正交設(shè)計(jì)優(yōu)化蛹蟲草液體菌種培養(yǎng)基的研究-文庫吧資料
2024-09-05 11:04本頁面
【正文】 試驗(yàn)結(jié)果， 對(duì)蛹蟲草液體培養(yǎng)基成分進(jìn)行的四因素三水平的正交試驗(yàn) ，實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表 6。不同 氮 源濃度對(duì)蛹蟲草菌絲干重的影響試驗(yàn)結(jié)果見圖 4。而蛋白質(zhì)是細(xì)胞的主要組成成分，核酸是遺傳物質(zhì)，它們都是保持生命的基本物質(zhì)。因此，以蛹蟲草液體菌種菌絲體干重為指標(biāo)，最 適 的葡萄糖濃度為 20 g/L。 010 1 2 3 4葡萄糖濃度（ g/100m L ）菌絲體干重（g/100mL）菌絲體干重圖 2 不同濃 度的蛋白胨 對(duì)蛹蟲草菌絲生長(zhǎng)的影響 N1 N2 N3 N6 N4 N7 N9 N8 N5 8 從圖 3 可以看 出 ，當(dāng) 培養(yǎng)基 中 葡萄糖 濃度為 0 ~20 g/L時(shí) ，在此范圍內(nèi) ， 菌絲 體干重 隨著 葡萄糖濃度提高 而 逐漸提高， 呈遞增關(guān)系 ； 當(dāng)葡萄糖濃度為 20 g/L時(shí)，菌絲體干重得率最高，可達(dá)到 g/L。碳源不僅是食用菌合成菌體細(xì)胞的必不可少的原料，而且為微生物生長(zhǎng)、物質(zhì)合成提供能量?？梢哉f，沒有碳，就沒有生命。因此， 綜合 考慮 菌絲球的數(shù)量和直徑以及菌種形態(tài)，以 蛋白胨 濃度 為10 g/L（ N6）、 12 g/L（ N7）、 14 g/L（ N8）時(shí)的 液體菌種 較好 。從菌絲球大小來看，蛋白胨 濃度 為 0 g/L（ N1）、 10 g/L（ N6）、 12 g/L（ N7）、 14 g/L（ N8）時(shí)菌絲球體積較小且大小均勻。 表 5 不同培養(yǎng)液中菌絲球形態(tài)、大小及數(shù)量的比較 圖 1 不同濃 度的葡萄糖 對(duì)蛹蟲草菌絲生長(zhǎng)的影響 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 7 蛋白胨濃度 發(fā)酵液顏色 邊緣整齊度 菌絲球大小 （ mm） 菌絲球數(shù)量 (個(gè) /3 mL) N1 無色 不整齊 36 N 2 乳白 不整齊 29 N 3 白色 整齊 53 N 4 微 黃 整齊 60 N 5 淡黃 不整齊 67 N 6 黃 色 整齊 129 N 7 黃 色 整齊 136 N 8 黃 色 整齊 149 N 9 深 黃 不整齊 107 從表 5和圖 2可見 ， 在 氮 源 試驗(yàn) 中，以蛋白胨為氮源的濃度的菌種， 從菌絲球數(shù)量來看，蛋白胨 濃度 從 0 g/L（ N1）14 g/L（ N8） ,菌絲球數(shù)量基本呈遞增關(guān)系。 不同濃度梯度氮源培養(yǎng)結(jié)果及分析。 表 4 不同培養(yǎng)液中菌絲球形態(tài)、大小及數(shù)量的比較 葡萄糖濃度 發(fā)酵液顏色 菌絲球 邊緣整齊度 菌絲球大小 （ mm） 菌絲球數(shù)量 （個(gè) /3 mL） C1 無色 不整齊 14 C2 白色 不整齊 31 C3 微 黃 整齊 47 C4 淡黃 整齊 87 C5 淡黃 整齊 139 C6 淡黃 整齊 113 C7 黃 色 整齊 72 C8 黃 色 整齊 60 C9 深 黃 不整齊 41 從表 4和圖 1可以看出 ，在碳源 試驗(yàn)中， 當(dāng) 葡萄糖濃度為 20 g/L（ C5）時(shí) ，菌絲球大小均勻 ， 體積小而數(shù)量多 ，這樣的 液體菌種， 在接種后生長(zhǎng)點(diǎn)多 ，這是衡量液體菌種優(yōu)良性狀的重要標(biāo)志之一；而 當(dāng) 葡萄糖濃度為 0 g/L（ C1）時(shí) ， 菌絲球 數(shù)量太少且邊緣 不 整齊， 當(dāng)葡萄糖濃度為 5 g/L（ C2）時(shí) ，菌絲球體積太大，數(shù)量少， 當(dāng) 葡萄糖濃度為 40 g/L（ C9）時(shí) ，菌絲球大小 參差不齊 而且數(shù)量少， 其他處理菌絲球數(shù)量也較少， 它們都不適合做液體 菌種。 表 3 L9（ 34）正交試驗(yàn)因素及水平 水平 因素 A/葡萄糖 B/蛋白胨 C/ MgSO4（ g/L） D/KH2PO4(g/L) 1 1 1 6 2 2 2 3 3 3 2 結(jié)果與分析 不同碳氮源濃度對(duì)蛹蟲草菌絲球大小及數(shù)量的影響 不同濃度梯度碳源培養(yǎng)結(jié)果 振蕩培養(yǎng) 5 d后，蛹蟲草在不同葡萄糖濃度的培養(yǎng)基上的培養(yǎng)結(jié)果見 表 4和圖1。 菌絲體干 重（ g/100 mL） = m2（ g） m1（ g） 液體培養(yǎng)基最佳配方的篩選試驗(yàn) 根據(jù)碳、氮源單因素篩選試 驗(yàn)結(jié)果和菌絲球大小及數(shù)量的測(cè)定結(jié)果，以選出的最 適 葡萄糖濃度和氮源蛋白胨濃度以及無機(jī)鹽 KH2PO4和 MgSO4為試驗(yàn)因素，設(shè)計(jì) L9 （ 34）正交試驗(yàn) ， 正交試驗(yàn)因素及水平見表 3，配制 9種培養(yǎng)基，每組試驗(yàn) 設(shè) 3次重復(fù) 。 菌絲體干重的測(cè)定 [13] 先將烘干的平板稱取重量 mL，將分離出的菌絲體放入平板中，于干燥箱中進(jìn)行烘干，起始溫度為 35 ℃ ，每隔 1 h升高 5 ℃ ，最高溫度 不超過 50 ℃ 。 蛹蟲草菌絲體干重的測(cè)定 菌絲體的提取工藝 發(fā)酵醪 → 真空抽濾 → 菌絲體 → 干燥 在真空抽濾機(jī)上放上干凈的濾布，開啟抽濾機(jī) ， 將 發(fā)酵醪 倒在濾布上 進(jìn)行 抽濾。 蛹蟲草液體菌種數(shù)量、大小測(cè)定 [1112] 振蕩培養(yǎng)的培養(yǎng)液， 24 h后開始產(chǎn)生菌絲球， 48 h后每天觀測(cè)記錄菌絲球大小及數(shù)量。 48 h以后每天觀察 菌絲 的生長(zhǎng)狀況。 然后置于恒溫?fù)u床中進(jìn)行振蕩培養(yǎng) 。 接種過程中嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)程進(jìn)行操作 。 表 2 氮源培養(yǎng)基配方 （單位： g/L） 試驗(yàn)
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