【正文】 /70大小，一般由一個(gè) CDR構(gòu)成，它也保持著抗體的特異性。它只由一個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，故稱 單域抗體。但產(chǎn)量不及前者，一般實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下每升細(xì)菌的產(chǎn)量?jī)H在數(shù)毫克左右 。產(chǎn)量高，可達(dá)細(xì)菌蛋白總量的 5%20%，但需進(jìn)行變性復(fù)性，使其形成正確的立體結(jié)構(gòu)，恢復(fù)抗體活性 。 如果從雜交瘤細(xì)胞系構(gòu)建單鏈抗體，可用PCR方法 擴(kuò)增可變區(qū)基因，再組裝到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體上。 (2)Fv 或 ScFv Fv ScFv 連接肽 （ 1015個(gè)氨基酸） 單鏈抗體 的構(gòu)建在已知親本 DNA序列時(shí)可用完全 人工合成法 。 把 Fab與細(xì)菌的前導(dǎo)肽相連，在前導(dǎo)肽的作用下Fab進(jìn)入周 質(zhì) 腔，裝配折疊后，它具有結(jié)合抗原的活性。 改型抗體的發(fā)展 早期的改型抗體： 簡(jiǎn)單的 CDR移植，通過點(diǎn)突變進(jìn)行 “ 微調(diào) ” 即更換某個(gè)位點(diǎn)上的氨基酸 第二代改型抗體： ①應(yīng)用了人抗體基因庫(kù)； ②引進(jìn)計(jì)算機(jī)技術(shù)模擬抗體分子的立體結(jié)構(gòu)； ③使用了鼠人嵌合 FR。 嵌合抗體 獨(dú)特的抗體親和力保持得很好，但因鼠單抗可變區(qū)的存在，應(yīng)用時(shí)仍有較強(qiáng)的 人抗鼠抗體反應(yīng)(HAMA)反應(yīng)。為避免人抗體的恒定區(qū)產(chǎn)生不需要的副作用，可通過點(diǎn)突變來修飾調(diào)整其效應(yīng)。 克隆鼠單抗的可變區(qū)基因，可從 基因組文庫(kù) 中分離，也可用 PCR技術(shù) 分離。 1 人一鼠嵌合抗體 (Chimeric Antibodies) 人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體。此成果為我國(guó)防治病毒性疾病探索出一條新的途經(jīng)，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。在 世界上首先研制成功抗坦病毒、抗甲肝病毒、抗狂犬病毒 人源基因工程抗體 ，并獲得擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的全抗體表達(dá)載體系統(tǒng)。 華神利卡汀 /支 ? 乙腦單抗治療劑進(jìn)入 Ⅰ 、Ⅱ 和 Ⅲ 期 臨床試驗(yàn)， ? 腎綜合癥出血熱單抗進(jìn)入Ⅰ 、 Ⅱ 和 Ⅲ 期臨床。J, Centocor,Lilly) 1994/$461 M – Abciximab,鼠 抗 GPIIb/II抗體 ,防止血小板凝集 – 凝血性心血管疾病 AMI, 不穩(wěn)定型心絞痛 ? Rituxan (IDEC/Genentech/Roche) 1997/$303 M – Rituximab, 嵌合 抗 CD20抗體 – 非霍奇金氏淋巴瘤 ? Herceptin (Genentech) 1998/$204 M – Trastuzumab人源化 抗 HER2/Neu抗體 – HER2 過量表達(dá)乳腺癌 ? Synagis (Medimmune) 1998/$285 M – Palivizumab 人源化 抗 RSV F 糖蛋白抗體 – 小兒 RSV感染 當(dāng)前美國(guó)治療性抗體市場(chǎng) ? Remicade (Centocor) 1998 $130 M – Infliximab 嵌合 抗 TNFα抗體 – 局限性腸炎 ， 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 ? Zenapax (PDL, Roche) 1997 $130 M – Dacliximab,人源化 , 抗 Tac (IL2 Receptor α)抗體 – 移植排斥 ? Orthoclone OKT3 (Ortho Biotech) 1998 $60 M – Muromonab 鼠 抗 CD3 (T cells)抗體 – 移植排斥 ? Simulect (Novartis) 1998 $54 M – Basiliximab 嵌合 抗 CD25 (IL2 Receptor) 抗體 – 移植排斥 ? …… 抗體類型 商品名 應(yīng)用 鼠源單克隆抗體 Orthoclone 器官移植排斥 嵌合抗體 Peopro 冠狀動(dòng)脈成形術(shù) ， 心絞痛 嵌合抗體 Rituxan B細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤 嵌合抗體 Simulect 器官移植排斥 嵌合抗體 Remicade 回腸炎 ， 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 人源化抗體 Zenapax 器官移植排斥 人源化抗體 Synagis 嬰兒呼吸道合胞病毒 人源化抗體 Herceptin 乳腺癌 人源化抗體 Campath 慢性淋巴細(xì)胞白血病 人源化抗體偶聯(lián)物 Mylotarg 急性復(fù)發(fā)骨髓白血病 鼠源抗體放射性偶聯(lián)物 Zevalin B細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤 中國(guó)抗體研究現(xiàn)狀 單抗診斷劑： ? 針對(duì)乙型肝炎表面抗原 ? 流行性出血熱 ? 抗人 T淋巴細(xì)胞及亞群 ? 風(fēng)疹病毒 ? 黑熱病 ? 抗人絨毛膜促性腺激素 ? 霍亂 ? 抗人白細(xì)胞相關(guān)抗原 ? 抗人免疫球蛋白的系列 ? 脊髓灰質(zhì)炎病毒 ? 呼吸道合胞病毒 ? 登革熱 ? 99mTc肺癌單抗片段診斷劑進(jìn)入 I期臨床。 支原體污染?。?！ (McAb)的純化 純化單克隆抗體流程 (大鼠 ) 單抗純化方法 : 超濾法 鹽析法 離子交換法 凝膠過濾法 HPLC法等 三 .單克隆抗體 藥物的現(xiàn)狀 ? 250多種抗體類藥物在臨床試驗(yàn)中 － 1/3已進(jìn)入三期臨床 － 1/4已通過臨床 III期試驗(yàn) ? 美國(guó)市場(chǎng)上有 13種治療用的抗體藥物 ? 抗體藥物的銷售額 － 9799年由 13億美元 － 03年抗體類藥物總銷售額達(dá)到 50億美元 抗體藥物市場(chǎng)銷售額 0204060801001201401602022 2022 2022 2022 2022 2022 2022年份銷售額（億美元）2022 全球有超過 200家上市或未上市公司正在研發(fā)用于臨床診斷和治療的單克隆抗體 正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的抗體公司（ 38家）： Abgenix Alexion Pharm Altarex Applied Molecular Evolution BASF Biogen BioTransplant CAT(Cambridge Ab Tech) Celltech Centeon Centocor (Johnson amp。 ? 生物反應(yīng)器：氣升式發(fā)酵罐，中空纖維培養(yǎng) 罐，微囊發(fā)酵罐 ? 培養(yǎng)基：牛淋巴液，血清 ? 體外培養(yǎng)法 (收 獲 10400ug/ml抗體 ) 酶標(biāo)板上培養(yǎng) 微載體懸浮培養(yǎng)（固體顆粒用 DEAESephadex A50等材料）。 單向免疫擴(kuò)散 雙向免疫擴(kuò)散 （ 2）酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA) ? 原理：先將抗體或抗原包被到某種固相載體表面，再將待檢樣本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，用洗滌的方法分離抗原抗體復(fù)合物和游離的未結(jié)合成分，最后加入酶反應(yīng)底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其吸光度 (A)值的大小進(jìn)行定性或定量分析的方法。 2. 抗體鑒定 Ig類和亞類鑒定：免疫擴(kuò)散或 ELISA法 親和力鑒定 抗體類別鑒定（ Ig類和亞類鑒定）