【正文】 些 TF分別稱為 TFI、 TFII、TFIII。 目錄 ?能直接 、 間接辨認和結合轉錄上游區(qū)段 DNA的蛋白質 ， 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)數(shù)百種 ， 統(tǒng)稱為 反式作用因子 (transacting factors)。 目錄 轉錄起始點 TATA盒 CAAT盒 GC盒 增強子 ? 順式作用元件 (cisacting element) AATAAA 切離加尾 轉錄終止點 修飾點 外顯子 翻譯起始點 內含子 OCT1 OCT1： ATTTGCAT八聚體 目錄 ?真核生物轉錄起始也需要 RNA pol對起始點上游 DNA序列進行辨認和結合 ， 生成 轉錄前起始復合體 （ preinitiation plex, PIC） 。 ? 與原核生物的顯著不同是 ， 起始和延長過程都需要眾多相關的蛋白質因子參與 ， 這些因子被稱為 轉錄因子（ transcriptional factors, TF） 或 反式作用因子 （ transacting factors） 。 ?RNA polⅡ 是真核生物中最活躍 、 最重要的酶 ， 故本章敘述的真核生物的轉錄主要以 RNA polⅡ 所催化的轉錄反應為例 。 ?RNA聚合酶 Ⅱ 最大亞基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)為 TyrSerProThrSerProSer的重復序列片段 ， 稱為羧基末端結構域 (carboxylterminal domain, CTD)。 RNA polⅡ 還催化合成一些具有重要的基因表達調 節(jié) 作 用 的 非 編 碼 RNA ， 如 長 鏈 非 編 碼 RNA（ lncRNA） 、 微 RNA（ miRNA） 和 piRNA（ 與 Piwi蛋白相作用的 RNA） 的合成 。 目錄 一、 真核生物有三種 DNA依賴的RNA聚合酶 ? 真核生物具有 3種不同的 RNA聚合酶 : ? RNA聚合酶 Ⅰ （ RNA PolⅠ ） ? RNA聚合酶 Ⅱ （ RNA PolⅡ ） ? RNA聚合酶 Ⅲ （ RNA Pol Ⅲ ） 目錄 真核生物的 RNA聚合酶 種類 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 轉錄產物 rRNA的前體 45S rRNA mRNA前體 hnRNA, lncRNA, piRNA, miRNA tRNA, 5S rRNA snRNA 對鵝膏蕈堿的反應 耐受 敏感 高濃度下敏感 細胞內定位 核仁 核內 核內 目錄 ? 真核生物 RNA聚合酶的結構比原核生物復雜 ， 所有真核生物的 RNA聚合酶都有兩個不同的大亞基和十幾個小亞基 . ? RNA polⅡ 在核內轉錄生成核不均一 RNA（ hnRNA） ，然后加工成 mRNA并輸送給胞質的蛋白質合成體系 。 目錄 目錄 真核生物 RNA的生物合成 The Biosynthesis of Eukaryote RNA 第三節(jié) 目錄 ?真核生物的轉錄過程比原核復雜 。 ? 莖環(huán)結構使轉錄終止的機制 ? 使 RNA聚合酶變構，轉錄停頓； ? 局部 RNA/DNA雜化短鏈的堿基配對是最不穩(wěn)定的。 ??因子還有 ATP酶活性和解螺旋酶 (helicase)的活性 。 ? 依據是否需要蛋白質因子的參與 ， 原核生物轉錄終止分為： 目錄 ??因子是由相同亞基組成的六聚體蛋白質 ， 亞基分子量 46kD。 目錄 轉錄過程中 DNA的超螺旋結構變化 轉錄過程中 DNA的超螺旋結構變化 目錄 三 、 原核生物轉錄延長與蛋白質的翻譯同時進行 5? 3? DNA 核糖體 RNA RNA聚合酶 ?在同一 DNA模板上，有多個轉錄同時在進行； ?轉錄尚未完成，翻譯已在進行。 目錄 二、 RNA pol核心酶獨立延長 RNA鏈 1. ?亞基脫落， RNA–pol聚合酶核心酶變構，與模板結合松弛，沿著 DNA模板前移； 2. 在 核心酶 作用下， NTP不斷聚合， RNA鏈不斷延長。 DNA雙鏈解開的范圍只在 17 bp左右 ， 這比復制中形成的復制叉小得多 。 ? DNA雙鏈解開，使其中的一條鏈作為轉錄的模板。 目錄 ?RNA聚合酶保護法 目錄 開始轉錄 T T G A C A A A C T G T 35 區(qū) (Pribnow box) T A T A A T Pu A T A T T A Py 10 區(qū) 1 30 50 10 10 40 20 5 ? 3 ? 3 ? 5 ? RNApol辨認位點 (recognition site) 5? 5? RNA聚合酶保護區(qū) 結構基因 3? 3? ?RNA聚合酶保護法研究轉錄起始區(qū) 目錄 目錄 原核生物的轉錄過程 The Process of Transcription in Prokaryote 第二節(jié) 目錄 原核生物的轉錄過程可分為轉錄起始、轉錄延長和轉錄終止三個階段。 原核生物以RNA聚合酶全酶結合到 DNA的啟動子上而起動轉錄 ， 其中由 σ亞基辨認啟動子 ， 其他亞基相互配合 。 操縱子包括若干個結構基因及其上游 (upstream)的調控序列 。 目錄 三、 RNA聚合酶結合到 DNA的啟動子上啟動轉錄 ?轉錄是不連續(xù) 、 分區(qū)段進行的 。 σ70是辨認典型轉錄起始點的蛋白質 ， 大腸桿菌中的絕大多數(shù)啟動子可被含有 σ70因子的全酶所識別并激活 。 目錄 （二） RNA聚合酶由多個亞基組成 ? 36512 決定哪些基因被轉錄? 150618 催化功能?? 155613 結合 DNA 模板? 70263 辨認起始點亞 基 分 子 量 功 能目錄 核心酶 (core enzyme) 全酶 (holoenzyme) ?? ? ? ? ? ?? ? ? ? 轉錄起始階段 轉錄延長階段