角蛋白結(jié)構(gòu)功能與角蛋白遺傳病-文庫吧資料
2025-01-14 07:33本頁面
【正文】 C) ； 81 論文題目： A new mutation in L12 domain of keratin 5 in a Chinese family with WeberCockayne Epidermolysis Bullous Simplex 發(fā)表刊物： Clinical and Experimental Dermatology. 2022,29(5):53941 82 先天性大皰性魚鱗病樣紅皮病 1家系的基因突變研究 83 ?又稱表皮松解性角化過度 ,其臨床表現(xiàn)主要是出生時即有紅斑和水皰 , 隨著年齡增大，水皰可以得到改善，代之以表皮增厚和脫屑。 討論 基因突變與表型的關(guān)系 ? 發(fā)生在角蛋白桿狀區(qū)的 HIP和 HTP片段 ：EBSDM ? 桿狀區(qū)的非高度保守序列 ： EBSK、 EBSWC ? 有例外情況：如在 K14基因 HIP片段，M119T→EBS DM， M119V→EBS K，M119I→EBS WC。 研究背景 EBSWC 1. 患者通常學(xué)習(xí)走路時開始出現(xiàn)水皰，主要發(fā)生在手足部位，部分患者僅在足部出現(xiàn)水皰； 2. 口腔粘膜通常不受累及 ； 3. 有時伴有灶狀的掌跖角化過度； 4. 在超微結(jié)構(gòu)下，裂隙位于表皮內(nèi)； 5. 病情在溫暖季節(jié)加重，涼爽季節(jié)減輕； 6. 由螺旋區(qū)和連接區(qū)突變引起。 研究背景 單純型大皰性表皮松解癥的主要特征 EBSDM： 1. 水皰自新生兒期出現(xiàn)，泛發(fā)全身，多呈皰疹樣排列； 2. 口腔粘膜常受累及； 3. 常常伴有進(jìn)行性掌跖角化過度，甲營養(yǎng)不良； 4. 在超微結(jié)構(gòu)下，裂隙位于表皮內(nèi)，基底層細(xì)胞漿內(nèi)有聚集成團(tuán)塊的角蛋白中間絲； 5. 病情不隨季節(jié)變化而變化 。 ? 根據(jù) EBS發(fā)病率估計，我國大約有32022位 EBS患者。 前言 EBS研究現(xiàn)狀 ? 目前已有許多與 EBS相關(guān)的突變報道，已總結(jié)出一些突變規(guī)律。 GACCCAGCCCCTCAGAAGGAGA 70 EBSDM家系基因突變研究 71 前言 ? 大皰性表皮松解癥（ Epidermolysis Bullosa, EB）是由于皮膚真表皮交界處結(jié)構(gòu)異常而引起的一組遺傳異質(zhì)性疾病，單純型大皰性表皮松解癥（ Epidermolysis Bullosa Simplex, EBS）是其中的一類。 健康者對照序列 結(jié)果 K14基因外顯子 1直接測序圖 對照健康人DNA序列 散發(fā)病例一的 K14基因第 661位出現(xiàn)雙峰，引起第 115個密碼子由谷氨酸（ GAG）變?yōu)橘嚢彼幔?AAG） 散發(fā)病例二發(fā)生同樣突變 結(jié)果 K14基因外顯子 1單核苷酸多態(tài)性（一） ? 50位健康人 DNA pool直接測序結(jié)果顯示第 449位堿基為 G（ 圖中 ★ 標(biāo)記 ） ， 密碼子 （ 第 44個 ） 為絲氨酸（ AGC） ； GenBank序列相應(yīng)堿基為 A， 密碼子為天冬酰胺 （ AAC） 。 結(jié)果 ? 雙足跖、趾腹部可見灶狀至彌漫性角化過度 。 ? 指（趾）甲輕度至中度營養(yǎng)不良 。 結(jié)果 ? 雙足跖可見灶狀角化過度 結(jié)果 散發(fā)病例二 ? 患者，男， 39歲，自述自幼年至約 18歲期間，手足、小腿等部位頻繁出現(xiàn)水皰，自行愈合后不留瘢痕；在春夏季節(jié)發(fā)病較頻繁；成年后，發(fā)作次數(shù)明顯減少。 結(jié)果 ? 皮損附近基底層細(xì)胞可見有空泡，提示水皰裂隙位于表皮內(nèi)。 ? 就診時在四肢遠(yuǎn)端可見散在的水皰、大皰以及水皰干涸后的結(jié)痂； ? 家庭情況：父母正常，妹妹正常。 結(jié)果 ? 雙足摩擦部位可見水皰、大皰 結(jié)果 ? 雙足跖可見大皰及灶狀角化過度 結(jié)果 家系譜圖 結(jié)果 散發(fā)病例一 ? 患者，男， 11歲。自述自幼年起至今，四肢末端，特別是手足部位受摩擦后出現(xiàn)黃豆至核桃大小水皰、大皰；在春夏季節(jié)發(fā)作較頻繁。本研究為進(jìn)行中國人 PC2型基因診斷及產(chǎn)前診斷奠定了基礎(chǔ)。發(fā)生在角蛋白非關(guān)鍵部位的突變引起疾病遲發(fā)。 47 ? 結(jié)合 Connors等和我們的研究結(jié)果， K16 2B區(qū)中間部和 K17 1A 區(qū)后半部的基因突變可以呈現(xiàn)為遲發(fā)型厚甲。因此，在進(jìn)行中國人 PC Ⅱ 型基因診斷或產(chǎn)前診斷時，除了參考國際上已報道的突變位點外，應(yīng)注意這一新的突變位點的可能性。臨床上發(fā)現(xiàn)的角蛋白突變位于 1A區(qū)后半部的較少。 39 2. PCR反應(yīng)結(jié)果 ? PCR反應(yīng)產(chǎn)物電泳，擴(kuò)增出大小為 978 bp的 DNA片段（ Marker 為 DGL2022) 。 ? 反應(yīng)條件： 36 PCR產(chǎn)物采用全自動 DNA測序儀進(jìn)行序列測定，測序結(jié)果進(jìn)行同源性分析。l,模板 10181。mol/L上、下游引物各 1181。l緩沖液， 10mmol/L dNTP 1181。 35 ? PCR反應(yīng)：總體積為 50181。 34 K17P8和 K17P10擴(kuò)增的 DNA片段稀釋1:10000倍作為巢式 PCR模板。上游引物 K17p8和下游引物 K17p10。 32 2. 外周血基因組 DNA提取 用全血基因組 DNA純化試劑盒提取基因組 DNA。 24
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