【正文】 。n 總之，由于實(shí)際情況較復(fù)雜，在方法驗(yàn)證過程中，不提倡教條地去進(jìn)行方法驗(yàn)證。在方法驗(yàn)證內(nèi)容之間也存在較多的關(guān)聯(lián)性，可以相互補(bǔ)充。因此不論從研發(fā)角度還是評價(jià)角度，方法驗(yàn)證均注重整體性和系統(tǒng)性。如雜質(zhì)限度試驗(yàn)一般需要驗(yàn)證專屬性和檢測限，而對于精密度、線性、定量限等涉及定量測定的項(xiàng)目，則一般不需要進(jìn)行驗(yàn)證。六、對方法驗(yàn)證的評價(jià)n（一）有關(guān)方法驗(yàn)證評價(jià)的一般考慮n 總體上，方法驗(yàn)證應(yīng)圍繞驗(yàn)證目的和一般原則來進(jìn)行，方法驗(yàn)證內(nèi)容的選擇和試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案應(yīng)系統(tǒng)、合理，驗(yàn)證過程應(yīng)規(guī)范嚴(yán)謹(jǐn)。該驗(yàn)證指標(biāo)的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。重復(fù)性測定可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)，如制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，或100％的濃度水平，用至少測定6次的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。取樣測定次數(shù)應(yīng)至少6次。n（五）精密度n 精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。如不能測得雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子，可在線測定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列檢測器測定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計(jì)算雜質(zhì)含量（自身對照法）。n雜質(zhì)定量試驗(yàn)n 雜質(zhì)的定量試驗(yàn)可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定。試驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，即測定9次，報(bào)告已知加入量的回收率（％）或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。一定的準(zhǔn)確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項(xiàng)目均需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度，如含量測定、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。n（四）準(zhǔn)確度n 準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。20％。對于釋放度，如規(guī)定限度范圍為，從1小時后為20％至24小時后為90％，則驗(yàn)證范圍應(yīng)為0～110％。n溶出度或釋放度對于溶出度，范圍應(yīng)為限度的177。n制劑含量均勻度范圍應(yīng)為測試濃度的70％～130％。n 范圍應(yīng)根據(jù)劑型和（或）檢測項(xiàng)目的要求確定。范圍通常用與分析方法的測試結(jié)果相同的單位（如百分濃度）表達(dá)。范圍是規(guī)定值，在試驗(yàn)研究開始前應(yīng)確定驗(yàn)證的范圍和試驗(yàn)方法。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，并說明依據(jù)。可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質(zhì)濃度系列進(jìn)行測定，至少制備5個濃度。線性是定量測定的基礎(chǔ)，涉及定量測定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量試驗(yàn)和含量測定均需要驗(yàn)證線性。n 必要時進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。n 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法進(jìn)行比較，對比兩種方法測定的結(jié)果。n含量測定n 含量測定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果?；?qū)⒐┰嚻酚脧?qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個數(shù)和量。n 在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。n雜質(zhì)檢查n作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機(jī)溶劑等。n鑒別反應(yīng)n 鑒別試驗(yàn)應(yīng)確證被分析物符合其特征。n 通常，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定方法中均應(yīng)考察其專屬性。（二）分析方法n 分析方法是為完成上述各檢測項(xiàng)目而設(shè)定和建立的測試方法。n 定量測定包括含量測定、制劑的溶出度測定等，由于此類項(xiàng)目對準(zhǔn)確性要求較高，故所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準(zhǔn)確度和線性。用于限度試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專屬性和檢測限。n 雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)等。例如，采用高效液相色譜法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行不同要求的方法驗(yàn)證，前者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性，而后者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性、準(zhǔn)確度、定量限。n 方法驗(yàn)證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢測項(xiàng)目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點(diǎn)確定。方法驗(yàn)證是藥物研究過程中的重要內(nèi)容。n 方法驗(yàn)證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組成部分。方法驗(yàn)證的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。為達(dá)到控制質(zhì)量的目的，需要多角度、多層面來控制藥品質(zhì)量，也就是說要對藥物進(jìn)行多個項(xiàng)目測試，來全面考察藥品質(zhì)量。本文譯自第13版日本藥局方附錄參考資料3所載內(nèi)容。它與為了提高分析方法的精度進(jìn)行重復(fù)分析時的重復(fù)次數(shù)不同。一般以β表示，也叫第二過失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說的假陰性率。一般以α表示，也叫第一過失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說的假陽性率。試驗(yàn)方法應(yīng)包括樣品的制備、規(guī)定值、分析方法等。分析方法驗(yàn)證中所述改變實(shí)驗(yàn)室是指試驗(yàn)者、裝置以及試藥的批號等試驗(yàn)條件發(fā)生變化。適應(yīng)性的研究結(jié)果在分析方法中以表示分析條件的有效數(shù)字或注意事項(xiàng)的形式得以體現(xiàn)。例如，反應(yīng)的pH值、溫度、室間及試藥的量等分析條件在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)改變時，對測定值的穩(wěn)定性進(jìn)行研究討論。類型Ⅲ需做含量測定和溶出度試驗(yàn)，即對藥品中的成分進(jìn)行測定(成分包括穩(wěn)定劑、添加劑等)和藥品有效性試驗(yàn)。類型Ⅰ需做鑒別試驗(yàn)，即對藥品中的主要成分及其特征進(jìn)行鑒別。應(yīng)該指出，這僅是一個原則，評價(jià)分析方法所必需的驗(yàn)證參數(shù)將隨分析方法的特點(diǎn)及試驗(yàn)?zāi)康亩淖儭?0%左右，對范圍的上下限值及范圍中央值附近的樣品進(jìn)行精度、真度及線性的研究討論。對于上述具有線性關(guān)系的分析方法則指：具有一定精度和準(zhǔn)確度，并且使線性關(guān)系成立的被測物質(zhì)上下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。通常，采用5個不同量(濃度)的樣品作線性關(guān)系的研究。 評價(jià)方法：準(zhǔn)備一系列不同濃度(量)的被測樣品，按照分析方法的操作步驟進(jìn)行測定，用測定值得到的回歸方程及相關(guān)系數(shù)對線性關(guān)系進(jìn)行評價(jià)。分析方法的定量限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。例如，根據(jù)定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出定量限界。定量限界所述樣品測定值的精度，以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，一般為10%。分析方法的檢出限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。例如，根據(jù)檢出限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出檢出限界。 評價(jià)方法：通常以消費(fèi)者危險(xiǎn)率及生產(chǎn)者危險(xiǎn)率在5%以下來規(guī)定檢出限界。 檢出限界(Detection Limit) 定義：檢出限界是指樣品中所含的被測物質(zhì)可被檢出的最低量或濃度。例如，分析方法的專屬性可以通過比較A為僅含被測物質(zhì)樣品(陽性對照)；B為含有制劑的其他各組成成分及不純物或分解產(chǎn)物中添加被測物質(zhì)的樣品；C為不含被測物質(zhì)，僅含制劑的其他組分、不純物及分解產(chǎn)物的樣品(陰性對照)，根據(jù)A、B、C三種樣品的分析結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。如果分析方法的專屬性有個別缺陷，可以用其他方法加以補(bǔ)充。通常是以室內(nèi)(間)的再現(xiàn)精度作為方法取舍的依據(jù)。各水平的精度以偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、偏差的90%置信區(qū)間以及與其相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的區(qū)間來表示。如果同時做兩個水平以上的精度評價(jià)時，可以采用諸如單因素方差分析等實(shí)驗(yàn)方法，但為了正確得出分析方法的精度，必須有足夠的實(shí)驗(yàn)次數(shù)、分析條件的水平數(shù)及實(shí)驗(yàn)室數(shù)。 評價(jià)方法：首先，要保證精度研究所用樣品的數(shù)量和均勻性。室內(nèi)再現(xiàn)精度(Intermediateprecision)：指同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)日期、裝置、器具以及試藥的