則要觀察細胞的形態(tài)特征并判斷其所處的生長階段。主要觀察培養(yǎng)液顏色的變化及混濁度。在觀察時，最經(jīng)常使用的是20X物鏡（繪圖）。打開倒置鏡光源，通過雙筒目鏡將視野調到合適的亮度。 (一)培養(yǎng)細胞的形態(tài)觀察將細胞培養(yǎng)瓶從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出，注意觀察細胞培養(yǎng)液的顏色和清澈度。原代培養(yǎng)時如何從組織分離細胞?收集到的細胞懸液經(jīng)100目過濾篩過濾，1200轉離心5 min；離心管用酒精擦拭后拿進超凈臺，擰開蓋子后，管口過火焰兩次，倒出上清，保存管口向下蘸一下干的酒精棉球，再保存管口向下過火焰兩次；細胞沉淀用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液重新懸??；繪圖展示自己的實驗結果、談談你的實驗感想。取910日齡的雞胚，用酒精消毒，在超凈工作臺內(nèi)，小心取出雞胚，放在無菌培養(yǎng)皿中，除去頭尾、四肢及內(nèi)臟；胚體用含雙抗PBS沖洗23次，切成12mm3的小塊，然后轉入容積適量大小的離心管；按每個雞胚加入大約5mL的胰酶消化液，在室溫（或37℃）下消化10 min，吸管（或槍頭）不停吹打；加入含小牛血清培養(yǎng)液終止消化，收集細胞懸液，沒有消化完全的組織塊可再消化一次；收集到的細胞懸液經(jīng)100目過濾篩過濾，1200轉離心5 min；離心管用酒精擦拭后拿進超凈臺，擰開蓋子后，管口過火焰兩次，倒出上清，保存管口向下蘸一下干的酒精棉球，再保存管口向下過火焰兩次；細胞沉淀用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液重新懸?。灰?105個/（大約2030mL細胞液/），觀察細胞形態(tài)（繪圖），將瓶蓋微松，于37℃、5% CO2濃度、飽和濕度條件下培養(yǎng)。酒精擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。分鐘后，才開始實驗操作。實驗進行前，準備好相關器材，無菌室及超凈工作臺以紫外燈照射滅菌3060玻璃瓶、移液管要封閉包扎使用端，標記手持端。實驗器材準備的數(shù)量要大于實際使用數(shù)，瓶蓋要大于瓶數(shù)。注意檢測標簽是否脫落。在標簽處包扎好。(9) 建議用1N HCl或1N NaOH來調節(jié)培養(yǎng)基的pH。(7)在過濾前。(5) 待培養(yǎng)基完全溶解后再加入碳酸氫鈉。(3) 溶解干粉培養(yǎng)基時先加入終體積90%－95%的培養(yǎng)用水，添加劑加完后再定容。培養(yǎng)基過濾器過濾除菌注意事項：(1) 細胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水或超純水，醫(yī)藥生產(chǎn)上一般為注射用水。來蘇兒水不能用于皮膚消毒。另外濾器包裝時，螺釘不要擰得太緊待高壓滅菌之后，再擰緊使用。過濾時壓力不宜過。過濾前可用壓進空氣的辦法測試過濾器是否完好，去除壓力后針筒會反彈即為完好無損。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻，使溫度與成分均一，待全部溶解后再分裝。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾。血清在凍入低溫冰箱前，不要裝得太滿，必須預留一定體積空間，（其他溶液凍存也是如此）。需要長期保存的血清必須儲存于20℃—80℃ 低溫冰箱中。高壓滅菌后器皿務必晾干或烘干。器皿烤完后，待溫度降至100℃之下才能開烤箱門。干熱滅菌時，應在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免發(fā)生意外。清洗塑料制品時要用棉花或柔軟紗布擦洗。簡單介紹動物細胞培養(yǎng)實驗室常用
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