【正文】 量增加，牽?；ɑㄉ珡乃{(lán)變紅。牽?；词菍諝庵卸趸紳舛鹊闹甘局参铩Ｑ┧蓪Χ趸蚝头瘹浜苊舾?，當(dāng)空氣中存在這兩種氣體時，其葉片就會出現(xiàn)枯黃現(xiàn)象。紫鴨跖草在低強(qiáng)度的輻射后，花色即由藍(lán)色變成粉紅，這種植物可以作為測量輻射強(qiáng)度的 “ 指示劑 ” 。 ? 接種方法 ① 摩擦接種法 接種時取待測植物的幼葉，加少量水及等量（ pH值 ），磨成勻漿，吸取少量漿液揩抹在指示植物葉片上涂有 500～ 600目金剛砂部分，輕輕磨擦使?jié){液能侵入葉片表皮細(xì)胞但又不損傷葉片。 5分鐘后用水沖洗葉面。 將被接種的指示植物置于有防蚜蟲網(wǎng)罩的溫室內(nèi)，15～ 25℃ ，數(shù)天至幾周后，指示植物即出現(xiàn)可見的癥狀。表表 75 幾種馬鈴薯病毒種類的癥狀幾種馬鈴薯病毒種類的癥狀種 類 癥 狀 鑒 定寄主馬鈴 薯 X病毒，PVX 脈 間 花葉千日 紅 、曼陀 羅 、辣椒、番茄、心葉煙馬鈴 薯 S病毒，PVS 葉脈深陷粗 縮莧 色藜、千日 紅 、光曼陀 羅 、昆 諾 阿藜馬鈴 薯 Y病毒，PVY隨品種而異，有些 輕 微花葉或粗 縮 ，敏感品種反 應(yīng)為 壞死野生 馬鈴 薯、洋酸菜、曼陀 羅馬鈴 薯卷葉病毒， PLRV初侵染幼葉尖呈淺黃白色，有些品種呈紫色或紅 色洋酸菜② 嫁接法 一些木本多年生果樹或草莓等無性繁殖草本植物，其病毒不是通過汁液而是其他介體傳播 [如草莓黃化病毒是由蚜蟲（ Mtzus fragaefolii）傳播的 ，這種病毒鑒定可采用嫁接法。 即用待鑒定植株芽作接穗，指示植物作砧木。根據(jù)指示植物的表現(xiàn)判斷是否脫除了病毒。指示植物 接穗嫁接后的植物3 血清鑒定法血清鑒定法n 植物病毒是由核酸和蛋白質(zhì)組成的核蛋白復(fù)合體，植物病毒是由核酸和蛋白質(zhì)組成的核蛋白復(fù)合體，也是一種抗原，注射到動物體內(nèi)即產(chǎn)生抗體，抗體也是一種抗原，注射到動物體內(nèi)即產(chǎn)生抗體，抗體存在于血清之中，稱為存在于血清之中，稱為 抗血清抗血清 。n 由于不同病毒產(chǎn)生的由于不同病毒產(chǎn)生的 抗血清都有特異性抗血清都有特異性 ，用特定病，用特定病毒的抗血清來鑒定該種病毒，具有高度專一性和特毒的抗血清來鑒定該種病毒，具有高度專一性和特異性，幾分鐘至幾小時即可完成，異性，幾分鐘至幾小時即可完成， 方法簡便方法簡便 ，所以，所以成為植物病毒鑒定中最有用的方法之一。成為植物病毒鑒定中最有用的方法之一。血清鑒定法 (serologic test)? 實(shí)驗(yàn)依據(jù)：沉淀反應(yīng)? 病毒 “抗血清 ”在診斷上的優(yōu)異性：病毒抗血清具有高度專化性① 專一性； ② “預(yù)見性 ”； ③ 定量性。? 病毒 “抗血清 ”在診斷上的局限性： 不是所有病毒都能制成抗血清，能夠提純的病毒量太少，或在提純過程中喪失了必備的抗原結(jié)構(gòu)； 植物體內(nèi)的單寧物質(zhì)使病毒喪失了抗原性質(zhì)。血清鑒定法? 基本方法：? 玻璃片凝集法 （平皿）微量凝集試驗(yàn) 試管沉淀反應(yīng) 免疫雙擴(kuò)散?ELISA病毒感染人工注射異體蛋白動物 動物 植物帶該種病毒血清反應(yīng)+免疫球蛋白（抗原） （抗體） （抗原）4 電鏡鑒定法電鏡鑒定法n 直接觀察到病毒微粒直接觀察到病毒微粒 是否存在，病毒顆粒的大是否存在，病毒顆粒的大小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)。小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)。n 方法：方法： 投影法、背景染色法、表面復(fù)形的制備投影法、背景染色法、表面復(fù)形的制備與掃描電鏡法，以及超薄切片法。與掃描電鏡法，以及超薄切片法。n 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 直觀，準(zhǔn)確，效率高。直觀，準(zhǔn)確，效率高。n 不足：不足： 需要一定的設(shè)備和技術(shù)（超薄切片技術(shù)需要一定的設(shè)備和技術(shù)（超薄切片技術(shù)、背景染色法、掃描電鏡使用）。、背景染色法、掃描電鏡使用）。5 分子檢測法? 優(yōu)點(diǎn)：安全快速、簡便、靈敏度高和特異性強(qiáng)、容易觀察結(jié)果。? 常用的方法252。 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （ PCR）252。 雙鏈 RNA分析技術(shù) 通過提取純純化待測植物 RNA，并對其進(jìn)行電泳分析，可確定 dsRNA存在，從而判斷待檢植物是否帶病毒。252。 核酸分子雜交和序列分析技術(shù)252。 RFLP、 RAPD等分子標(biāo)記技術(shù)6 酶聯(lián)免疫吸附法 用酶標(biāo)記抗原或抗體的微量測定方法。7 免疫吸附電鏡法 電鏡結(jié)合血清學(xué)檢測病毒的方法。脫毒苗保存n在單軸蘭花中，用莖尖建外植體時，意味耗費(fèi)整個植株，因此一般用帶有營養(yǎng)芽的花梗節(jié)段進(jìn)行培養(yǎng)。第七章第七章 植物快速繁殖和脫毒植物快速繁殖和脫毒n 第一節(jié)第一節(jié) 植物快速繁殖的途徑和方法植物快速繁殖的途徑和方法n 第二節(jié)第二節(jié) 快速繁殖中莖尖培養(yǎng)及脫毒快速繁殖中莖尖培養(yǎng)及脫毒n 第三節(jié)第三節(jié) 其他途徑脫毒其他途徑脫毒n 第四節(jié)第四節(jié) 脫毒苗的鑒定脫毒苗的鑒定n 第五節(jié)第五節(jié) 脫毒后防病毒再感染脫毒后防病毒再感染第五節(jié)第五節(jié) 脫毒后防病毒再感染脫毒后防病毒再感染n 1 無病毒苗的隔離保存無病毒苗的隔離保存n 2 無病毒苗的長期保存無病毒苗的長期保存n 3 無病毒苗的繁殖無病毒苗的繁殖1 無病毒苗的隔離保存無病毒苗的隔離保存 昆蟲傳染病毒昆蟲傳染病毒n 無病毒苗種植在隔離網(wǎng)室中，防止蚜蟲或其他昆蟲進(jìn)入。無病毒苗種植在隔離網(wǎng)室中，防止蚜蟲或其他昆蟲進(jìn)入。 土壤傳染病毒土壤傳染病毒n 病毒會以土壤中的真菌和線蟲為媒介，進(jìn)入無病毒苗，所以病毒會以土壤中的真菌和線蟲為媒介，進(jìn)入無病毒苗，所以栽培土壤應(yīng)進(jìn)行消毒，周圍環(huán)境也要整潔，及時打藥。栽培土壤應(yīng)進(jìn)行消毒，周圍環(huán)境也要整潔，及時打藥。 接觸傳染病毒接觸傳染病毒n 在在 貯存、運(yùn)輸和播種操作貯存、運(yùn)輸和播種操作 中會傳染病毒。中會傳染病毒。n 在田間，病株的病毒可通過在田間，病株的病毒可通過 工具、衣服接觸工具、衣服接觸 傳染病毒。傳染病毒。n 生產(chǎn)場所應(yīng)做好防蚜和土壤消毒工作。有條件的地方，可找生產(chǎn)場所應(yīng)做好防蚜和土壤消毒工作。有條件的地方，可找適合的海島或高冷山地，氣候涼爽，蟲害少，有利于無病毒適合的海島或高冷山地，氣候涼爽，蟲害少，有利于無病毒材料的生長、繁殖。材料的生長、繁殖。第六節(jié)第六節(jié) 脫毒后防病毒再感染脫毒后防病毒再感染1 無病毒苗的隔離保存無病毒苗的隔離保存2 無病毒苗的長期保存無病毒苗的長期保存 加生長延緩劑加生長延緩劑 低溫保存低溫保存 超低溫保存超低溫保存2 無病毒苗的長期保存無病毒苗的長期保存n 脫病毒苗需要較長期的保存，一般脫病毒苗需要較長期的保存，一般 每月繼代每月繼代 一次一次，比較麻煩；，比較麻煩； 加生長延緩劑加生長延緩劑n 除去全部植物激素，加入除去全部植物激素，加入 1105（（ 10ppm）的）的 B9或或矮壯劑。矮壯劑。n 培養(yǎng)基的量應(yīng)比平時用得稍多，每瓶培養(yǎng)基的量應(yīng)比平時用得稍多，每瓶 3～～ 4個幼苗個幼苗，保存在，保存在 1000LX和和 5～～ 25℃℃ ，隔，隔 2～～ 3個月個月 或或 稍長稍長 時時間再繼代一次。間再繼代一次。 低溫保存低溫保存n 試管苗長到試管苗長到 2cm左右，放在左右，放在 4℃℃ 冰箱冰箱 內(nèi)的暗內(nèi)的暗處保存，只需半年或一年更換培養(yǎng)基，也處保存，只需半年或一年更換培養(yǎng)基，也叫最小生長法。是長期保存無病毒苗及其叫最小生長法。是長期保存無病毒苗及其他優(yōu)良種質(zhì)的方法。他優(yōu)良種質(zhì)的方法。 超低溫保存超低溫保存n 試管苗在試管苗在 液氮液氮 低溫低溫 196℃℃ 中保存，細(xì)胞的代中保存，細(xì)胞的代謝和生長完全停頓，可長期保存。謝和生長完全停頓，可長期保存。3 無病毒苗的繁殖① 無病毒苗的繁殖方法有：嫁接繁殖、扦插繁殖、壓條繁殖、匍匐莖繁殖等。② 建立無病毒苗繁殖生產(chǎn)體系原因：原因： ①① 基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)研究 跟不上，諸如病毒特性與寄主的關(guān)跟不上，諸如病毒特性與寄主的關(guān)系，各植物種體內(nèi)都有什么病毒等。系，各植物種體內(nèi)都有什么病毒等。 ②② 脫毒培養(yǎng)后如何脫毒培養(yǎng)后如何 快速檢測快速檢測 。 ③③ 得到脫毒原種苗后，得到脫毒原種苗后， 如何保存如何保存 ？如何防止？如何防止 再再度侵染度侵染 等。等。植物脫毒苗生產(chǎn)應(yīng)用尚不普遍植物脫毒苗生產(chǎn)應(yīng)用尚不普遍思考題思考題？？的方法有哪些？的方法有哪些？管苗一般是無毒的？管苗一般是無毒的？產(chǎn)，并以此理解組織培養(yǎng)在培育脫毒苗木的意義？