【正文】 2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能：紅細(xì)胞膜含脂類40%，蛋白質(zhì)50。當(dāng)紅細(xì)胞膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺陷時(shí)，導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度降至50%的時(shí)間（AGLT50）明顯縮短。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：酸化甘油溶血試驗(yàn)（1）原理：當(dāng)甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時(shí)，可阻止其中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，使溶血過(guò)程緩慢。③抗原性質(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況；④抗體效價(jià)的滴定。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。②抗原、抗體相對(duì)分子量的分析；抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量影響。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：①抗原、抗體是否存在及其相對(duì)含量。平板法：是在瓊脂板上相距3～5mm打一對(duì)孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)也分為試管法和平板法。（4）注意雙環(huán)現(xiàn)象（出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分）。（2）每次測(cè)定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線。平板法：%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴(kuò)散，24～48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測(cè)定環(huán)的直徑或面積計(jì)算標(biāo)本中待測(cè)抗原的濃度。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：?jiǎn)蜗驍U(kuò)散試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測(cè)抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類一般正常。輕度貧血時(shí)紅細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯異常，中度以上貧血時(shí)紅細(xì)胞體積減小，中心淡染區(qū)擴(kuò)大，嚴(yán)重時(shí)紅細(xì)胞可呈環(huán)狀，并有嗜多色性紅細(xì)胞及點(diǎn)彩紅細(xì)胞增多。（3）一種細(xì)胞可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，不同類型的細(xì)胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細(xì)胞因子。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子共同特性（1）化學(xué)性質(zhì)大都為糖蛋白。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子的類型細(xì)胞因子分類按其作用大致可分為免疫調(diào)節(jié)因子和免疫調(diào)控因子兩大類。將選擇培養(yǎng)基或鑒別培養(yǎng)基上的可疑菌落分別接種克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）和尿素靛基質(zhì)動(dòng)力（MIU）復(fù)合培養(yǎng)基管中，并根據(jù)其六項(xiàng)反應(yīng)結(jié)果，將細(xì)菌初步定屬。大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，大多數(shù)菌株是人類和動(dòng)物腸道正常菌群。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師考試綜合輔導(dǎo)資料：埃希菌屬的概念埃希菌屬包括5個(gè)種，即大腸埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌和傷口埃希菌。嚴(yán)重者可發(fā)展為急性腎衰竭。（4）腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：又稱產(chǎn)志賀樣毒素（VT）大腸埃希菌（SLTEC或UTEC），其中O157：H7可引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征（HUS）。（2）腸致病型大腸埃希菌（EPEC）：主要引起嬰兒腹瀉。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的腸道感染埃希菌屬的腸道感染：致病性大腸埃希菌有下列五個(gè)病原群。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目CDC將大腸埃希氏菌O157：H7列為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目EHEC的血清型》50種，最具代表性的是O157：，O157：H7占腸道分離病原菌的第二或第三位，是從血便中分離到的最常見的病原菌，分離率占血便的40%，8三個(gè)月O157：H7感染的發(fā)生率最高。結(jié)果：陰性，無(wú)鐮變細(xì)胞。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床經(jīng)驗(yàn)表明，TNF對(duì)某些腫瘤具有明顯的抑制作用，但副作用大，建立合理的用藥方案及治療措施，可望降低用量，減輕副作用，達(dá)到最佳治療效果。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)：TNF對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有殺傷或抑制作用，敏感性因腫瘤細(xì)胞類型而異；TNF呈劑量依賴性地抑制病毒介導(dǎo)的細(xì)胞病變的發(fā)展，對(duì)RNA病毒和DNA病毒均有抑制作用；TNF能夠增強(qiáng)T細(xì)胞產(chǎn)生以IL2為主的淋巴因子，提高IL2R的表達(dá)水平，促進(jìn)T細(xì)胞增殖；還能促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和產(chǎn)生抗體；TNF有中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化作用，并使之活化和脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)；TNF可刺激成骨細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性，誘導(dǎo)成骨細(xì)胞吸收骨質(zhì)、使軟骨細(xì)胞進(jìn)行軟骨更新，抑制軟骨形成。（4）鹽類結(jié)晶及酸堿度：生理性尿混濁的主要原因是含有較多的鹽類，常見有：①尿酸鹽結(jié)晶：在濃縮的酸性尿遇冷時(shí)，可有淡紅色結(jié)晶析出。（2）飲水及尿量：大量飲水、尿量多則尿色淡；尿色深見于尿量少、飲水少或運(yùn)動(dòng)、出汗、水分丟失。臨床應(yīng)用僅作參考2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的質(zhì)量控制，鹽類結(jié)晶析出、尿膽原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰懰?、?xì)菌增殖和腐敗、尿素分解，均可使尿顏色加深、混濁度增高。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的方法學(xué)評(píng)價(jià)尿色和透明度判斷，受主觀因素影響。膽汁淤積性肝硬化ALT活性較高可與黃疸平行，AST升高不及ALT顯著。①液相酶免疫測(cè)定：其測(cè)定靈敏度與放射免疫方法相近，近年有取代放射免疫方法的趨勢(shì)。②克隆酶供體免疫分析：DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶（如βD半乳糖苷酶）分子的兩個(gè)片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨(dú)均無(wú)酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試綜合知識(shí)輔導(dǎo)：均相酶免疫測(cè)定均相酶免疫測(cè)定：屬于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析方法。（2）油鏡：選擇滿意的片膜段，觀察200～500個(gè)細(xì)胞，按細(xì)胞的種類、發(fā)育階段分別計(jì)算，并計(jì)算它們各自的百分率；仔細(xì)觀察各系統(tǒng)的增生程度和各階段細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的變化。髂骨后上棘此處骨皮質(zhì)薄，骨髓腔大，進(jìn)針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位。骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個(gè)方面考慮：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位應(yīng)淺表、易定位；③應(yīng)避開重要臟器。此法不僅可作為一個(gè)光化學(xué)分析方法獨(dú)立使用，而且可作為一個(gè)有特色的光檢測(cè)器，與氣相色譜儀聯(lián)用，或作為一種試樣原子化裝置，用于原子吸收光譜法中。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的應(yīng)用火焰分光光度法主要用于堿金屬和堿土金屬元素的定量分析。由于當(dāng)時(shí)使用照相方法記錄譜線，致使準(zhǔn)確定量分析工作較為繁瑣。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的簡(jiǎn)史，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。不同的燃料氣體和助燃?xì)饨M分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學(xué)火焰能達(dá)到的最高溫度和化學(xué)作用性質(zhì)（見表）。反射鏡起聚光作用。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的儀器原始的火焰光度計(jì)由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測(cè)器組成。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復(fù)性也較差，不能用于常規(guī)檢驗(yàn)。磷鉬酸法是血清中無(wú)機(jī)磷與鉬酸鹽結(jié)合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍(lán)進(jìn)行比色測(cè)定。試驗(yàn)也證明5個(gè)小時(shí)以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗(yàn)結(jié)果。叢玉隆說(shuō)，假如一個(gè)糖尿病人，沒(méi)吃vc以前的尿糖是2個(gè)加號(hào)，吃了9片vc后，就可能是1個(gè)加號(hào)，甚至?xí)霈F(xiàn)陰性結(jié)果。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。叢玉隆再仔細(xì)檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時(shí)，患者正輸著vc，結(jié)果終于弄明白了，原來(lái)是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗(yàn)試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗(yàn)結(jié)果。急診醫(yī)生一看檢驗(yàn)報(bào)告馬上產(chǎn)生疑問(wèn)：怎么會(huì)是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個(gè)人早就死了。第一次遇到尿糖檢測(cè)失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗(yàn)科的檢驗(yàn)員。若不能立即測(cè)定，應(yīng)將血?dú)鈽?biāo)本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測(cè)時(shí)間也不宜超過(guò)2小時(shí)。未充分動(dòng)脈化的毛細(xì)管血的PO2偏低，對(duì)PH、PCO2和HCO3—的測(cè)定結(jié)果影響不明顯。因技術(shù)條件限制，不能反復(fù)動(dòng)脈穿刺時(shí)，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細(xì)管采取動(dòng)脈化毛細(xì)血管的血亦可。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動(dòng)脈，次選股動(dòng)脈小兒：首選用顳淺動(dòng)脈或頭皮小動(dòng)脈，嚴(yán)格消毒后，用肝素化的5號(hào)頭皮針連接2ml注射器，待動(dòng)脈血流至注射器乳頭時(shí)，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針?biāo)芰宪浌苁孜矁啥耍ǎ?，然后拔出針頭立即混勻送檢。每抽血?dú)馇?，?ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤(rùn)整個(gè)針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過(guò)程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來(lái)混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。通過(guò)逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過(guò)6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過(guò)程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來(lái)混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。通過(guò)逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過(guò)6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。兩類離心機(jī)由于用途不同，故其主要結(jié)構(gòu)也有差異。離心機(jī)的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機(jī)和分析型離心機(jī)。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的主要作用提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。將新鮮血液離心，使血細(xì)胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽離子、激素以及二氧化碳。經(jīng)三次取樣化驗(yàn)，結(jié)果仍然找不到精子方可確認(rèn)無(wú)精子癥。見不動(dòng)精子，須染色方可區(qū)分：不活動(dòng)的精子、死精子、未成熟精子等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：精液檢查的具備條件受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過(guò)程后，禁房事5－7天（上次排精到取標(biāo)本間隔時(shí)間至少不得少于100小時(shí)）；備大口有蓋清潔干燥容器一個(gè)，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標(biāo)本離體時(shí)間；貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗(yàn)室，并向檢驗(yàn)員提供標(biāo)本取出時(shí)間。二、復(fù)檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一有人認(rèn)為“復(fù)檢”就是要在鏡下重新進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)而己，這是偏面的。最近日本名古屋大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬醫(yī)院報(bào)告，他們用SysmexXE2100（五分類）%.再次證明當(dāng)前最先進(jìn)血細(xì)胞分析儀也不能完全替代人工檢查。根據(jù)1987年我赴日本考察時(shí)，日本對(duì)三分群儀器白細(xì)胞分類是不收費(fèi)的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報(bào)告。尤其是白細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類與血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞分類有本質(zhì)上的不同，三分群僅僅是根據(jù)細(xì)胞大小來(lái)分而己，即使先進(jìn)的五分類也與形態(tài)學(xué)也有很大差異，又如中性粒細(xì)胞毒性病變、變異淋巴細(xì)胞、瘧原蟲等臨床需要的指標(biāo)無(wú)法顯示；有的幼稚細(xì)胞、有核紅細(xì)胞也不能區(qū)分；各參數(shù)之間有時(shí)還存在互相干擾。現(xiàn)就此問(wèn)題談?wù)剛€(gè)人看法。據(jù)我所知有的醫(yī)院有了血細(xì)胞分析儀，把人工操作的工具、試劑全丟棄，基本上不再?gòu)?fù)檢了。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：重視血常規(guī)的復(fù)檢工作目前血細(xì)胞分析儀己經(jīng)普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對(duì)提高血細(xì)胞常規(guī)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，減輕工作人員勞動(dòng)強(qiáng)度起促進(jìn)作用。（二）免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）IFA法經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、快速，曾被FDA推薦用于WB不確定樣品的診斷。如果出現(xiàn)HIV2型的特異性指示條帶，需用HIV2型免疫印跡試劑再做HIV2的抗體確認(rèn)試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)，報(bào)告HIV2抗體陰性；呈陽(yáng)性反應(yīng)則報(bào)告HIV2抗體血清學(xué)陽(yáng)性，并將樣品送國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸序列分析，WB的敏感性一般不低于初篩實(shí)驗(yàn)，但它的特異性很高，這主要是基于HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測(cè)針對(duì)不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。確認(rèn)試驗(yàn)流程：有HIV1/2混合型和單一的HIV1或HIV2型。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)免疫印跡