ecoli感受態(tài)細胞的制備、質粒dna的轉化、提取與酶切鑒定-文庫吧資料
2025-01-11 02:56本頁面
【正文】 中的機械剪切力，防止染色體 DNA 的斷裂； EDTA的作用是與二價離子（ Ca2＋ ）結合，降低 DNase對 DNA的降解。L感受態(tài)細胞懸液中加入 1181。L冰冷的 ／ L CaCl2溶液， 小心懸浮細胞 ，冰上放置片刻后，即制成了感受態(tài)細胞懸液； 制備好的感受態(tài)細胞懸液可直接用于轉化實驗，如果在 4℃ 放置 12～ 24h，其轉化效率可以增高 4～ 6倍 ；也可加入占總體積 15％左右高壓滅菌過的甘油，混勻后分裝于 ，置于 70℃ 條件下，可保存半年至一年。g／ mL）； ：稱取 CaCl2，溶于70mL雙蒸水中，定容到 100mL，過濾后滅菌； ％甘油： 100ml CaCl2 溶液內含有 15ml甘油，高壓滅菌； 溶液 I: 50mmol/L葡萄糖， 10mmol/L EDTA ()， 25mmol/L TrisHCl ()； 溶液 II: , 1%SDS (現配現用 )； 溶液 III: 乙酸鉀溶液 (3M, pH=)( 60mL的5mol/L KAc, 冰醋酸， H2O)； RNase A： 10mg/ml； TE緩沖液 : 10mmol/L， TrisHCl, 1mmol/L，EDTA， ； 5 TBE緩沖液： －硼酸， mol/L EDTA, pH ； 10 Loading buffer： 1% SDS, %溴酚蘭， 50％的甘油； 無水乙醇； 70％乙醇； 標準分子量片段； 核酸內切酶 EcoR I (TaKaRa)； EcoR I酶解緩沖液 (10 buffer H)； 瓊脂糖； 溴化乙啶（ EB）染色液 (10mg/ml)。 三 ． 實驗材料與設備： 用品與與儀器： 超凈工作臺、電熱恒溫水浴、分光光度計、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫振蕩器、移液器、微型離心管等、臺式冷凍高速離心機、旋渦震蕩器、電泳儀、電泳槽、紫外透射儀，凝膠成像儀、冰箱、制冰機等； 與 Eppendorf 管、 tip頭 、燒杯、量筒 鑷子、試管三角瓶、玻璃涂棒、酒精燈、無菌牙簽、 吸水紙，一次性塑料手套等； DH5α受體菌 (RM)， pGEXPDIPr質粒(AmpR) 試劑： LB培養(yǎng)基 :蛋白胨 10g/L，酵母提取物 5g/L， NaCl 10g/L，瓊脂粉 15g/L（固體培養(yǎng)基），用 10 mol/L的 NaOH調節(jié) pH為 ，高壓滅菌； 氨芐青霉素貯存液：濃度 50100mg／ mL； 含有抗菌素的 LB平板培養(yǎng)基：將配置好的 LB固體培養(yǎng)基高壓滅菌后，冷卻到 60度左右，加入氨芐青霉素（終濃度為 50181。直接用低濃度的 EB進行染 色，可確定 DNA在膠中的位置。在一定的電場強度下， DNA分子的遷移率取決于核酸分子本身的大小和構象。 影響核酸限制性內切酶活性的因素 ： DNA的純度；
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