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食品廠微生物實驗室基本要求(參考版)

2024-10-21 04:23本頁面
  

【正文】 常常為突發(fā)和。臨床表現(xiàn):潛伏期:蜱叮咬至疾病發(fā)作之間的時間為潛伏期,一般為3~6天。(2)傳染途徑:人的感染是因為蜱的叮咬或密切接觸感染動物或患者。病毒基因組為負鏈分節(jié)段RNA。鼠帶毒率調(diào)查是常用的監(jiān)測手段之一,用于流行性出血熱鼠帶毒率調(diào)查標本制備的主要方法為鼠肺冰凍切片,鼠帶毒率調(diào)查的常用方法為免疫熒光法。診斷:流行性出血熱對于明確疫源地類型、選擇所用疫苗的種類、指導防治策略等都非常重要。(2)接種疫苗:目前我國所使用的流行性出血熱的疫苗是細胞培養(yǎng)滅活疫苗,可以分為3種類型(家鼠型、野鼠型、家鼠、野鼠雙價混合苗)經(jīng)過近幾年的應(yīng)用已證明在預防流行性出血熱方面有效。流行性出血熱主要以腎臟損害為特征,故又稱之為腎綜合征出血熱。臨床表現(xiàn):潛伏期:一般為7~14天。(2)傳染途徑:接觸帶病毒的宿主動物及其排泄物可以造成感染。流行病學:(1)宿主動物與傳染原:在我國流行性出血熱主要傳染源和病毒宿主為嚙nie齒動物(黑線姬鼠和褐家鼠)。中國目前發(fā)現(xiàn)的流行性出血熱主要有2種類型:HTNV型(野鼠型)和SEOV型(家鼠型)。傳染源的管理。有四種主要的臨床表現(xiàn):高熱、出血、肝腫大和循環(huán)衰竭。主要診斷依據(jù)為出血、休克、口唇發(fā)紺和血壓低或測不到。登革熱主要以高熱、頭痛、肌肉和關(guān)節(jié)痛為主,與登革熱的主要區(qū)別是有無嚴重出血。中國從嬰兒到老人均可發(fā)病,以兒童和青壯年患病率較高。中國主要為人蚊人循環(huán)。流行病學:(1)宿主動物與傳染原:中國DH/DHF的傳播媒介主要為埃及伊蚊和白紋wen伊蚊,這些蚊種主要生活在家庭儲水容器中。登革熱(DH)和登革出血熱(DHF)是由4個血清型病毒引起的兩種不同臨床類型的急性傳染病。預防:疫苗預防注射。(3)人群易感性:除人、馬和豬外,通常不呈現(xiàn)臨床癥狀。(2)傳染途徑:流行性乙型腦炎是一種自然疫源性疾病,豬是傳播乙型腦炎病毒(乙腦病毒)的主要動物宿主。C6/36細胞適合于乙型腦炎病毒的分離和培養(yǎng)。黃病毒科能夠致人疾病的病毒有登革熱病毒、丙型肝炎病毒和乙型腦炎病毒。研究證明,這種奇特疾病的病原,即不是病毒,也不是類病毒,大體上是由蛋白質(zhì)組成,目前稱之為阮病毒。在人和動物中存在著一類被稱為亞急性海綿樣腦病的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如瘋牛病。蟲媒病毒是由媒介昆蟲作為病毒的傳遞者的一類病毒,由蟲媒病毒引起的疾病即為蟲媒病毒,如乙型腦炎、新疆出血熱、登革熱、黑熱病等。弱毒(活)疫苗分解成(弱毒疫苗、弱活疫苗)。(3)病毒病的免疫預防:決定疫苗免疫效果的關(guān)鍵因素是疫苗本身的質(zhì)量。聚丙烯酰胺凝膠電泳也可簡稱為PAGE(PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳測雜交)DNA限制性內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列?!坝糜谠\斷目的”雜交雙方是已知序列的病毒探針和待測樣品中的病毒核酸,如果是陽性結(jié)果說明病毒感染的存在。PCR(聚合酶鏈反應(yīng))反應(yīng)中,引物1又稱Watson引物,是與模板正鏈互補的寡核苷酸鏈。末端堿基可以不與模板DNA匹配而呈游離狀態(tài),因此對引物539。端堿基與模板一定要配對,對引物539。目前常用的逆轉(zhuǎn)錄酶(RTPCR)包括MMV和AMV。為此,所用的試劑和用品均需要進行無Rnase處理,(Rnas必須使用無熱原質(zhì)水制備)如加入RNA酶抑制劑或高壓滅菌。首先必須提取病毒RNA。(核酸分子電泳的指示劑用溴化乙錠EB)。PCR(聚合酶鏈反應(yīng))可以在數(shù)小時內(nèi)對僅有的幾個拷貝的基因放大數(shù)百萬倍,使PCR(聚合酶鏈反應(yīng))擴增結(jié)果在瓊脂糖凝膠電泳后形成明顯可見的DNA帶。由于引物是按照與擴增區(qū)段兩端序列彼此互補的原則設(shè)計的,因此每一條新生鏈的合成都是從引物的退火結(jié)合位點開始,并沿著相反鏈延伸。病毒病的分子生物學診斷:分子生物學診斷的特異性取決于核酸序列的特異性,病毒病的分子生物學診斷,包括對病毒核酸和蛋白質(zhì)的測定。膠體金免疫檢測技術(shù)優(yōu)于ELISA(酶鏈免疫吸附實驗)法和免疫熒光法的最主要一點是肉眼直接判定結(jié)果。在病毒病的診斷中,也常將這一原理用于判斷病毒病的感染狀況,但常常需要采集恢復期和急性期雙份血清進行抗體效價的比較如IgG水平4倍或4倍以上增加具有血清學診斷意義??箄鏈抗體特異性結(jié)合IgM,可以應(yīng)用于IgM捕獲ELISA。酶免疫測定試驗包括:①間接法(測抗體)、②雙抗體夾心法(測抗原)、③IgM捕獲ELISA(酶鏈免疫吸附實驗)、④競爭法。(5)酶免疫技術(shù):以酶作為標記物,通過化學方法將其與抗原或抗體共價結(jié)合,形成酶標記物,可與被檢的抗原或抗體起反應(yīng),形成酶標記免疫復合物。免疫熒光技術(shù)具有抗原抗體反應(yīng)的特異性和染色技術(shù)的快速性,并可在細胞水平上進行抗原定位,故在病毒學研究和病毒病的診斷中都是一種應(yīng)用很廣的方法。(3)補體結(jié)合試驗:一個抗體分子與抗原結(jié)合后,可以導致數(shù)百個補體分子的激活,呈現(xiàn)一定程度的放大作用,所以補體結(jié)合試驗是一個比較敏感的方法,一般用于人及動物血清中特異性抗體的定量檢測(補體結(jié)合試驗),也常用于新分離病毒的鑒定。用枸櫞酸鈉配置的阿氏液具有抗紅細胞凝集作用,用于血凝和血凝抑制試驗中配置紅細胞懸掖。(2)血凝和血凝抑制試驗:許多病毒能夠凝集某些種類動物的紅細胞,病毒凝集的紅細胞種類隨病毒種類的不同而不同。(1)中和試驗:動物在受到病毒感染后,在體內(nèi)產(chǎn)生抗體,如果該抗體能與相應(yīng)的病毒粒子特異性地結(jié)合,使后者喪失感染力,這種抗體就成為中和抗體。(5)病毒的保存:分離或鑒定后的病毒經(jīng)過冷凍干燥后可以長期保存。(3)病毒蝕(shi)斑技術(shù)(又稱空斑):病毒蝕(shi)斑是指病毒在已長成的單層細胞上形成的局限性病灶,主要用于病毒的純化或病毒懸液中感染病毒含量的測定。(1)病毒增殖的判定:(略)(2)細胞病變(CPE):大部分病毒在敏感細胞系均可出現(xiàn)CPE(細胞病變),CPE(細胞病變)可以表現(xiàn)為嚴重的細胞破壞、細胞腫大、顆粒增多、細胞融合成合胞體或無明顯的細胞變化等。呼吸道合胞病毒可以引起嬰幼兒產(chǎn)生嚴重的下呼吸道感染。呼吸道合胞病毒屬于副粘病毒科、肺病毒屬。動物患口蹄疫后其生產(chǎn)性能急劇下降;對疫區(qū)要進行封鎖,封鎖期間疫區(qū)內(nèi)正常的畜產(chǎn)品交易和生產(chǎn)活動都不能進行;對確診為口蹄疫的動物要立即捕殺、銷毀??谔阋咭坏┌l(fā)生則呈暴發(fā)性流行,可以跳躍式傳播,在適合的氣候條件下還可通過風媒的途徑傳播。目前脊髓灰質(zhì)炎在世界上許多國家,包括中國,已經(jīng)消失。脊髓灰質(zhì)炎病毒屬于小核糖核酸病毒科,腸道病毒屬的病毒,主要經(jīng)過糞口途徑傳播。診斷:測定HIV感染的最簡便方法是測定HIV抗體。T4淋巴細胞在免疫應(yīng)答過程中起調(diào)節(jié)作用,與①單核巨噬細胞、②細胞毒性T細胞③NK細胞、④B細胞等均有密切關(guān)系,所以T4細胞耗竭、功能下降,必將使免疫系統(tǒng)的多種功能發(fā)生缺陷。致病機制:HIV對CD+4細胞有選擇性的親嗜性。(AIDS)病原學:人Ⅰ型免疫缺陷病毒(HIV1)和人Ⅱ型免疫缺陷病毒(HIV2)引起人的獲得性免疫缺陷綜合征,簡稱艾滋?。ˋIDS)。逆轉(zhuǎn)錄病毒獨特的基因組結(jié)構(gòu)和生命周期使逆轉(zhuǎn)錄病毒在分子生物學研究和基因治療中其到了基因轉(zhuǎn)移載體的重要作用。能夠引起腫瘤的逆轉(zhuǎn)錄病毒在文獻中被稱之為RNA腫瘤病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒病毒的基因組是單股、正鏈、線性RNA的二聚體,病毒粒子中的RNA不具備感染性。人皰疹病毒共有5型,皰疹病毒4型,即EB病毒(EBV),EBV除引起人類皮膚和黏膜的皰疹樣病變外,還與人類鼻咽癌有密切關(guān)系。皰疹病毒的基因可以整合于細胞的基因組內(nèi),成為細胞DNA的一部分,長遠地復制下去,形成長期潛伏感染狀態(tài)。A群:凡在體外培養(yǎng)時,容易從細胞內(nèi)釋放到營養(yǎng)液中的病毒為A群;B群:病毒同細胞緊密結(jié)合很難釋放到營養(yǎng)液中為B群,又名細胞結(jié)合性病毒。皰疹病毒是一群較大的有囊膜的雙鏈DNA病毒。輪狀病毒復制方式不同于其他呼腸孤病毒,它不是通過吞飲作用進入細胞,而是通過胞漿膜直接進入胞漿,胰蛋白酶對病毒進行處理可以使病毒變?yōu)橛懈腥拘?。診斷:輪狀病毒感染的可靠的實驗室診斷依賴于檢出輪狀病毒或抗原,進行該項診斷應(yīng)收集糞便。(腸道病毒)。流行病學:輪狀病毒宿主范圍甚廣,已知的有人及多種動物。根據(jù)輪狀病毒RNA11個節(jié)段的聚丙烯酰胺電泳圖形不同,可以將輪狀病毒進行分型和鑒定。病原學:輪狀病毒屬于呼腸孤病毒科、輪狀病毒屬,是各種幼齡動物非細胞性腹瀉的主要病原之一。實驗室診斷狂犬病最具特性的診斷依據(jù)是—感染神經(jīng)原內(nèi)的Negri小體(內(nèi)基氏小體),最常見于海馬及小腦普爾金耶組織的神經(jīng)細胞內(nèi),是狂犬病病毒的集落。我國于1981年開始用地鼠腎細胞疫苗,近幾年又開始應(yīng)用Vero(非洲綠猴腎)細胞狂犬病疫苗。狂犬病的被動免疫制劑有動物源抗狂犬病病毒的精制血清和人源狂犬病免疫球蛋白。控制傳染源主要是家養(yǎng)犬的免疫。(3)人群易感性:人及所有溫血動物皆能感染。流行病學:(1)宿主動物與傳染源:狂犬病毒幾乎可以感染所有溫血動物,但造成人類感染的主要傳染源是帶病毒犬。血清5型又稱為狂犬病相關(guān)病毒,野外分布的主要為血清4型。從感染動物或患者中發(fā)現(xiàn)的狂犬病毒又可稱之為野毒株或街毒;狂犬病毒街毒經(jīng)過系列傳代適應(yīng)特定宿主后即為固定毒。病原學:狂犬病毒屬于彈狀病毒科、狂犬病毒屬。天花是痘病毒科、正痘病毒屬的天花病毒引起的一種傳播迅速的烈性傳染病。流行性腮腺炎是由副粘病毒科、副粘病毒屬的腮腺炎病毒引起。馬爾堡病毒也可引起人的嚴重出血熱,在人人或猴人之間傳播。根據(jù)埃博拉病毒的抗原性的差異,又可將埃博拉病毒分為3個血清型,不同血清型的埃博拉病毒其致病型有很大的差異。自然條件下,人和猴都能發(fā)生嚴重感染并死亡。(4)埃博拉病毒最初流行于扎伊爾北部的埃博拉河流域而命名為埃博拉病毒。病原學:絲狀病毒科、絲狀病毒屬包括兩種病毒,即①埃博拉病毒和②馬爾堡病毒。診斷:用于流感病毒分離與鑒定的標本應(yīng)取自患者鼻咽分必物。(3)人群易感性:3個型流感病毒沒有共同抗原,都能感染人;但甲型流感病毒的感染范圍很廣,容易引起大規(guī)模流行。乙型流感病毒能引起人的呼吸道感染,丙型流感病毒也是感染人的病毒。流感病毒血凝素變異性很強是造成流感病毒易發(fā)生抗原變異的主要原因。流感病毒基因組片段具有共同的特點:所有的RNA階段具有相同的5’端。按流感病毒核蛋白與基質(zhì)蛋白抗原性的不同,流感病毒又可分為甲、乙、丙3型。慢性HDV感染與多種肝臟疾病密切相關(guān),包括重癥肝炎、肝硬化、丁型肝炎和慢性活動性肝炎。HDV感染的指標是血液和體液中可測得HDV抗原。丁型肝炎病毒(HDV):丁型肝炎病毒(HDV)為缺陷型RNA病毒,必須借助乙型肝炎表面抗原(HBsAg)包裹才能成為感染性病毒顆粒,常與HBV(乙型肝炎)同時或重疊感染。②傳染途徑:約60%的丙型肝炎病例都是由血液接觸引起的,而非腸道感染。(2)流行病學:①宿主動物與傳染源:人是丙型肝炎的自然宿主和貯zhu存者。病毒粒子含有一單股正鏈RNA。防止血源性污染和傳播。血清中HBV(乙型肝炎病毒)DNA聚合酶的存在,表明HBV的感染處于病毒活動復制期。HBeAg(乙肝e抗原):在乙型肝炎潛伏期的后期出現(xiàn)并且HBeAg的存在表示HBV(乙型肝炎病毒)的存在。HBsAg(乙型肝炎表面抗原):①HBsAg可誘導機體產(chǎn)生乙型肝炎表面抗體(抗—HBs),具有抗HBV(乙型肝炎病毒)感染的作用 ②HBsAg與病毒的中和性作用有關(guān)。(3)診斷:HBV(乙型肝炎病毒)侵入機體后進入血液循環(huán),主要在白細胞中進行繁殖。(2)流行病學:HBV(乙型肝炎病毒)的唯一宿主是人。甲型肝炎實驗室診斷方法主要依賴于檢測患者血清中的抗HAV(甲型肝炎病毒)的IgM。甲型肝炎病毒:甲型肝炎病毒(HAV)可以引起甲型肝炎。預防:目前尚無特異性疫苗進行接觸前的主動預防。常常為突發(fā)和急性,發(fā)熱(39℃~41℃)、寒戰(zhàn)、頭痛、風濕痛、腰痛和上腹部痛等。臨床表現(xiàn):潛伏期:蜱叮咬至疾病發(fā)作之間的時間為潛伏期,一般為3~6天。(2)傳染途徑:人的感染是因為蜱的叮咬或密切接觸感染動物或患者。病毒基因組為負鏈分節(jié)段RNA。鼠帶毒率調(diào)查是常用的監(jiān)測手段之一,用于流行性出血熱鼠帶毒率調(diào)查標本制備的主要方法為鼠肺冰凍切片,鼠帶毒率調(diào)查的常用方法為免疫熒光法。診斷:流行性出血熱對于明確疫源地類型、選擇所用疫苗的種類、指導防治策略等都非常重要。(2)接種疫苗:目前我國所使用的流行性出血熱的疫苗是細胞培養(yǎng)滅活疫苗,可以分為3種類型(家鼠型、野鼠型、家鼠、野鼠雙價混合苗)經(jīng)過近幾年的應(yīng)用已證明在預防流行性出血熱方面有效。流行性出血熱主要以腎臟損害為特征,故又稱之為腎綜合征出血熱。臨床表現(xiàn):潛伏期:一般為7~14天。(2)傳染途徑:接觸帶病毒的宿主動物及其排泄物可以造成感染。流行病學:(1)宿主動物與傳染原:在我國流行性出血熱主要傳染源和病毒宿主為嚙nie齒動物(黑線姬鼠和褐家鼠)。中國目前發(fā)現(xiàn)的流行性出血熱主要有2種類型:HTNV型(野鼠型)和SEOV型(家鼠型)。傳染源的管理。有四種主要的臨床表現(xiàn):高熱、出血、肝腫大和循環(huán)衰竭。主要診斷依據(jù)為出血、休克、口唇發(fā)紺和血壓低或測不到。登革熱主要以高熱、頭痛、肌肉和關(guān)節(jié)痛為主,與登革熱的主要區(qū)別是有無嚴重出血。中國從嬰兒到老人均可發(fā)病,以兒童和青壯年患病率較高。中國主要為人蚊人循環(huán)。流行病學:(1)宿主動物與傳染原:中國DH/DHF的傳播媒介主要為埃及伊蚊和白紋wen伊蚊,這些蚊種主要生活在家庭儲水容器中。登革熱(DH)和登革出血熱(DHF)是由4個血清型病毒引起的兩種不同臨床類型的急性傳染病。預防:疫苗預防注射。(3)人群易感性:除人、馬和豬外,通常不呈現(xiàn)臨床癥狀。(2)傳染途徑:流行性乙型腦炎是一種自然疫源性疾病,豬是傳播乙型腦炎病毒(乙腦病毒)的主要動物宿主。C6/36細胞適合于乙型腦炎病毒的分離和培養(yǎng)。黃病毒科能夠致人疾病的病毒有登革熱病毒、丙型肝炎病毒和乙型腦炎病毒。研究證明,這種奇特疾病的病原,即不是病毒,也不是類病毒,大體上是由蛋白質(zhì)組成,目前稱之為阮病毒。在人和動物中存在著一類被稱為亞急性海綿樣腦病
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