如何申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金-文庫(kù)吧資料
2025-05-19 03:17本頁(yè)面
【正文】 。 2)檢測(cè)基因 C、 D、 E的表達(dá)情況 ， 進(jìn)一步佐證所構(gòu)建的菌株為需要的菌株 。 研究?jī)?nèi)容 (三 )：體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證感受態(tài)缺陷菌不能發(fā)生轉(zhuǎn)化 ， 且熒光表達(dá)的確可報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生 。 2) 設(shè)計(jì) cinA基因下游的 PCR引物 ， 構(gòu)建含有 cinA基因下游序列的熒光質(zhì)粒 (pEVP4)。 研究?jī)?nèi)容 (二 )：構(gòu)建可被熒光報(bào)告是否發(fā)生感受態(tài)的菌株。 C、 D、 E的中游 PCR引物，構(gòu)建含有 C、 D、 E中游基因序列的 pEVP3質(zhì)粒。 確定研究目標(biāo)、內(nèi)容的依據(jù)： 回答一個(gè)科學(xué)問(wèn)題； 根據(jù)研究周期、資助強(qiáng)度來(lái)確定。 撰寫(xiě)要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成； 與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。 2） 細(xì)菌感受態(tài)形成與轉(zhuǎn)化過(guò)程相關(guān) 。 文獻(xiàn)回顧不能回避?chē)?guó)內(nèi)外最新研究進(jìn)展。 參考文獻(xiàn)必須引用近年的文獻(xiàn)。 文字表達(dá)要精雕細(xì)琢，避免假大空。 ，可能會(huì)導(dǎo)致外源基因的整合，使肺炎鏈球菌的生物性狀發(fā)生改變，這也可能與其致病相關(guān)，本研究探討轉(zhuǎn)化過(guò)程對(duì)于肺炎鏈球菌致病能力的影響，為進(jìn)一步深入理解細(xì)菌的致病機(jī)理提供新的依據(jù)。通過(guò)體內(nèi)毒力實(shí)驗(yàn)及體外粘附實(shí)驗(yàn)比較其與野生菌株的致病能力，以確定自然條件下形成的感受態(tài)與細(xì)菌致病的關(guān)系。而已 有文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng) 進(jìn)入感受態(tài)后，可啟動(dòng)一些蛋白包括自溶素的表達(dá) [9]，而自溶素是 子 ,當(dāng)其被激活后可釋放細(xì)胞壁毒力因子和溶血素；最新研究發(fā)現(xiàn)，有三個(gè)可被感受態(tài)刺激蛋白（ Csp）誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白基因變異時(shí)，肺炎鏈球菌的毒力減弱 [10]。 問(wèn)題是肺炎鏈球菌致病是否與環(huán)境因素誘導(dǎo)其感受態(tài)的形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)？從我們目前掌握的資料來(lái)看，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)到類(lèi)似報(bào)道或想法。 肺炎鏈球菌在正常情況下并不致病， 40%的健康人咽喉部都有寄生 [2]，其只是在一定條件下引起疾病，如病毒引起上呼吸道感染時(shí)、小兒高燒時(shí)常轉(zhuǎn)為肺炎。 例如：蛋白質(zhì)的融合表達(dá)，理論上可以實(shí)現(xiàn)融合， 但存在“活性、表達(dá)載體選擇、純化”等問(wèn)題。 新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 對(duì)擬采用的技術(shù)方法進(jìn)行介紹和分析。 圍繞關(guān)鍵問(wèn)題， 詳細(xì)論述 國(guó)內(nèi)外以往的研 究結(jié)果、當(dāng)前的現(xiàn)狀及今后的發(fā)展趨勢(shì)。 從疾病切入， 簡(jiǎn)要論述 國(guó)內(nèi)外研究成果， 并引出當(dāng)前的熱點(diǎn)研究方向。 對(duì)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀只是簡(jiǎn)單羅列，缺乏歸納分析， 缺乏邏輯性和針對(duì)性 總結(jié)與表達(dá)不夠 。 國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀分析（綜述） 存在問(wèn)題： 文獻(xiàn)復(fù)習(xí)不夠，對(duì)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏真正了解， 提出的問(wèn)題別人已解決 低水平重復(fù) 。而最新的肺炎鏈球菌多價(jià)結(jié)合疫苗的特異性和有效性遠(yuǎn)遠(yuǎn)未達(dá)到令人滿(mǎn)意的程度 [3]。 在 70年代，未經(jīng)治療肺炎球菌感染死亡率為 3035%[1]，經(jīng)幾十年的研究，其感染引起的菌血癥死亡率仍高達(dá) 2530%[2]。 盡管肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化機(jī)制尚不十分清楚， 但其過(guò)程大致可分為 6個(gè)階段： 1）肺炎鏈球菌被誘導(dǎo)成為感受態(tài)； 2）外來(lái) DNA吸附于細(xì)菌壁上； 3）核酸酶與外來(lái) DNA結(jié)合； 4）核酸酶降解其中一條鏈，使之成為單鏈（ ssDNA）； 5） ssDNA被攝入細(xì)菌胞內(nèi) 6）進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的 ssDNA以同源重組的方式整合于肺炎鏈球菌的染色體上。 細(xì)菌轉(zhuǎn)化不僅是許多重要生命現(xiàn)象的起始和源頭，轉(zhuǎn)化機(jī)理的研究也一直是生命科學(xué)中一個(gè)非常重要的問(wèn)題。已發(fā)現(xiàn)有五種細(xì)菌可以在自然狀態(tài)下產(chǎn)生感受態(tài)而發(fā)生轉(zhuǎn)化： 肺炎鏈球菌 (， )、枯草桿菌（ ）、流感嗜血桿菌（ ）、血鏈球菌（ ）和淋病奈瑟氏菌（ ）， 其中肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化效率最高 ,轉(zhuǎn)化的結(jié)果是細(xì)菌的遺傳特征發(fā)生變化，表現(xiàn)出與親代不同的遺傳性狀。 而細(xì)菌基因的轉(zhuǎn)移包括結(jié)合（ conjugation） 、 轉(zhuǎn)導(dǎo) （ transduction） 、融合 （ fusion） 及轉(zhuǎn)化 （ transformation）四種方式 ， 我們這里所要討論的是轉(zhuǎn)化 。
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