形態(tài)學檢驗技術huppt課件-文庫吧資料
2025-01-20 16:45本頁面
【正文】 12小時。 ? 常用的脫水劑是酒精。石蠟切片法就是使石蠟滲入組織，以達到支持增硬的作用。浸洗后的材料若暫時不制片，可保存于７０％酒精中。也可在酒精中加入幾滴氨水或飽和碳酸鋰溶液，以迅速洗去黃色。 (2)沖洗 ? 經固定的材料，可根據不同的固定液，分別用水或酒精沖洗，以洗去固定液，否則固定液留在組織會有礙染色。把動物殺死后應立即割取組織塊，組織塊的大小以厚度不超過５ mm 為宜，并快速投入固定液中。 ? 應用最廣泛的 石蠟切片法制作過程是：取材→ 固定 → 沖洗 → 脫水 → 透明 → 浸蠟 → 包埋 →切片 → 貼片 → 烤片 → 脫蠟 → 復水 → 染色 → 脫水 → 透明 → 封藏。固定時盡量維持細胞原有的形態(tài)。其目的有二： ? 一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上； ? 二是增加其對染料的親和力。 ?當細菌分解糖類產酸使培養(yǎng)基 pH下降時，細菌所帶正電荷增加，此時可用伊紅、酸性復紅或剛果紅等酸性染料染色。經染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。 顯微鏡的使用操作及注意事項 (1)觀察前的準備 (2)低倍鏡觀察 (3)高倍鏡觀察 (4)油鏡觀察 微生物涂片、染色的檢驗技術 ?細菌的細胞小而透明，在普通的光學顯微鏡下不易識別，必須對它們進行染色。如帶校正環(huán)物鏡，帶視場光闌物鏡，相差物鏡，熒光物鏡，無應變物鏡，無罩物鏡，長工作距離物鏡等 D、目前在研究中常用的物鏡還有：半復消色差物鏡（ FL），平場物鏡 (Plan)，平場復消色差物鏡（ Plan Apo） ,超平場物鏡（ Splan，超平場復消色差物鏡（ Splan Apo）等。 B、復消色差物鏡：物鏡外殼上標有“ Apo”字樣，除能校正紅、藍、綠三色光的色差外，還能校正黃色光造成的相差，通常與補償目鏡配合使用。 ?根據物鏡像差校正的程度來分類可分為： A、消色差物鏡：是最常用的物鏡，外殼上標有“ Ach”字樣，該物鏡可以除紅光和青光形成的色差。 B、油浸系物鏡：常以香柏油為介質，此物鏡又叫油鏡頭，其放大率為 90 100 ，數(shù)值孔值大于 1。物鏡的性能取決于物鏡的數(shù)值孔徑（ numerical apeature簡寫為 NA），每個物鏡的數(shù)值孔徑都標在物鏡的外殼上，數(shù)值孔徑越大，物鏡的性能越好。照相時選用照相目鏡（ NFK）。 光學系統(tǒng)包括：反光鏡、聚光器、接物鏡、接目鏡等組成，光學系統(tǒng)使物體形成物體放大像 。 ③甙類、糖類：樣品加水用稀酸酸化，煮沸 15分鐘過濾，濾液濃縮后，滴在紙片上，噴鄰苯二甲酸苯胺試液，烘烤，斑點顯棕紅色，為陽性反應。 試管法 類似紙片法 ①皂甙：水浸液置試管中，用力振搖，有持久性泡沫，為陽性反應。檢查山道年（ Santonin）可將原料直接加甲醇鈉，顯紫紅色為陽性反應。 ⑥強心甙：醇浸液，加 Kedde試液，斑點顯紫色或淺紫色，為陽性反應。 ④黃酮類：醇浸液，噴三氯化銘醇試液，黃色及熒光均加深，為陽性反應。 ②酚：醇浸液，噴三氯化鐵試液，若斑點顯蘭綠（黑）色，為陽性反應。 紙片法 取樣品抽提液滴在濾紙上，待展開，干后噴灑試液，可以檢查多種成分。 “嘗”就是用嘴舌來品嘗，根據感覺來判斷樣品。如將果實和種子放在濾紙上，用力壓碎，稍干后看紙上有無油跡并估計含油的多少；檢查鞣質類化合物，可用一把無銹的鐵刀切開樣品，如含鞣質，小刀及材料斷面很快會變成蘭黑色。 “摸”就是用手觸摸、揉捻、撕扯、折切等，感覺樣品的粗糙程度、堅硬程度、斷面特性等?！翱础本褪羌氈碌挠^察樣品，包括樣品的全貌和樣品各部位的特點，如形狀、顏色、光澤、分泌物、毛、孔、表面和斷面、斑點、刺等。常用的濃縮方法有：蒸餾或減壓蒸餾法、 KD濃縮器濃縮法、蒸發(fā)法等。 ? 低溫冷凍法：該方法基于不同物質在同一溶劑中的溶解度隨溫度不同而不同的原理進行彼此分離的。主要有振蕩浸取法、組織搗碎提取法、脂肪提取器提取法、勻漿法等。 生物樣品的預處理 (1)消化分解：使用強酸或強堿等消化分解液，初步處理樣品，使大部分蛋白等大分子物質在一定程度上降解或去除。 ④保存：對于測定某些金屬含量的樣品，應注意避免受金屬器械和篩子等污染。一般要求通過 1mm篩孔即可，有的分析項目要求通過 。谷類作物的種子樣品如稻谷等，應先脫殼再粉碎。如果遇到陰雨天或潮濕氣候，可放在4060℃ 鼓風干燥箱中烘干，以免發(fā)霉腐爛，并減少化學和生物變化。 ③研磨：對于含纖維多或較硬的樣品，如禾木科植物的根、莖桿、葉子等，可用不銹鋼刀或剪刀切（剪）成小片或小塊，混勻后在研缽中加石英砂研磨。 梅花形五點 交叉間隔 樣品的制備 (1)植物鮮樣的制備 ①洗滌：將樣品用清水、去離子水洗凈，晾干或拭干； ②切碎：將晾干的鮮樣切碎、混勻，稱取一定量于電動高速組織搗碎機的搗碎杯中，加適量蒸餾水或去離子水，開動搗碎機搗碎 12min，制成勻漿。 ⑤將采好的樣品裝入保存袋中，可能
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