浙江大學(xué)生物化學(xué)甲實(shí)驗(yàn)課件實(shí)驗(yàn)8植物基因組dna的提取-文庫吧資料
2025-01-22 05:59本頁面
【正文】 有紫外吸收的性質(zhì)，它們在 260nm處有最大的吸收峰。 （ 注：紫外光對眼睛有害，觀察時(shí)戴上防護(hù)鏡或眼鏡，或隔著玻璃或有機(jī)玻璃觀察 ）。當(dāng)溴酚藍(lán)條帶移動(dòng)到距凝膠前緣約 2cm時(shí)，停止電泳（ 約需 30～ 60min）。注意上樣時(shí)要小心操作，避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。若 DNA含量偏低，則可依上述比例增加上樣量，但總體積不可超過樣品槽容量。稱取 01g瓊脂糖，置于 250ml錐形瓶中，加 100ml TBE電泳緩沖液，加熱熔化至無顆粒狀瓊脂糖，待其冷卻至 50～ 60℃ 后，加入 EB，使其終濃度為 ，搖勻后立即倒入準(zhǔn)備好的膠模中，待膠凝固后，放入電泳槽中，倒入適量 TBE（剛好淹過膠面），拔去梳子備用。 五、實(shí)驗(yàn)操作方法和步驟 置于預(yù)熱到 65℃ 的研體中，加少許石英砂；加入預(yù)熱到65℃ 的核酸提取緩沖液 3 ml 稱取植物幼嫩葉子 迅速研成勻漿 轉(zhuǎn)移到 7ml帶蓋離心管中 65℃ 水浴保溫 40 min，其間經(jīng)常輕柔搖動(dòng) 加入 3 ml氯仿 異戊醇溶液 輕柔顛倒混勻后， 室溫 靜置 分層 5 min 離心 12022rpm 5min 上清液 轉(zhuǎn)移到干凈 7ml離心管中， 記錄體積，棄沉淀， *① 加入 等體積 異丙醇試劑， 混和后 靜置 20 min沉淀 DNA 4℃ 離心 5,000g 3 min收集絮狀沉淀 加入 3mlTE， 65℃ 水浴中助溶 15min，使之完全溶解 加入等體積的平衡酚 ，輕柔顛倒混勻，室 靜置 10min 4℃ 離心 12,000rpm 10min 轉(zhuǎn)移上清于新 7ml離心管中， 記錄體積 *② 加入等體積的酚 ∶ 氯仿，輕柔顛倒混勻，室溫 放置15min 4℃ 離心（ 12,000rpm， 5min） 吸取上清轉(zhuǎn)移到一新 7ml離心管中 ，記錄體積 *③ 加入等體積的氯仿，顛倒混勻，室溫 放置 5min 4℃ 離心（ 12,000rpm， 10min） 吸取上清轉(zhuǎn)移到一新 7ml離心管中， 記錄體積 *④ 加入 1/10體積 3mol/L NaAC和2 體積 –20℃ 預(yù)冷的 無水乙醇–20℃ 放置 20 min *⑤ 4℃ 離心（ 12,000rpm ， 10min）收集沉淀 *⑥ 用 70%乙醇洗滌沉淀，傾倒掉乙醇溶液，干燥，讓酒精完全揮發(fā) 用 1ml TE 溶解沉淀， 加入 5μl RNase（ 5μg/μl）， 37℃ 保溫 10 min， 即為植物基因組 DNA溶液 *⑦ 凝膠電泳檢測 基因組 DNA（分子量大小、純度） 說明：如果蛋白質(zhì)和 RNA未去除干凈， 重復(fù) 酚，酚 /氯仿，氯仿抽提步驟，繼續(xù)用 RNase 處理，乙醇沉淀和洗滌，重溶于 TE中，直至基因組 DNA純度和質(zhì)量符合要求。 三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑 實(shí)驗(yàn)材料：植物幼嫩葉子 實(shí)驗(yàn)試劑 （ 1）基因組 DNA提取緩沖液 （ 2）氯仿 :異戊醇 :乙醇抽提液 （ 3） TE緩沖液 （ 4）平衡酚： （ 5） RNA酶 A
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1