【正文】 4 5 3 13 137 61 1198 70 429 12 432 11 1972 20 2 66 8 40 4 13 1 11 0 0 0 0 提高脫毒效果提高脫毒效果 物理處理物理處理1）高溫處理）高溫處理2）低溫處理）低溫處理 化學處理化學處理1）高溫處理又稱溫熱療法）高溫處理又稱溫熱療法n 某些病毒受熱以后不穩(wěn)定，失去活性。n 莖尖越小對培養(yǎng)基的要求越高，成功率越低。圖圖 71 葡萄莖尖脫毒培養(yǎng)過程示意圖葡萄莖尖脫毒培養(yǎng)過程示意圖葡萄莖尖脫毒經(jīng)過葡萄莖尖脫毒經(jīng)過 7個時期：個時期： A―接種后變綠增大期；接種后變綠增大期； B―形成畸形葉期；形成畸形葉期；C―形成多芽和芽伸長期；形成多芽和芽伸長期； D―多芽展開小葉和小葉伸長期；多芽展開小葉和小葉伸長期； E―發(fā)根發(fā)根期；期； F―根和莖伸長期；根和莖伸長期； G―移栽入盆期移栽入盆期 影響莖尖培養(yǎng)法脫除植物病毒的因素影響莖尖培養(yǎng)法脫除植物病毒的因素? 母體材料病毒侵染的程度? 外植體的生理狀態(tài)? 起始培養(yǎng)的莖尖大小? 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件n 莖尖培養(yǎng)脫毒效果的好壞與莖尖大小呈負相關(guān)，切取的莖尖越小，脫毒效果越好； 而培養(yǎng)莖尖成活率的高低則與莖尖大小呈正相關(guān)，切取莖尖越小，成活率越低。苗高 12cm高時，轉(zhuǎn)入生根高時，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)基， 710天后生根，再繼代成壯苗后天后生根，再繼代成壯苗后移栽。 繼代培養(yǎng)生根和快速繁殖繼代培養(yǎng)生根和快速繁殖n 將接種外植體置于將接種外植體置于 25度左右、光照度度左右、光照度3000lx的實驗室中，光周期的實驗室中，光周期 1316h/d，培，培養(yǎng)養(yǎng) 23周成苗。n 根據(jù)培養(yǎng)種類不同，添加的生長調(diào)節(jié)劑可適當調(diào)根據(jù)培養(yǎng)種類不同，添加的生長調(diào)節(jié)劑可適當調(diào)整?？椃只陀鷤M織生長是有利的。④④ 這種外植體（生長錐帶這種外植體（生長錐帶 1～～ 2個原葉基）的培養(yǎng)，嚴格來說個原葉基）的培養(yǎng)，嚴格來說，應稱為，應稱為 分生組織培養(yǎng)分生組織培養(yǎng) 。②② 先用先用 95%酒精快速浸泡一下，再放入酒精快速浸泡一下，再放入 5%漂白粉消毒漂白粉消毒 7～～10min（或（或 5%次氯酸鈉溶液），然后無菌水沖洗次氯酸鈉溶液），然后無菌水沖洗 3～～ 4次，次，③③ 在在 雙筒解剖雙筒解剖 下剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長點，用解剖針切下剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長點，用解剖針切取帶取帶 1～～ 2個葉原基的生長點，接種到培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。 莖尖剝離莖尖剝離①① 取幼苗莖尖取幼苗莖尖 2～～ 3cm小段，剝?nèi)タ梢姷拇笕~，自來水沖洗小段，剝?nèi)タ梢姷拇笕~，自來水沖洗 1h左右后進入無菌室。n 定期噴施殺菌劑（如鏈霉素）也有效。n 也可去插條在室內(nèi)溶液培養(yǎng)。莖尖培養(yǎng)途徑：莖尖培養(yǎng)途徑： 莖尖莖尖 叢生芽叢生芽 生根生根 再生株再生株（無毒）（無毒） （無毒）（無毒）莖尖取材莖尖取材 ：： 葉原基頂端分生組織 材料的培養(yǎng)和滅菌材料的培養(yǎng)和滅菌n 供試植株要種在無菌土中，溫室種植。n 無病毒苗只是相對而言無病毒苗只是相對而言 ：：n 因為莖尖還有已知及未知的其他病毒，除因為莖尖還有已知及未知的其他病毒，除去的病毒是指主要危害的幾種病毒，嚴格去的病毒是指主要危害的幾種病毒，嚴格來說，是來說，是 “無特定病毒的苗無特定病毒的苗 ”。微莖尖 為 表 71 離體莖尖長度對馬鈴薯脫除病毒的影響莖尖 長 度/mm 葉原基數(shù) 發(fā) 育成小植株數(shù) 無病毒再生植株數(shù)12450426424180表 72 帶病毒植物脫除病毒時宜采用的莖尖大小植物種 類 病毒種 類 莖尖 長 度 /mm 品種數(shù)馬鈴 薯甘 薯甘 蔗大 麗 花馬鈴 薯 Y病毒馬鈴 薯 X病毒馬鈴 薯卷葉病毒馬鈴 薯 C病毒馬鈴 薯 S病毒斑葉花葉病毒縮 葉花葉病毒羽毛狀花葉病毒花葉病毒花葉病毒1731561211n 莖尖培養(yǎng)除可除去病毒外，還可除去其他莖尖培養(yǎng)除可除去病毒外，還可除去其他病原體，如細菌、真菌等。）。能性就越小，但太小不易成活。幾乎檢測不出。部，隨后通過維管束轉(zhuǎn)移到其他部分。轉(zhuǎn)移速度很慢，每小時只有幾微米。n 病毒侵染到感染植株的葉片后，經(jīng)過一段時間，病毒侵染到感染植株的葉片后，經(jīng)過一段時間，即即 向附近細胞增殖轉(zhuǎn)移向附近細胞增殖轉(zhuǎn)移 。(4) 酶缺乏 1969年， StaceSmith提出，可能病毒的合成需要的酶系統(tǒng)在分生組織中缺乏或還沒建立，因而病毒無法在分生組織中復制。(2) 傳導抑制 病毒在植物體內(nèi)的傳播主要是通過維管束實現(xiàn)的，但在分生組織中，維管組織還不健全，從而抑制了病毒向分生組織的傳導。 （原因？） （原因：分生組織細胞分裂和生長速度快，而病毒在植物體細胞內(nèi)繁殖速度相對較慢；另外，病毒是通過篩管組織或胞間聯(lián)絲傳播至其他組織細胞的，而莖尖分生組織無分化，沒有維管組織。植物種類 染病毒種類 植物種類 染病毒種類菊花康乃馨水仙月季葡萄無花果1911410265矮 牽 牛馬鈴 薯大蒜蘋果草莓桃51724362423第二節(jié)第二節(jié) 快速繁殖中莖尖培養(yǎng)及脫毒快速繁殖中莖尖培養(yǎng)及脫毒一一 快速繁殖中莖尖培養(yǎng)快速繁殖中莖尖培養(yǎng)二二 快速繁殖中莖尖培養(yǎng)脫毒快速繁殖中莖尖培養(yǎng)脫毒1 病毒在植物體內(nèi)的分布病毒在植物體內(nèi)的分布2 無病毒苗的獲得無病毒苗的獲得1 病毒在植物體內(nèi)的分布? 病毒在植物體內(nèi)的分布具有不均勻性，隨植株不同部位和年齡而異?；ò呶〉取７矫?，有白菜病毒病、番茄病毒病等。毒等多種病毒病?？s或葉花白，產(chǎn)量一年不如一年。由病毒引起作物產(chǎn)量和品質(zhì)退化的事例甚多。物可以治愈。受病毒浸染的植物終身帶毒，目前尚無藥病害。 應用于育種 因莖尖遺傳性穩(wěn)定，莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成熟，因此該技術(shù)多用于常規(guī)方法繁殖困難的物種， 有性不親和基因與不育基因型的繁殖，新雜交種的快速繁殖，繁殖大批遺傳形狀一致的親本供大規(guī)模雜交制種。n 無病株的生產(chǎn) 迄今為止 , 人們發(fā)現(xiàn)的植物病毒已超過 600種，無病毒苗的培養(yǎng)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中作用越來越大，取得了良好的經(jīng)濟效益和社會效益。 生 長 正常型， 是接種后莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織 ， 莖尖 顏 色逐 漸變綠 ，并逐 漸 伸 長 ，葉原基 發(fā)育成可 見 的小葉， 進 而形成小苗。 引起原因一是生 長 素 濃 度 過 高，引起 細 胞 瘋 狂分裂而 導 致愈 傷組織 的形成。 引起原因的是生 長 素 濃 度太低，或是溫度 過 低或 過 高。2℃ 。常用的其它培養(yǎng)基有 White ， Heller等，培養(yǎng)基中生 長 素是必 須 的。 因為這種 培養(yǎng)技術(shù)簡單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時間短。 這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。 微莖尖指帶有 1～ 2個葉原基的生長錐，其長度不超過 。使其發(fā)育成完整植株的過程。遺傳性。配。繁殖數(shù)量不如不定芽型和器官發(fā)生型多；量不如不定芽型和器官發(fā)生型多；216。缺點：缺點： 對培養(yǎng)基要求對培養(yǎng)基要求 高高 ，器官發(fā)生條件，器官發(fā)生條件 苛刻苛刻 。2）） 器官型和胚狀體發(fā)生型器官型和胚狀體發(fā)生型 ：遺傳性穩(wěn)定。原球莖原球莖發(fā)育成蘭苗1）） 不定芽型：不定芽型： 容易成苗，對培養(yǎng)基要求不高，后代容易成苗，對培養(yǎng)基要求不高，后代遺傳性較為穩(wěn)定，遺傳性較為穩(wěn)定，缺點：缺點： 但取材受到一定限制，但取材受到一定限制， 僅限于僅限于 具有明顯頂端分具有明顯頂端分生組織和