【正文】 成。 交聯(lián)法 利用 雙功能或多功能試劑 在 酶分子間或酶分子與 惰性蛋白間、或酶分子與載體間進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)以共價(jià)鍵 制備固定化酶。 共價(jià)偶聯(lián)法 這是借助 共價(jià)鍵 將酶的活性 非必需側(cè)鏈基團(tuán) 和載體的 功能基團(tuán) 進(jìn)行偶聯(lián)以制備固定化酶的方法 。 最常用的交換劑有 CM（ 羧甲基 ） －纖維素 、DEAE（ 二乙基氨基乙基 ） －纖維素 、 DEAE－葡聚糖凝膠 等 。 物理吸附 是通過(guò) 氫鍵 、 疏水鍵和 π－電子親和力 等物理作用力將酶固定于 不溶性載體 的方法 。 通常采用的固定化方法可大體概括為四種類型：吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法。 （ C＝ ～ ， 在 5mol／ L HCl中 ） 。 〔 α〕 25D 為 +18176。 ② L丙氨酸（ LAlanine，簡(jiǎn)稱 LAla）的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) LAla存在于所有蛋白質(zhì)分子中 ,為 中性氨基酸 。 （ C＝ ～ ，在水中）， 〔 α〕 25D為 +176。在堿性溶液中為 左旋性 ，在酸性溶液中為 右旋性 。 L天冬氨酸及 L丙氨酸的制備 （ 1） L天冬氨酸及 L丙氨酸的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) ① L－天冬氨酸 （ LAspartic acid， Asp） 的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) LAsp存在于所有蛋白質(zhì)分子中 ， 含 兩個(gè)羧基 和一個(gè)氨基 ， 為 酸性 氨基酸 ， 分子式為 C4H7NO4， 分子量為 ， 結(jié)構(gòu)式為： LAsp的化學(xué)名稱為 α氨基丁二酸或氨基琥珀酸，純品為白色 菱形葉片狀結(jié)晶 ， 等電點(diǎn)為 ，熔點(diǎn)為 269～ 271℃ 。 （ 二 ） 酶轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)的氨基酸品種及工藝 目前醫(yī)藥工業(yè)中 ， 用酶工程法生產(chǎn)的氨基酸已有 十多種 。 酶工程技術(shù) 工藝簡(jiǎn)單， 產(chǎn)物濃度高 ， 轉(zhuǎn)化率及生產(chǎn)效率 較高，副產(chǎn)物少。PH= (串聯(lián) ) ⑤ 濃縮結(jié)晶：收集 PH=～ （氨水洗脫） 三 、 酶轉(zhuǎn)化法 （ 一 ） 基本原理及過(guò)程 酶轉(zhuǎn)化法 亦稱為 酶工程技術(shù) ， 實(shí)際上是在 特定酶的作用下使 某些化合物轉(zhuǎn)化 成 相應(yīng)氨基酸 的技術(shù) 。在 5m3發(fā)酵罐中投入培養(yǎng)液 3噸，在 105Pa壓力下，加熱至 118～ 120℃ 滅菌 30min，立即通入冰鹽水冷卻至 30℃ ，按 10％（ v／ v）比例接種，以 1:（ v／ v）通氣量于 30℃ 發(fā)酵 42～ 51h，攪拌速度為 180轉(zhuǎn)／ min。 如此逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng) 。 1000ml三角瓶中種子培養(yǎng)基裝量 200ml， 接種一環(huán)斜面培養(yǎng)菌種 ， 30℃ 振搖 （ 沖程 ， 頻率 108次／ min） ， 培養(yǎng) 16h。 斜面培養(yǎng)基成分 （ ％ ） 為 : 葡萄糖 ，牛肉膏 ，蛋白胨 ，瓊脂 ， 。 分子量為 ，結(jié)構(gòu)為： LLys自乙醇水溶液中得 針狀結(jié)晶 ， 其 鹽酸鹽為單斜晶系白色粉末 ， 無(wú)臭 、 味苦 ， 熔點(diǎn) 263～ 264℃ ， 易溶于水 ， 幾乎不溶于乙醇和乙醚 。 （ 5） 作用與用途 LIle為必需氨基酸 ， 是復(fù)方氨基酸輸液的重要成份之一 。 （ 4） 檢驗(yàn) 應(yīng)為菱形葉片狀或片狀晶體 ， 含量應(yīng)為 ％ ～ ％ ， 干燥失重不超過(guò) ％ ， 熾灼殘?jiān)淮笥诤繙y(cè)定與 L亮氨酸的規(guī)定相同 。 濾取沉淀 ， 用 80L， 去離子水加熱至 80℃ 攪拌溶解 ， 加適量 氯化鈉 和 1%（ w／ v） 活性炭 ， 70℃ 攪拌脫色 lh過(guò)濾 ， 濾液減壓濃縮至適當(dāng)濃度 ， 用氨水調(diào)， 5℃ 放置結(jié)晶過(guò)夜 。 濾除活性炭 ， 濾液減壓濃縮至適當(dāng)體積 ， 用 2mol／ L氨水調(diào) ， 5℃ 沉淀過(guò)夜 ,過(guò)濾抽千 ， 105℃ 烘干得： L異亮氨酸半成品 。 如此重復(fù)三次 。 ④ 離子交換 、 吸附分離 上述濾液每分鐘以樹脂量 ％ 的流速進(jìn) H十 型 732離子交換柱 （ Φ40 100cm） ， 以 100L去離子水洗柱 ，再以 60℃ 、 ／ L氨水按 3L/min的流速進(jìn)行洗脫 ，分部收集洗脫液 。L）通氣量發(fā)酵 60h，在 24～ 50h之間不斷補(bǔ)加尿素至 ，氨水至 。 在 5m3發(fā)酵罐中添加 3噸發(fā)酵培養(yǎng)液，加熱至 118～120℃ ，維持在 105Pa壓力，滅菌 30min，立即通冰鹽水冷卻至 25℃ 。 二級(jí)種子培養(yǎng)：接種量 ％ ， 培養(yǎng) 8h， 如此逐級(jí) 放大培養(yǎng)得足夠量菌種 。 二級(jí)種子培養(yǎng)基另加菜籽油 ，其余同一級(jí)種子培養(yǎng)基。 L異亮氨酸 （ LIsoleucine， LIle） 的制備 （ 1） L異亮氨酸的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) ： LIle存在子所有蛋白質(zhì)中 ， 為人體 必需氨基酸之一 ， 分子式為 C6H13NO2，分子量為 ， 結(jié)構(gòu)式為： LIle在乙醇中形成菱形葉片狀或片狀晶體 ， 分解點(diǎn)為 285～ 286℃ ， LIle溶于熱醋酸 ， 在 20℃ 乙醇中溶解度為 ， 在 25℃ 水中為 ， 在 75℃ 水中為 ，不 溶于乙醚 。 目前 絕大部分氨基酸 皆可通過(guò)發(fā)酵法生產(chǎn) ， 其缺點(diǎn)是產(chǎn)物濃度低 ， 設(shè)備投資大 ， 工藝管理要求嚴(yán)格 ， 生產(chǎn)周期長(zhǎng) ， 成本高 。 發(fā)酵結(jié)束 ， 除去菌體 ， 清液用于 提取 、 分離純化和精制 有關(guān)氨基酸 ， 其分離純化 、 精制方法及過(guò)程與水解法相同 。 如用北京棒狀桿菌和鈍齒棒狀桿菌 原生質(zhì)體融合形成的雜種，其中 70％雜種細(xì)胞 產(chǎn)生兩親菌株所產(chǎn)生的 氨基酸 。 發(fā)酵法的基本過(guò)程 ⑴ 發(fā)酵法生產(chǎn)氨基酸的基本過(guò)程包括 培養(yǎng)基配制 與滅菌處理 ， 菌種誘變與選育 ， 菌種培養(yǎng) 、 滅菌 及 接種發(fā)酵 ，產(chǎn)品提取及分離純化等步驟。 ★ 次生氨基酸： 在微生物作用下 ， 以 初生氨基酸為前體轉(zhuǎn)化成的其它氨基酸 。 工業(yè)上 ， 發(fā)酵 實(shí)質(zhì)上是利用微生物細(xì)胞中酶的作用 ，將培養(yǎng)基中有機(jī)物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞或其它有機(jī)物的過(guò)程 。 含量測(cè)定 （ 5） 作用與用途 L亮氨酸為人體必需氨基酸之一 ，是各種氨基酸輸液的原料之一 。過(guò)濾收集結(jié)晶，用少量水洗滌、抽干，70～ 80℃ 烘干得 L亮氨酸成品。 沉淀用 2倍體積 （ w／ v） 去離子水?dāng)嚢柘礈靸纱?， 過(guò)濾得亮氨酸粗品 。 濾取沉淀并用 2倍體積 （ w／ v） 去離子水?dāng)嚢柘礈靸纱?， 抽濾壓干得亮氨酸磺酸鹽 。 ② 吸附 、 脫色 上述濾液稀釋 1倍后 ， 以每分鐘 流速流進(jìn)顆?；钚蕴恐?（ 30 180cm） 至流出液出現(xiàn)苯丙氨酸 為止 ， 用去離子水以同樣流速洗至流出液 ， 穿柱液與洗滌液合并 。 （ 2） 工藝路線： （ 3） 工藝過(guò)程： ① 水解 、 趕酸 取 6mol／ L HC1 500L于 1噸水解罐中 ，投入 100kg動(dòng)物血粉 ， 110～ 120℃ 回流水解 24h后 ， 于70～ 80℃ 減壓濃縮至糊狀 。 L亮氨酸為人體必需氨基酸之一 ，化學(xué)名稱為 2氨基 4甲基戊酸或 2氨基異己酸，分子式： C6H13NO2,分子量： ,結(jié)構(gòu)式： LLeu自 水及乙醇 中得白色 片狀結(jié)晶 ， pI為 ，熔點(diǎn)為 293℃ ， 在 25℃ 水 中溶解度為 ， 乙醇中為。 臨床上用于治療輻射損傷 、 重金屬中毒 、 慢性肝炎 、 牛皮癬及病后或產(chǎn)后繼發(fā)性脫發(fā) 。 （ 4） 檢驗(yàn) 應(yīng)為六角形或六角柱形白色結(jié)晶 ， 含量在％ 以上 ， 干燥失重小于 ％ ， 熾灼殘?jiān)∮?％ ， 氯化物小于 ％ ， 鐵鹽小于 ％ ， 重金屬小于 20ppm。調(diào)濾液至，靜置結(jié)晶，吸出上清液后，底部沉淀經(jīng)離心甩干得胱氨酸粗品（ Ⅱ ）。 ② 中和 直至 ， 靜置 36h， 滌綸布濾取沉淀 ， 離心甩干得 L胱氨酸粗品 。 可被 還原為 L半胱氨酸 。 溶于無(wú)機(jī)酸及無(wú)機(jī)堿 ， 在 熱堿液中可被分解 。 。 L胱氨酸 （ LCystine， LCys2） 的制備 （ 1） L胱氨酸的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) L胱氨酸存在于所有蛋白質(zhì)分子中 ， 尤以 毛 、 發(fā)及蹄甲等角蛋白 中含量最多 。 （ 二 ） 用水解法生產(chǎn)氨基酸的品種及工藝 絕大多數(shù)氨基酸均可采用 酸水解法 生產(chǎn) ， 但目前由于發(fā)酵方法及酶工程技術(shù)的迅速發(fā)展 ， 僅有幾種氨基酸仍采用酸水解法生產(chǎn) 。 溶解度與結(jié)晶技術(shù)相結(jié)合 的方法精制氨基酸 。 氨基酸的精制方法 分離出的特定氨基酸中常含有少量其它雜質(zhì) ， 需進(jìn)行精制 ， 常用的有 結(jié)晶和重結(jié)晶技術(shù) ， 也可采用 溶解度法或結(jié)晶與溶解度法相結(jié)合的技術(shù) 。 （ 4）離子交換法 是利用離子交換劑對(duì)不同氨基酸吸附能力的差異進(jìn)行分離的方法。 （ 3） 吸附法 是利用吸附劑對(duì)不同氨基酸吸附力的差異進(jìn)行分離的方法 。 （ 2） 特殊試劑沉淀法 系采用某些 有機(jī)或無(wú)機(jī)試劑 與相應(yīng)氨基酸形成 不溶性衍生物 的分離方法 。 （ 1） 溶解度法 是依據(jù)不同氨基酸在水中或其它溶劑中的 溶解度差異 而進(jìn)行分離的方法 。 工業(yè)上很少用該法生產(chǎn)氨基酸而主要用于生產(chǎn) 水解蛋白及蛋白胨 。 此法