【正文】 如果用一定方法將SRBC用其它抗原包被，則可檢查與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，這種非紅細(xì)胞抗體溶血空斑試驗(yàn)稱為空斑形成試驗(yàn)，它的應(yīng)用范圍。這種直接法所測的細(xì)胞為IgM生成細(xì)胞，其他類型Ig由于溶血效應(yīng)較低，不能直接檢測，可用間接檢測法，即在小鼠脾細(xì)胞和SRBC混合時，再加抗鼠Ig抗體（如兔抗鼠Ig），使抗體生成細(xì)胞所產(chǎn)生的IgG或IgA與抗Ig抗體結(jié)合成復(fù)合物，此時能活化補(bǔ)體導(dǎo)致溶血，稱間接空斑試驗(yàn)。由于脾細(xì)胞內(nèi)的抗體生成細(xì)胞可釋放抗SRBC抗體，使其周圍的SRBC致敏，在補(bǔ)體參與下導(dǎo)致SRBC溶血，形成一個肉眼可見的圓形透明溶血區(qū)而成為溶血空斑（plaque）。也有多種基因異常導(dǎo)致的血紅蛋白病，如HbE、Hb Constant Spring、Hb Lepore等。常見的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白病是因合成的珠蛋白的氨基酸序列改變而引起血紅蛋白功能或理、化性質(zhì)異常的疾病，如：引起血紅蛋白異常聚合的HbS病；不穩(wěn)定血紅蛋白癥、高鐵血紅蛋白血癥等。另外，也可見獲得性血紅蛋白病。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血紅蛋白病的定義與分類血紅蛋白病的定義與分類：血紅蛋白病是一組由于生成血紅蛋白的珠蛋白肽鏈（α、β、γ、δ）的結(jié)構(gòu)異?；蚝铣呻逆溗俾实母淖?，而引起血紅蛋白功能異常所致的疾病。：屏障作用和可變性；半透性；免疫性；受體特性：激素類受體、遞質(zhì)類受體、丙種球蛋白受體、病毒受體、EP0受體和鐵蛋白受體等。后者包括收縮蛋白、肌動蛋白、錨蛋白和區(qū)帶（～）等，即骨架系統(tǒng)，起支架作用，對維持紅細(xì)胞的形狀、穩(wěn)定性和變形性有重要作用。參考值：AGLT50大于l800s（30min）（2）臨床意義：減少見于遺傳性球形細(xì)胞增多癥（25～150s）、腎功能衰竭、慢性白血病、自身免疫性溶貧和妊娠婦女。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜脂質(zhì)減少?？贵w效價是抗原、抗體經(jīng)過自由擴(kuò)散形成沉淀線，出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價。如若兩者分子量相等，則形成直線。分子量小者，擴(kuò)散快，反之較慢。一般沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大，沉淀線靠近抗體孔，提示抗原量大。在相應(yīng)孔中加入抗原或抗體，待其自由擴(kuò)散后，抗原、抗體形成可見的沉淀線。試管法：在含有抗原的溶液和含有抗體瓊脂中間，加一層普通瓊脂，讓下層抗體和上層抗原向中間自由擴(kuò)散，在抗原、抗體濃度最適時形成沉淀線。（5）應(yīng)用單克隆抗體測量多態(tài)性抗原時，測定值偏低；用多克隆抗體測量單克隆病時，測定值偏高2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：雙向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)：在瓊脂內(nèi)抗原和抗體各自向?qū)Ψ綌U(kuò)散，在最恰當(dāng)?shù)谋壤幮纬煽乖贵w沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對比關(guān)系，可對抗原或抗體作出定性分析。（3）每次測定時必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。有兩種計算方法：l）Mancini曲線：適用大分子抗原的和長時間擴(kuò)散（》48h）的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c/d2=k.（其中c為抗原濃度 d為沉淀環(huán)直徑 k為常數(shù)）單向擴(kuò)散試驗(yàn)檢測時的注意點(diǎn)：（1）抗血清必須特異性強(qiáng)、效價高、親和力強(qiáng)，在良好條件下保存。試管法：%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，在抗原抗體比例恰當(dāng)位置形成沉淀環(huán)。血小板計數(shù)一般正常。網(wǎng)織紅細(xì)胞輕度增多或正常。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：血象特點(diǎn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)血象：血紅蛋白、紅細(xì)胞均減少，以血紅蛋白減少更為明顯。（2）細(xì)胞因子可以旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用。主要的細(xì)胞因子有：白細(xì)胞介素、干擾素、生長因子、趨化因子家族、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、轉(zhuǎn)化因子家族以及其他細(xì)胞因子等。（2）最后鑒定：腸桿菌科各屬細(xì)菌的最后鑒定是根據(jù)生化反應(yīng)的結(jié)果定屬、種，或再用診斷血清做凝集反應(yīng)才能作出最后判斷。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師考試綜合輔導(dǎo)資料：腸桿菌科的鑒定（1）初步鑒定：原則是：①確定腸桿菌科的細(xì)菌，應(yīng)采用葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)及氧化酶試驗(yàn)與弧菌科和非發(fā)酵菌加以鑒別；②腸桿菌科細(xì)菌的分群，多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)，將腸桿菌科的細(xì)菌分為苯丙氨酸脫氨酶陽性、葡萄糖酸鹽利用試驗(yàn)陽性和兩者均為陰性反應(yīng)三個類群；③選擇生化反應(yīng)進(jìn)行屬種鑒別。臨床最常見的是大腸埃希菌。（5）腸粘附（集聚）型大腸埃希菌（EAggEC）：也是新近報道的一種能引起腹瀉的大腸埃希菌。臨床特征為嚴(yán)重的腹痛、痙攣，反復(fù)出血性腹瀉，伴發(fā)熱、嘔吐等。（3）腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：可侵入結(jié)腸黏膜上皮，引起志賀樣腹瀉（粘液膿血便）。（1）腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）：引起霍亂樣腸毒素腹瀉（水瀉）。且0157是4歲以下兒童急性腎功衰的主要病原菌，所以CDC提出應(yīng)將大腸埃希氏菌0157：H7列為常規(guī)檢測項(xiàng)目。（2）臨床意義：陽性見于鐮狀細(xì)胞貧血（HbS病），HbBart、HbI病可見少量鐮狀細(xì)胞。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：紅細(xì)胞鐮變試驗(yàn)（1）原理：在低氧分壓條件下，HbS轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原狀態(tài)后溶解度降低，從而聚合成短棒狀凝膠使紅細(xì)胞變形，呈鐮刀狀。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究：由于TNF的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能，TNF療法的研究已被許多國家開展。②磷酸鹽或碳酸鹽結(jié)晶：尿呈堿性或中性時，可析出灰白色結(jié)晶。（3）藥物的影響：如服用核黃素、呋喃唑酮、痢特靈、黃連素、牛黃、阿的平使尿呈黃色或深黃色；番瀉葉、山道年等使尿呈橙色或橙黃色；酚紅、番瀉葉、蘆薈、氨基匹林、磺胺藥等使尿呈紅色或紅褐色。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識輔導(dǎo)：尿的生理性變化（1）代謝產(chǎn)物：生理性影響尿顏色主要是尿色素、尿膽素（URB）、尿膽原（URO）等。尿透明度還易受某些鹽類結(jié)晶的影響。肝硬化病變累及線粒體時，多數(shù)AST升高程度超過ALT。②固相酶免疫測定：如常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：肝硬化的臨床意義肝硬化代償期患者血清ALT可輕度增高或正常，失代償期ALT可持續(xù)升高。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試綜合知識輔導(dǎo)：異相酶免疫測定異相酶免疫測定：又分為液相和固相酶免疫測定。①酶增強(qiáng)免疫測定技術(shù)（EMIT）：了解其基本原理，反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓象的分析與報告骨髓象的分析與報告包括骨髓有核細(xì)胞增生程度、粒細(xì)胞與有核紅細(xì)胞比例、粒系統(tǒng)細(xì)胞改變、紅系統(tǒng)細(xì)胞改變、巨核系統(tǒng)細(xì)胞改變、淋巴系統(tǒng)細(xì)胞改變、單核系統(tǒng)細(xì)胞改變和其他血細(xì)胞改變。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓涂片的檢查骨髓涂片的檢查（1）普通光鏡低倍鏡檢驗(yàn)：判斷骨髓增生程度；估計巨核細(xì)胞系統(tǒng)增生情況；觀察涂片邊緣、尾部、骨髓小粒周圍，有無體積較大或成堆分布的異常細(xì)胞。臨床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、脛骨等處。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓標(biāo)本的采集選擇骨髓標(biāo)本的采集選擇骨髓標(biāo)本大部分采用穿刺法吸取。方法簡單迅速，組分影響較小，取樣量小，用一份溶液即可進(jìn)行多種元素分析，每毫升10微克濃度的鈉溶液也可測定。1935年制成第一臺火焰光譜光電直讀光度計，使得火焰光度法應(yīng)用范圍進(jìn)一步擴(kuò)大。并使用了參考元素技術(shù)。這是火焰光度法應(yīng)用中要選擇的關(guān)鍵條件?；鹧婀舛确ǔＳ玫幕鹧媸窃诖髿夂銐合陆?jīng)化學(xué)反應(yīng)而燃燒的。現(xiàn)代的火焰分光光度計的基本框圖（見圖）示意出：試樣溶液經(jīng)霧化后噴入火焰，溶劑在火焰中蒸發(fā)，鹽粒熔融，轉(zhuǎn)化為蒸氣，離解成原子（部分電離），再由火焰高溫激發(fā)發(fā)光，發(fā)射的光經(jīng)切光器調(diào)制，并由單色器（通常是光柵）分光，選擇待測波長譜線，經(jīng)光電轉(zhuǎn)換和電信號放大后檢出。酶法是一個偶聯(lián)反應(yīng)，參與反應(yīng)的酶有糖原磷酸化酶、葡萄糖磷酸變位酶及葡萄糖6磷酸脫氫酶，反應(yīng)中使NADP+還原成NADPH，形成NADPH在340nm波長下測定其吸光度，該方法不受有機(jī)磷酸酯的干擾。染料法如孔雀綠直接顯色測定法。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷測定的參考值參考值：血清磷：～2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷的測定方法血清無機(jī)磷的測定方法一般有磷鉬酸法、染料法和酶法。叢玉隆進(jìn)行的另一個實(shí)驗(yàn)證實(shí)，給健康人靜脈推注vc2000毫克，然后在不同時間段取尿，30分鐘后尿含vc600多毫克、1小時500多毫克、5小時后含幾十毫克（正常值），說明靜脈使用大劑量vc對糖尿病人的尿糖檢查干擾更大。一組人一天吃了9片vc，第二天尿含vc是300毫克。vc的影響到底有多大？叢玉隆再次做了試驗(yàn)，一組人一天吃3片vc（每片100毫克），第二天檢測結(jié)果是每毫升尿含vc30毫克。于是檢驗(yàn)科再次對病人的血樣化驗(yàn)，結(jié)果還是8毫克，叢玉隆仔細(xì)檢查了檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)設(shè)備，都沒發(fā)現(xiàn)問題，但檢驗(yàn)結(jié)果確實(shí)與病人實(shí)際病情不符。一天晚上急診科一患者化驗(yàn)的結(jié)果是血糖8毫克。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：VC影響血糖尿糖檢測解放軍總醫(yī)院檢驗(yàn)中心主任叢玉隆指出，維生素c（vc）可以還原尿糖檢測試劑中的酶，會導(dǎo)致尿糖檢測的結(jié)果失真，對于糖尿病患者來說，服用維生素要謹(jǐn)慎。三、采血后處理采血后針尖或毛細(xì)吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進(jìn)入，并立即充分混勻達(dá)到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細(xì)胞代謝耗氧，使PO2和PH值下降PCO2升高。動脈化毛細(xì)血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達(dá)到動脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細(xì)管吸?。ńㄗh采用廠家配套提供的專用毛細(xì)管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢。用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動脈，小嬰兒可用顳淺動脈取血，取完血一定要密封。抗凝劑少了會使血液凝集，堵塞血?dú)夥治鰞x的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會影響血?dú)夂碗x子的檢測結(jié)果，大劑量的抗凝劑會嚴(yán)重使離子鈣偏低，誤導(dǎo)臨床。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：動脈血?dú)鈽?biāo)本采集方法一、抗凝劑的配制首先推薦使用市場上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，%NS50ml+肝素鈉針劑2支（12500U）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲藏。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。2）預(yù)制梯度等密度離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。根據(jù)離心原理，可設(shè)計多種離心方法，常見下列三大類型：。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。2）預(yù)制梯度等密度離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。根據(jù)離心原理，可設(shè)計多種離心方法，常見下列三大類型：。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。通常所使用的離心機(jī)根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機(jī)、高速離心機(jī)和超速離心機(jī)三類2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（可用離心機(jī)中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對分子質(zhì)量等性質(zhì)。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的工具離心機(jī)（centrifuge）是實(shí)施離心技術(shù)的裝置。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。血漿的主要功能是運(yùn)載血細(xì)胞，同時也是運(yùn)輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。找不到精子必須離心后檢驗(yàn)，仍然找不到精子；方可報告無精。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽?，精子活動情況，精子密度（個/毫升），精液液化時間（標(biāo)本取出到精液液化的時間），不動精子（個/高倍視野）等。復(fù)檢內(nèi)涵應(yīng)包據(jù)：對血細(xì)胞分析儀測定的全部結(jié)果進(jìn)行評估，必要時包括原標(biāo)本重查，或重新用人工復(fù)查等。由于沒有復(fù)檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異