【正文】 抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過(guò)酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來(lái)判斷樣本中相應(yīng)的抗體和 /或抗原的存在。若該診斷試劑沒(méi)有國(guó)家 — 9— 標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 每一批酶聯(lián)免疫類檢測(cè)試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨 床試驗(yàn)、自測(cè)及注冊(cè)檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗(yàn)用數(shù)量和留樣數(shù)量。試劑盒各組分應(yīng)留樣， 2 8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時(shí)作 37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)定量檢測(cè)試劑，同時(shí)應(yīng)分析其線 性相關(guān)系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括陰 /陽(yáng)性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。半成品檢驗(yàn)，一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品。 （四）質(zhì)量控制 （ 1）半成品抽樣 檢驗(yàn)人員按試劑的批號(hào)，根據(jù)抽樣申請(qǐng)單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各 — 8— 組分，作號(hào)標(biāo)記、待檢。 分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要求進(jìn)行。 應(yīng)對(duì)包被過(guò)程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗(yàn)、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、 pH 值）、包被過(guò)程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時(shí)間等）、包被均一性檢驗(yàn)、干燥過(guò)程的監(jiān)控等。不同批號(hào)的板條不能混用。 包被前應(yīng)對(duì)酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號(hào)、數(shù)量、標(biāo)識(shí)。對(duì)于定量檢測(cè)試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。若陰性、陽(yáng)性對(duì)照或其他液體組分涉及生物安全性問(wèn)題，制備時(shí)應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實(shí)驗(yàn)室完成。 （三）試劑盒各組分的生產(chǎn) 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過(guò)程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過(guò)產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過(guò)程來(lái)保證其質(zhì)量符合規(guī)定。如該產(chǎn)品具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安 全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 （ 3）其他材料 包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密 封塑料袋、說(shuō)明書(shū)、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 CV 值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi) CV≤ 5％，批間 CV≤ 10％。②吸附能力和精密性采用合適的方法進(jìn)行檢驗(yàn)?；瘜W(xué)原材料在購(gòu)入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。 3.化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測(cè)、溶液 pH 值 、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)?，均?yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原輔材 — 5— 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（ 2021 年版）》分析純級(jí)別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。（ 3）酪蛋白： 應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 總蛋白中的牛血清白蛋白（ BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95%。 溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18 26℃時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)≤ 15 分鐘， pH值應(yīng)為 。 球蛋白含量：取待測(cè)血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于 %氯化鈉溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測(cè)定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。無(wú)菌試驗(yàn)：將血清直接 37℃放臵 7 天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或 — 4— 沉淀。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合 2021年版的《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的 標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 （ 5）功能性實(shí)驗(yàn) 功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。 （ 4）效價(jià) 效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。 （ 2）純度和分子量 主要經(jīng) SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。 ：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測(cè)有效。 、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 — 2— 術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。其他酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。 本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注 冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。 、１ mn09４錄記儀測(cè)檢疫免聯(lián)酶用：果結(jié)察觀 ? 第二篇：酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 1 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對(duì)酶聯(lián)免疫類檢測(cè)試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。時(shí)小 1℃７３置放 ,升微 00２孔每， GgＩ兔抗羊酶物化氧過(guò)根辣加 ?、８ .2 同滌洗 ?、 9。 、６。 、 ℃ 73，升微 002 液閉封加 ?４、洗滌同 2.、 5℃ 73．照對(duì)液釋稀作時(shí)同。 驟步作操、四 ??包被抗原 :用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋，一般為1～ 1０微克 /孔，每孔加２ 00 微升， 3７℃溫育 1小時(shí) 后， 4℃冰箱放置１６～ 18小時(shí)。 鄰苯二胺溶液（底物 ):臨用前配 制０、 1Ｍ檸檬酸（ 1ｇ／100ml),６、 1ml0、２ MNa2HＰＯ４、１２ H2O( 163g／１ 00ml) 4mｌ ,蒸餾水 1５ ml,鄰苯二胺１ 0mg,溶解后 ,臨用前加 30%H２ O２４ 0微升。 稀釋液 :０、 0１ｍｏ l／Ｌ pH 4PＢ STween－ 20， 4℃，保存、 NaCｌ 8g，ＫＨ 2PO 2ｇ，Ｎ a2HPO 1２ H2O９ g， Twｅ en—２ 0,0、５ mｌ、蒸餾水加至 1000ｍｌ。儀器與材料 ?聚苯乙烯微量細(xì)胞培養(yǎng)板（平板， 40,9６孔 ).、 2儀測(cè)檢疫免聯(lián)酶 ?、 3 兔抗羊酶物化氧過(guò)根辣 ?IｇＧ，工作稀 釋度 1:１０ 00。量原抗知未 =差得量解降物底孔品樣與孔照對(duì)。原抗標(biāo)酶入加 ?３（ ,)2(抗測(cè)待與原抗標(biāo)酶入加 ? 原 。物底加 ?、 4。物合復(fù)體抗原抗體抗成形 ,體抗得得獲物動(dòng)種二第疫免原抗加 ?加酶標(biāo)抗抗體 (第二種動(dòng)物抗體得抗體） 。雙抗體夾心法測(cè)定 抗原合復(fù)體抗 原抗成形 ,原抗加 ?。?。量原抗＝量解降得物底 .物底加 ?2。A—— 為有色產(chǎn)物。就是 ELIＳＡ成敗得關(guān)鍵試劑 ,它不僅具有抗體抗原特異得免疫反應(yīng) ,還具有酶促反應(yīng) ,顯示出生物放