研發(fā)部崗前培訓課件(參考版)
2025-01-22 13:53本頁面
【正文】 培養(yǎng)基內青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位 慶大霉素：每毫升 100單位，方便、廣譜、穩(wěn)定 謝 謝！ 。目前已設計出許多種培養(yǎng)基，如TC19 MEM、 RPMI16 DMEM等 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質 優(yōu)點：標準化生產，組分和含量相對固定。成分復雜， 影響對某些實驗產物的提取和實驗結果的分析 。 CO2培養(yǎng)箱 ? CO2培養(yǎng)箱設定的條件為 37 ℃ ， 5％ CO2 ? 使用 CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細胞時應注意的問題： ① 用螺旋口瓶培養(yǎng)細胞時，需將瓶蓋微 松，以保證通氣 ② 保持培養(yǎng)箱內空氣干凈。 主要用干玻璃器皿消毒 濾 器：過濾除菌 ， 大多數培養(yǎng)用液 ， 如人工合成培養(yǎng)基 、 血清 、 酶液等均采用濾過法除菌 超凈工作臺：為細胞操作提供無菌環(huán)境 紫外燈：紫外線消毒 。細胞株潛伏期一般為 6～ 24小時 對數生長期： 細胞數隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進行實驗研究 停止期（平臺期）： 細胞長滿瓶壁后，細胞雖有活力但不再分裂 機制：接觸抑制、密度依賴性 細胞的生長過程 （三）氣體環(huán)境與 pH值 多數細胞生長需要 O2，閉合式單層細胞培養(yǎng)氧分壓1995 9975Pa 開放培養(yǎng)時（碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)），一般將細胞置于 95%空氣加 5%CO2混合氣體環(huán)境中 CO2的主要作用在于維持培養(yǎng)基的 pH 值，多數細胞的適宜 pH值為 – 原代培養(yǎng)細胞一般對 pH的變動耐受差；永生細胞和惡性腫瘤細胞耐受力強 總的說來，培養(yǎng)細胞耐酸性比耐堿性大一些 （四）體外培養(yǎng)細胞生存所需基本物質 六碳糖是主要的能源（葡萄糖、半乳糖） 1. 糖 2. 氨基酸 所有的細胞都需要谷氨酰胺，其所含的氨是核酸中嘌呤和嘧啶的來源；其它還有精氨酸、胱氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、組氨酸、酪氨酸等 培養(yǎng)細胞也需要維生素，如生物素、葉酸、泛酸、核黃素、硫胺素、胭酰胺等 3. 促生長因子 EGF, FGF, NGF, PDGF, EDGF等 激素：胰島素 ——促進細胞利用葡萄 糖和氨基酸 氫考 ——促進上皮細胞生長 4. 其它物質 基本元素：鉀、鈉、鈣、鎂、氮和磷 微量元素：鐵、鋅、硒等 （五）滲透壓 人血漿滲透壓約 290mOsm/kg，可視為培養(yǎng)細胞的理想滲透壓 鼠細胞滲透壓約 320mOsm/kg 大多數培養(yǎng)細胞的滲透壓在 260 mOsm/kg 320 mOsm/kg （六）培養(yǎng)基 按物質狀態(tài)：半固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基 按其來源： （ 1）合成培養(yǎng)基：根據已知細胞所需物質 的種類和數量嚴格配制而 （ 2）天然培養(yǎng)基：成分尚未搞清楚，如血清、 血漿等 （ 3）無血清培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基＋促生長物質 （七）附著底物 除少數懸浮型細胞外，絕大多數培養(yǎng)細胞需要合適的底物以附著其上
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1