【正文】 。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。2）預(yù)制梯度等密度離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。根據(jù)離心原理，可設(shè)計多種離心方法，常見下列三大類型：。離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。通常所使用的離心機根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機、高速離心機和超速離心機三類2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（可用離心機中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對分子質(zhì)量等性質(zhì)。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：離心技術(shù)的工具離心機（centrifuge）是實施離心技術(shù)的裝置。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機械損傷。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。血漿的主要功能是運載血細(xì)胞，同時也是運輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試免疫檢驗輔導(dǎo)：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。找不到精子必須離心后檢驗，仍然找不到精子；方可報告無精。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽踊顒忧闆r，精子密度（個/毫升），精液液化時間（標(biāo)本取出到精液液化的時間），不動精子（個/高倍視野）等。復(fù)檢內(nèi)涵應(yīng)包據(jù)：對血細(xì)胞分析儀測定的全部結(jié)果進(jìn)行評估，必要時包括原標(biāo)本重查，或重新用人工復(fù)查等。由于沒有復(fù)檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異常淋巴細(xì)胞、瘧原蟲，還有EDTA依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應(yīng)該引起我們深思。1989年Coulter公司制定了復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)查了11個床位及性質(zhì)不同的醫(yī)療單位，它們均使用該公司的三分群血細(xì)胞分析儀，根據(jù)該公司的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，其復(fù)檢率為15%～60%，平均為40%，使手工分類減少40～85%，平均減少了60%，也就是說用節(jié)省下來的時間好好為40%需要分類的病人服務(wù)?？傊?xì)胞分析儀的結(jié)果僅僅是屬于過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。一、為什么要復(fù)檢？考試用書 血細(xì)胞分析儀測定原理雖有不同，但它的各種項目的閾值是人設(shè)定的，而且是固定的，可是病人血細(xì)胞變化是千姿百態(tài)，有部分細(xì)胞難以識別或認(rèn)錯干擾其它細(xì)胞計數(shù)，如有核紅細(xì)胞可影響白細(xì)胞計數(shù)；細(xì)胞碎片、血小板聚集可影響血小板計數(shù)等。有的單位即使復(fù)檢，也沒有復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，隨心所欲，其復(fù)檢率只有百分之幾，這顯然是不負(fù)責(zé)任的。但是我們應(yīng)該認(rèn)識到血細(xì)胞分析儀還是一個過篩工具，至今最先進(jìn)的全自動血細(xì)胞分析儀還不能完全取代人工檢查，仍然有部分標(biāo)本需要復(fù)檢。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓(xùn)練的技術(shù)人員、觀察和解釋結(jié)果易受主觀因素的影響，結(jié)果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應(yīng)用。從WB確認(rèn)試驗結(jié)果看出，初篩試驗盡管選擇質(zhì)量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現(xiàn)，必須通過確認(rèn)試驗才能得出準(zhǔn)確結(jié)果。先用HIV1/2混合型試劑進(jìn)行檢測，如果呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應(yīng)，則報告HIV1抗體陽性；如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為HIV抗體檢測結(jié)果不確定。國內(nèi)常用的確認(rèn)試驗方法是WB.（一）免疫印跡實驗（WB）免疫印跡實驗是廣泛用于許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學(xué)診斷而言，它是首選的用以確認(rèn)HIV抗體的確認(rèn)實驗方法，WB的檢測結(jié)果常常被作為鑒別其他檢驗方法優(yōu)劣的“金標(biāo)準(zhǔn)”。在一些特殊情況下，當(dāng)抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對非典型血清學(xué)反應(yīng)樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試血液檢驗復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：HIV抗體常見檢測方法目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養(yǎng)、核酸檢測和抗原檢測?！菊⒖贾怠空Ｈ松χ笖?shù)》1.【臨床意義】，表明完全無生育能力。這時有嚴(yán)重ABO同種免疫史的孕婦非分泌型的胎兒血型鑒定提供了可能，也為在位于ABO基因部位的遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷提供了可能，而可不必考慮胎兒是否為分泌型。已知由A基因產(chǎn)生的N乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶能將N乙酰氨基半乳聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成A血型物質(zhì)，B基因產(chǎn)生的D半乳糖轉(zhuǎn)移酶將D半乳糖聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成B血型物質(zhì)。實驗中要注意控制溫度，以免由于抗血清中冷凝集素未被完全吸收而造成結(jié)果判斷錯誤。即選擇抗血清與2%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液恰能產(chǎn)生4+凝集的最高稀釋度，這樣才能在加入羊水后將相應(yīng)抗體中和掉不再出現(xiàn)4+凝集。置室溫30min，低速離心1分鐘觀察有無凝集。一、ABH分泌型血型的預(yù)測本試驗是根據(jù)羊中分泌的血型物質(zhì)可將相應(yīng)抗血清中抗體中和原理設(shè)計的?？捎猩贁?shù)空泡。核形狀及結(jié)構(gòu)與1型相同或更不殊途同歸，染色質(zhì)較粗糙致密。染色質(zhì)細(xì)致呈網(wǎng)狀排列，可見1～2個至發(fā)生母細(xì)胞化的結(jié)果。胞質(zhì)豐富，染深藍(lán)色，含空泡或呈泡沫狀。核圓形、腎形或分葉狀、常偏位。Downey將其按形態(tài)特征分為三型：1型（空泡型）：最多見。許多蛋白質(zhì)變性時被破壞嚴(yán)重，不能恢復(fù)，稱為不可逆性變性。例如，前述的核糖核酸酶中四對二硫鍵及其氫鍵。反之，注意防止蛋白質(zhì)變性就能有效地保存蛋白質(zhì)制劑。物理因素可以是加熱、加壓、脫水、攪拌、振蕩、紫外線照射、超聲波的作用等；化學(xué)因素有強酸、強堿、尿素、重金屬鹽、十二烷基磺酸鈉（SDS）等。變性蛋白質(zhì)和天然蛋白質(zhì)最明顯的區(qū)別是溶解度降低，同時蛋白質(zhì)的粘度增加，結(jié)晶性破壞，生物學(xué)活性喪失，易被蛋白酶分解。例如：無酶催化的反應(yīng) RX+H2O→ROH+Hx 慢 有酶存在時 RX+E桹H→ROH+EX快 EX+H2O→E桹H+HX快2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試臨床檢驗技師綜合輔導(dǎo)：蛋白質(zhì)的變性天然蛋白質(zhì)的嚴(yán)密結(jié)構(gòu)在某些物理或化學(xué)因素作用下，其特定的空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而導(dǎo)致理化性質(zhì)改變和生物學(xué)活性的喪失，如酶失去催化活力，激素喪失活性稱之為蛋白質(zhì)的變性作用。酶的活性中心具有某些氨基酸殘基的R基團，這些基團往往是良好的質(zhì)子供體或受體，在水溶液中這些廣義的酸性基團或廣義的堿性基團對許多化學(xué)反應(yīng)是有力的催化劑。三、酶作用高效率的機理詳細(xì)機制仍不太清楚，主要有下列四種因素： 酶可以將它的底物結(jié)合在它的活性部位由于化學(xué)反應(yīng)速度與反應(yīng)物濃度成正比，若在反應(yīng)系統(tǒng)的某一局部區(qū)域，底物濃度增高，則反應(yīng)速度也隨之提高，此外，酶與底物間的靠近具有一定的取向，這樣反應(yīng)物分子才被作用，大大增加了ES復(fù)合物進(jìn)入活化狀態(tài)的機率。例如前述的H2O2酶的例子，可以顯著地看出，酶能降低反應(yīng)活化能，使反應(yīng)速度增高千百萬倍以上。催化劑的作用，主要是降低反應(yīng)所需的活化能，以致相同的能量能使更多的分子活化，從而加速反應(yīng)的進(jìn)行。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試臨床檢驗技師綜合輔導(dǎo)：酶的作用機理一、酶作用在于降低反應(yīng)活化能在任何化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)物分子必須超過一定的能閾，成為活化的狀態(tài)，才能發(fā)生變化，形成產(chǎn)物。所選用的檢測方法的總誤差必須在臨床可接受的水平范圍內(nèi)（也就是允許總誤差，TEa）。體內(nèi)和個體間變異分量表達(dá)為變異系數(shù)（分別為CVI和CVG）2012醫(yī)學(xué)檢驗考試質(zhì)量管理與控制輔導(dǎo)：準(zhǔn)確度的總誤差概念測定結(jié)果與真值的差異是隨機誤差（BE）和系統(tǒng)誤差（SE）的總和，即總誤差（TE）。生物學(xué)變異或稱生理變異（CVB），包括個體內(nèi)變異（CVI）和個體間變異（CVG），也就是所說的生理波動。棘形、靶形紅細(xì)胞的出現(xiàn)更具有臨床診斷價值。因此來自腎臟的紅細(xì)胞，除外形發(fā)生圖相變化外，其體積的大小也有顯著性差異。以上畸形紅細(xì)胞、均一型紅細(xì)胞和混合型紅細(xì)胞3型結(jié)果均有趨向性，不存在可逆行，當(dāng)然結(jié)合臨床癥狀觀察更為客觀?；渭t細(xì)胞各種變化形狀分為7～8種。根據(jù)畸形和均一型紅細(xì)胞所占比例的不同，可分為畸形為主的混合型紅細(xì)胞血尿（畸形紅細(xì)胞》50%）和以均一型紅細(xì)胞為主的混合型紅細(xì)胞血尿（均一型紅細(xì)胞所占》50%）兩種。紅細(xì)胞大小一致，變化均一，圖相在兩種以內(nèi)，多數(shù)為正常及桑椹樣紅細(xì)胞，部分可出現(xiàn)影子紅細(xì)胞。⑧其他形狀，如細(xì)胞膜破裂成各種形狀，馬蹄形、月牙型等。⑥芽孢樣紅細(xì)胞。④紅細(xì)胞大小不等，大者為正常的1～2倍，小者為其1/2，顏色變淺。②古錢樣紅細(xì)胞。⑦手鐲樣紅細(xì)胞：胞體較大，呈明顯內(nèi)外兩層膜改變。⑤大紅細(xì)胞：細(xì)胞體增大，中心淡，無雙盤凹陷感。③古錢樣紅細(xì)胞：形似中國古錢幣。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試臨檢基礎(chǔ)知識輔導(dǎo)：尿紅細(xì)胞形態(tài)分析的臨床意義Birech報告畸形紅細(xì)胞分類 紅細(xì)胞大小不等，形態(tài)異常多樣，歸為以下7種［6］：①酵母菌樣紅細(xì)胞：在紅細(xì)胞外膜有小泡突出或細(xì)胞呈霉菌孢子樣改變。因抗體主要存在于血清中，所以將體外發(fā)生的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)稱為血清學(xué)反應(yīng)或血清學(xué)試驗。在體內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)是體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)作用。2012年醫(yī)學(xué)檢驗知識講解：血清學(xué)試驗的概念抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)的抗體之間發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。以上務(wù)因素均可引起的嗜酸性粒細(xì)胞增多。此外，實驗癥明它還參加與對嚅蟲的免疫反應(yīng)。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試血液檢驗輔導(dǎo)：嗜酸性粒細(xì)胞的計數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞起源于骨髓內(nèi)CFUs。血清學(xué)試驗還廣泛應(yīng)用于生物活性物質(zhì)的超微定量、物種及微生物鑒定和分型等方面。實驗室只要備有各種診斷試劑盒和相應(yīng)的設(shè)備，即可對多種疾病作出確切診斷。2012年醫(yī)學(xué)檢驗知識講解：血清學(xué)試驗的應(yīng)用血清學(xué)試驗在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已廣泛應(yīng)用，可直接或間接從傳染病、寄生蟲病、腫瘤、自身免疫病和變態(tài)反應(yīng)性疾病的感染組織、血清、體液中檢出相應(yīng)的抗原或抗體，從而作出確切診斷。如急性心肌梗死、右心功能不全、多發(fā)性肌炎、肌營養(yǎng)不良、急性腎盂腎炎、大葉性肺炎、支氣管炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、潰瘍性結(jié)腸炎、細(xì)菌性或阿米巴性肝膿瘍等疾病、瘧疾、血吸蟲病，外傷、手術(shù)等均可造成血清ALT和AST增高。腎小管破壞致腎濃縮功能逐漸減退均可引起多尿。2）代謝性疾?。喝缣悄虿。―M）引起的多尿，主要機制是滲透性利尿所致，患者尿比密、尿滲透壓均增高。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試臨檢基礎(chǔ)輔導(dǎo)：病理性多尿1）內(nèi)分泌疾病：如尿崩癥，指抗利尿激素（ADH）嚴(yán)重分泌不足或缺乏（中樞性尿崩癥），或腎臟對ADH不敏感或靈敏度減低（腎源性尿崩癥），患者24h尿量可多達(dá)5～15L，尿滲透壓在50～200mmol/L之間。③血容量減低：重癥肝病、低蛋白血癥引起全身水腫。、妊娠脂肪肝、心肌梗死、做導(dǎo)管肝動脈栓塞術(shù)后，mAST也可升高2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試臨檢基礎(chǔ)輔導(dǎo)：腎前性少尿腎前性少尿：由于各種原因造成腎血流量不足，腎小球濾過率減低所致；如①腎缺血：各種原因引起的休克、過敏、失血過多、心力衰竭、腎動脈栓塞、腫瘤壓迫等。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗基礎(chǔ)輔導(dǎo)：mAST的意義mAST可協(xié)助判斷肝實質(zhì)損害的嚴(yán)重程度?，F(xiàn)代科學(xué)研究，證明精液根本就不是所謂男性的精華所在。古代太監(jiān)，因為睪丸被割掉，連一個精子都沒有。古人因為愚昧無知，所以有“一滴精，十滴血”，“精盡人亡”之類的錯誤說法。如果結(jié)婚一年以后，女方仍然沒有懷孕，那時才是應(yīng)該看醫(yī)生，找出不孕的原因。因此，如果吞食了精液，是絕對不可能導(dǎo)致女人懷孕的。男性疾病不是從表面研究精液，就可以診斷出來的。凡精液呈鮮紅、淡紅、暗紅或醬油色并含有大量紅細(xì)胞者稱為血精，可能由于前列腺和精非特異性炎癥、生殖系結(jié)核、腫瘤或結(jié)石所致黃色或棕色膿性精液見于前列腺炎和精囊炎。從實驗室培養(yǎng)中觀察到，精液胞漿素能殺死葡萄球茵、鏈球菌等多種致病菌。精液內(nèi)含有一種可與青霉素相媲美的抗菌物質(zhì)———精液胞漿素。若一次射精量超過8毫升，精子被稀釋，也不利于生育。精漿是精子活動的介質(zhì)，并可中和陰道的酸性分泌物，以免影響精子活力。有生育力的正常男性一次射精最為26毫升。精液是堿性，女性生殖器內(nèi)部則為酸性?；尉討?yīng)總數(shù)的10%以下。正常的精液呈乳白色、淡黃色或者無色，每毫升為精液中的精子數(shù)一般在6千萬至2億個。精漿里含有果糖和蛋白質(zhì)，是精子的營養(yǎng)物質(zhì)。精子由睪丸產(chǎn)生。它除了含有水、果糖、蛋白質(zhì)和脂肪外，還含有多種酶類和無機鹽。正常的精子活動力為2～3級的精子》=40%～50%.精子形態(tài)：畸形精子小于50%.分析男性生育能力不能單從精液的一項指標(biāo)定論，應(yīng)對精子數(shù)量、活力、活動率、液化時間、畸形率等多方面進(jìn)行綜合能力分析。精液呈弱堿性，～。每次排精量為2～6毫升，常受排精次數(shù)與頻率的影響。如節(jié)欲時間長者，可呈淡黃色，若出現(xiàn)鮮紅色。只要有體液的交流，異性戀的性行為也是可以傳播性病的。肛交是一種危險的性行為，因為肛門附近的組織比較容易受傷害，如果有傷口破裂，那么帶有艾滋病病毒的精液就可以通過傷口傳染給被肛交的一方。因此，很多性病可以通過精液傳染給對方。精液取到后應(yīng)盛放在干燥、清潔的瓶內(nèi)，并立即送檢。2012年醫(yī)學(xué)檢驗知識講解：精液檢查的要求如果取精液檢查，應(yīng)在檢查前5天內(nèi)不排精。五、成績評定要求評分標(biāo)